Mischen Sie zunächst die berechnete Menge jedes Bakterienstamms auf insgesamt ca. 5 Millionen koloniebildende Einheiten pro Milliliter. Zentrifugieren Sie die Mischung bei 7.000 g für sieben Minuten bei vier Grad Celsius. Pipettieren Sie anschließend den Überstand vorsichtig heraus.
Suspendieren Sie das Pellet wieder in Hank's Balanced Salt Solution mit geringer Pufferkapazität und Glukose. Trennen Sie nun die Organchips, die die differenzierten menschlichen Vaginalepithelzellen enthalten, von den Pods. Stecken Sie den Ausgang des Basalkanals des Chips mit einer Pipettenspitze ein.
Geben Sie 200 Mikroliter antibiotikafreies Differenzierungsmedium in den Basalkanaleinlass, ohne den Pipettenkolben nach unten zu drücken. Lösen Sie die Pipettenspitze von der Pipette, so dass das Medium ungehindert durch den Kanal fließen kann. Pipettieren Sie anschließend 37 Mikroliter des bakteriellen Inokulums in den apikalen Kanaleinlass des Chips, während Sie aus dem Auslass aspirieren.
Ziehe an der Spitze. Verschließen Sie dann sowohl den Einlass als auch den Auslass des apikalen Kanals mit Pipettenspitzen. Für die Kontrollchips pipettieren Sie 37 Mikroliter Hank's Balanced Salt Solution mit geringer Pufferkapazität und Glukose in den apikalen Kanaleinlass.
Nachdem Sie alle Medien auf der Oberfläche des Chips angesaugt haben, legen Sie die Chips in eine 150-Millimeter-Petrischale. Kolonien von L.crispatus und G.vaginalis wurden innerhalb von 48 Stunden nach der Beschichtung nachgewiesen, was bestätigt, dass sich sowohl gesunde als auch dysbiotische Bakterien in die Vagina-Chips eingepflanzt haben. Der pH-Wert der mit L.crispatus inokulierten Vagina-Chips war ähnlich wie bei nicht geimpften Kontrollchips, und wenn sie mit G.vaginalis co-kultiviert wurden, zeigten sie einen signifikant erhöhten pH-Wert.
