Untersuchen Sie nach dem LCMS-Lauf von Pflanzenwurzelextrakten das Gesamtionenchromatogramm der Q1- und Q3-Scans, einschließlich des datenabhängigen Produktionenscans. Beobachten Sie die Muttermasse von reichlich vorhandenen Ionen mit tropanalkaloidähnlichen Eigenschaften, einschließlich einer Masse unter 500 Dalton für das positiv geladene Ion, typischerweise eine gerade Anzahl. Retentionszeiten zwischen zwei und 22 Minuten und Fragmente, die mit den Werten der Hauptladung übereinstimmen, die mit Tropanalkaloiden übereinstimmen.
Untersuchen Sie das Vorläufer-Ionen-Scan-Chromatogramm oder den Kanal speziell für die Hauptladung 124 und bestimmen Sie, welche Peaks oder Ionen zu welchen Retentionszeiten dieses spezifische Fragment erzeugen. Klicken Sie Scan für Scan durch das Chromatogramm und überprüfen Sie die vollständigen MS-MS-Spektren aus dem datenabhängigen Produktionenscan, insbesondere für Spezies mit geringerer Häufigkeit. Als nächstes analysieren wir die Vorläuferionen-Scan-Chromatogramme zusammen für die Hauptladung 122 und 140, die disubstituierte Tropanalkaloide anzeigen, und die Hauptladung 138 und 156, die auf trisubstituierte Tropanalkaloide hinweist.
Untersuchen Sie das Neutralverlust-Scan-Chromatogramm oder die Kanäle für die Hauptladung 160 und 166. Identifizieren Sie, welche Peaks oder Ionen Neutralverluste erzeugen, und notieren Sie deren Verweilzeiten. Klicken Sie Scan für Scan durch das Chromatogramm und vergleichen Sie es mit der datenabhängigen Produktionen-Scan-Fragmentierung, insbesondere bei weniger häufigen Spezies.
Verwenden Sie die Kombination aus Präcursor-Ionen-Scan- und Neutralverlust-Scan-Daten, unterstützt durch datenabhängige Produktionen-Scan-Ergebnisse, um mutmaßliche Annotationen der beobachteten Alkaloide vorzunehmen. Beginnen Sie mit der kleinsten Tropanmasse, addieren Sie dann den Neutralverlust und berücksichtigen Sie die verbleibende Masse. Vergleichen Sie die Alkaloid-Annotationen mit denen, die in der Literatur berichtet werden, um das Tropanalkaloid-Substitutionsmuster zu bestimmen.
Verwenden Sie zusätzlich kommerziell erhältliche Standards gängiger Tropanalkaloide zur Bestätigung. Das vollständige Q1-Scan-Chromatogramm des Datura-Metel-Wurzelextrakts zeigte verschiedene Tropanalkaloide mit unterschiedlichen Häufigkeiten. Merkmale für die Hauptladung 124, 122, 140, 138 und 156 wiesen auf das Vorhandensein von Tropanalkaloiden hin.
Viele dieser Tropanalkaloide waren acetyliert, tigloyliert oder von Phenolsäure oder Tropensäure abgeleitet, wie die Signale in den Neutralverlust-Scan-Chromatogrammen zeigen. Die Verwendung spektraler Daten ermöglichte die Annotation spezifischer Alkaloide, insbesondere die Identifizierung einer Verbindung mit scheinbarer Masse der Hauptladung 224. Die Methode ermöglichte die Deduktion einer Verbindungsstruktur durch ihr Fragmentierungsmuster und ihren neutralen Verlust, was das Vorhandensein von Tigloylgruppen als Substitutionen bestätigte.
Die Untersuchung eines Methanol-Wasserextrakts aus Datura stramonium-Samen ergab ein vollständiges Q1-Scan-Basen-Peak-Chromatogramm, das ein sehr häufig vorhandenes monosubstituiertes Tropanalkaloid, wahrscheinlich Hyoscyamin, identifizierte. Das hochauflösende MS-MS-Spektrum ermöglicht auch die Identifizierung neuer Alkaloide aus Datura stramonium-Samen.
