Zu Beginn tauen Sie die Passage auf, einen menschlichen weißen subkutanen Präadipozyten, und geben Sie die Zellen in einen T75-Kolben, der 12 bis 15 Milliliter warmes Präadipozyten-Wachstumsmedium-2 enthält. Nachdem die Zellen eine Konfluenz von 90 % erreicht haben, waschen Sie sie mit PBS und inkubieren Sie sie zwei Minuten lang mit einem Milliliter 0,25 %iger Trypsin-EDTA-Lösung. Bestätigen Sie mit einem Lichtmikroskop die Zellablösung und geben Sie 23 Milliliter Präadipozyten-Wachstumsmedium-2 in die Zellen.
Geben Sie einen Milliliter Zellsuspension in jede Vertiefung einer 24-Well-Co-Kultur-Begleitplatte und inkubieren Sie die Platte, um die Zellkonfluenz zu erreichen. Ersetzen Sie dann das Medium durch einen Milliliter Präadipozyten-Differenzierungsmedium und inkubieren Sie bei 37 Grad Celsius mit 5% Kohlendioxid für 10 Tage. Am sechsten Tag der Differenzierung säen Sie fünfmal 10 hoch vier humane SAT-MVECs in 500 Mikrolitern vollständigem MVEC-Wachstumsmedium auf einem Transwell-Einsatz.
Legen Sie den Einsatz in eine Vertiefung mit 500 Mikrolitern vollständigem MVEC-Wachstumsmedium und inkubieren Sie bei 37 Grad Celsius mit 5 % Kohlendioxid. An Tag 10, wenn die Adipozyten vollständig differenziert sind, entfernen Sie die Hälfte des Mediums aus jeder Vertiefung und übertragen Sie die Transwell-Einsätze, die Confluence-SAT-MVEVs enthalten, in jede Vertiefung. Inkubieren Sie die Platte 24 Stunden lang, um eine Co-Kultur zu erhalten.
Mit zunehmender Differenzierung der subkutanen weißen Präadipozyten des Menschen ist die Entwicklung von Lipidvakuolen zu beobachten.
