Platzieren Sie zunächst eine Platinharfe in einem Wägeschiff in der Nähe der MEA-Plattform. Bedecken Sie dann die Harfe mit etwa drei Millilitern aCSF, um ihre hydrophoben Tendenzen zu reduzieren. Schneide mit einer Schere etwa 1,5 Zoll von der schmalen Spitze einer Transferpipette ab.
Verwenden Sie anschließend die modifizierte Pipette, um eine Gehirnscheibe aus der Haltekammer der Scheibe zu entnehmen. Geben Sie die Gehirnscheibe und die Lösung aus der Pipette vorsichtig in die Chip-Vertiefung. Um die Scheibe richtig zu positionieren, verwenden Sie einen weichen Pinsel, um einen Strom in der Lösung zu erzeugen, der die Gehirnscheibe auf die Aufzeichnungselektroden drückt.
Legen Sie die Harfe mit einer Pinzette vorsichtig mit den Fäden nach unten über die Hirnscheibe, um die Scheibe auf die Aufnahmeelektroden zu drücken. Richten Sie die Harfe so aus, dass die Seite ohne Rahmen zur Zuflussnadel zeigt und der Rahmen der Harfe keine der Aufnahmeelektroden berührt. Nehmen Sie nun eine Discard-Pipette und entfernen Sie überschüssiges aCSF.
Nehmen Sie dann ein antistatisches Tuch, drehen Sie eine Ecke, um eine Spitze zu bilden, und verwenden Sie es, um das restliche aCSF aufzusaugen, das die Aufnahmeelektroden umgibt, ohne die Aufnahmeelektroden, die Gehirnscheibe oder die Harfe zu berühren. Geben Sie mit einer dafür vorgesehenen aCSF-Pipette schnell etwa zwei Milliliter carbogenated aCSF hinzu, um die Hirnscheibe zu bedecken. Füllen Sie die Vertiefung mit etwa drei Millilitern carbogeniertem aCSF, bis sie etwa zu drei Vierteln gefüllt ist.
Verwenden Sie dann ein Mikroskop oder eine Kamera, um ein hochauflösendes Bild des Gehirnschnitts auf dem MEA-Chip aufzunehmen. Legen Sie die Zu- und Abflussrohre in das mit aCSF gefüllte Becherglas. Platzieren Sie die Zuflussnadel nahe dem Boden des Chip-Wells, direkt außerhalb der Aufzeichnungselektroden.
Platzieren Sie dann die Ausflussnadel nahe der Oberseite der Chip-Vertiefung, zum Rand hin, so dass die Flüssigkeit fast bis zum Rand der Chip-Vertiefung, etwa vier Milliliter, aufsteigt. Stellen Sie nun den Perfusionszufluss auf fünf Milliliter pro Minute und den Perfusionsausfluss auf sieben Milliliter pro Minute ein. Schalten Sie den Zu- und Abfluss ein.
Entfernen Sie die Zuflussnadel aus der Spänevertiefung, bis sie beginnt, Lösung anstelle von Luft auszugeben. Setzen Sie danach die Nadel wieder in die Chipmulde ein. Verwenden Sie dann einen Lösungserhitzer, um die Lösung auf oder nahe der physiologischen Temperatur von etwa 34 bis 37 Grad Celsius zu halten.
Lassen Sie den Liquor 10 Minuten lang über die Gehirnscheibe perfundieren. Nach Ablauf von 10 Minuten wird das Abflussrohr in das Becherglas geschoben. Bewegen Sie dann den Zuflussschlauch in das Becherglas mit der prokonvulsiven Lösung.
Lassen Sie den nicht konvulsiven aCSF 10 Minuten lang aus dem Perfusionssystem in das Becherglas spülen. Zum Schluss wird das Austrittsrohr in das Becherglas mit der Prokonvulsivlösung überführt und bis zum Ende des Versuchs zyklisch gelassen. Eine starke elektrographische anfallsähnliche Aktivität wurde häufig in den neokortikalen Regionen sowohl unter dem Null-Magnesium- als auch unter dem 4-Aminopyridin-Paradigma beobachtet.
Die Hippocampusregionen zeigten eine größere Variabilität zwischen den Hirnschnitten, wobei einige anfallsähnliche Aktivität zeigten und andere vorübergehende Entladungen zeigten. Die neokortikale Aktivität unter dem Null-Magnesium-Paradigma zeigte eine höhere Leistung in mehreren Frequenzbändern im Vergleich zum 4-Aminopyridin-Paradigma. Die Aktivität des Hippocampus im Null-Magnesium-Paradigma zeigte eine höhere Leistung in hohen Gamma-Frequenzbändern im Vergleich zum Neokortex und beiden Gehirnregionen im 4-Aminopyridin-Paradigma.
