Beschriften Sie zunächst zwei 14-Milliliter-Röhrchen mit A und B, ein 15-Milliliter-Zentrifugenröhrchen mit C und ein 15-Milliliter-Zentrifugenröhrchen mit Abfall. Nachdem Sie das Vollblut zentrifugiert haben, sammeln Sie einen Milliliter des vorbereiteten Buffy Coat und geben Sie es in das Röhrchen A. Geben Sie 60 Mikroliter 0,1 molar EDTA in das Röhrchen A. Drehen Sie dann das magnetische Bead-Röhrchen 30 Sekunden lang. Um das automatische PBMC-Gerät einzuschalten, schalten Sie es an der Vorderseite des Geräts ein.
Wählen Sie auf dem Startbildschirm des Geräts Profil und dann das gewünschte Protokoll aus. Geben Sie dann die Startlautstärke ein und wiederholen Sie den Vorgang für jede Probe. Wählen Sie alle Quadranten aus, für die dasselbe Reagenzienkit verwendet werden soll.
Laden Sie als Nächstes beschriftete Verbrauchsmaterialien, Filterspitzen und Pufferbehälter in jeden Quadranten des Instrumentenkarussells, wie auf dem automatisierten PBMC-Instrumentenbildschirm angegeben. Sobald der Ladevorgang abgeschlossen ist, entfernen Sie die Deckel von Verbrauchsmaterialien und Reagenzien und wählen Sie auf dem Gerätebildschirm die Option Ausführen. Wenn der Lauf abgeschlossen ist, wählen Sie Entladen und Samples aus dem Karussell des Instruments entfernen.
Übertragen Sie 500 Mikroliter der Zellen in einen Probenbecher, um eine Zellzählung ohne Verdünnung zu erzielen. Beim Vergleich der automatisierten Bead-basierten Methode mit der manuellen Methode wurden keine signifikanten Unterschiede in der Zellviabilität oder der Gesamtzellzahl festgestellt. Die manuelle Methode verarbeitete acht Proben in 43 Minuten, während die automatisierte Methode 57 Minuten benötigte, einschließlich 35 Minuten Hands-off-Verarbeitung.
Die mittlere Zellviabilität betrug mehr als 90 % für PBMCs, die innerhalb von fünf Tagen verarbeitet wurden, und mehr als 75 % für diejenigen, die innerhalb von 10 Tagen verarbeitet wurden. Die durchschnittliche PBMC-Ausbeute sank nach fünf Tagen um 50 % im Vergleich zu Proben, die innerhalb von 24 Stunden verarbeitet wurden.
