Lyse roter Blutkörperchen in verdauten Tumorproben für die Einzelzell-RNA-Sequenzierung

Entnehmen Sie zunächst die gefilterte und verdaute Tumorprobe. Die Probe wird bei 450 g fünf Minuten lang bei vier Grad Celsius zentrifugiert. Aspirieren Sie das Medium, ohne das Pellet zu stören, und resuspendieren Sie das Pellet in ACK-Lysepuffer, um rote Blutkörperchen zu entfernen und das verwendete Volumen aufzuzeichnen.

Wiederholen Sie die Zentrifugation und die Lyseschritte, bis das Probenpellet nach der Zentrifugation keine sichtbare rote Farbe mehr aufweist. Anschließend wird das Probenpellet in frischem Medium resuspendiert. Mischen Sie je 10 Mikroliter Trypan und Blau und die dissoziierten Zellen in ein 1,5-Milliliter-Röhrchen.

Laden Sie 10 Mikroliter auf jede Seite eines Hämozytometers. , um die Zellen zu zählen. Notieren Sie die Zellkonzentration.

Gesamtanzahl der Lebendzellen, Prozentsatz der Lebensfähigkeit und endgültiges Medienvolumen nach der Zählung.