24 Stunden nach der Injektion des magnetischen Nanopartikels anti-microRNA 10b wiegen Sie die Maus und berechnen Sie das Volumen von d-Luciferin, das für eine Dosierung von 150 Milligramm pro Kilogramm verabreicht werden soll. Bereiten Sie eine 28-Gauge-Spritze vor, wobei das Volumen die Lösung vor direktem Licht schützt. Nach der Betäubung die Maus vorsichtig absägen, um eine weitere Verletzung der Operationsstelle zu vermeiden, und die Dosis von d-Luciferin intraperitoneal injizieren.
Lassen Sie die Maus wiederhergestellt werden, und warten Sie 10 Minuten, bevor Sie ein Bild erstellen. Nachdem Sie ein In-vivo-Bildgebungssystem oder einen IVIS-Scanner vorbereitet haben, legen Sie die schwarze Matte mit niedriger Fluoreszenz auf den Bildgebungstisch und konfigurieren Sie das Nasenkegel-Array für die Bildgebung. Klicken Sie in der Software auf Imaging-Assistent.
Wählen Sie dann Biolumineszenz-Bildgebung, gefolgt von offenem Filter. Wählen Sie auf dem nächsten Bildschirm das Bildmotiv und das Sichtfeld aus. Platzieren Sie die anästhesierte Maus in Bauchlage auf dem IVIS-Scanner.
Klicken Sie auf Sequenz erfassen und nehmen Sie mit den Einstellungen für die automatische Belichtung mit einem Signalschwellenwert von mindestens 3000 Zählungen ein Bild für die Lokalisierung von Luziferase-markierten U-251-Glioblastomzellen auf. Wählen Sie anschließend im Bildgebungsassistenten Fluoreszenz aus, gefolgt von gefiltertem Paar mit Epi-Beleuchtung. Wählen Sie im nächsten Bildschirm den Test Cy5.5 aus.
Wählen Sie das Bildmotiv und das Sichtfeld aus. Mit den Einstellungen für die automatische Belichtung mit einer minimalen Signalschwelle von 6.000 Zählungen können Sie ein Bild für die Lokalisierung von magnetischen Nanopartikeln, anti-microRNA 10b, aufnehmen. Legen Sie die anästhesierte Maus bäuchlings auf die MRT-Liege.
Immobilisieren und positionieren Sie den Kopf für den Scanvorgang mit einer Beißstange und Ohrstangen. Installieren Sie den geschmierten rektalen Temperaturfühler und stellen Sie sicher, dass die Atmungs- und Temperaturüberwachung funktioniert. Positionieren Sie die Mausgehirnspule über dem Kopf, indem Sie die Stifte am Mausbett in die Löcher an der Spule einsetzen und die Spule mit Klebeband festkleben, um Bewegungen während des Scannens zu reduzieren.
Legen Sie ein kleines warmes Wasserzirkulationspad über die Oberseite der Maus, um die Körpertemperatur zu halten. Bringen Sie die Maus und das Bildgebungsbett für den Scanvorgang in Position. Starten Sie in der Erfassungssoftware den Wobble-Setup-Schritt, um die MRT-Spulen abzustimmen und anzupassen.
Stellen Sie sicher, dass die Kurve zentriert und so tief wie möglich ist. Machen Sie einen Drei-Ebenen-Lokalisator-Scan des Gehirns. Erfassen Sie anhand der folgenden Parameter zweidimensionale T2-gewichtete Scans, um den Tumor zu erkennen.
Erfassen Sie eine b0-Karte des gesamten Gehirns, um eine lokalisierte Scheibe mit dem Dienstprogramm map shim zu berechnen. Verwenden Sie dreidimensionale T2-Sternbilder, um die Nanopartikel zu visualisieren. Erfassen Sie mit den folgenden Parametern eine T2-Sternkarte für die weitere Nanopartikel-Bildgebung, wobei das zweidimensionale T2-gewichtete Bild als Referenz für die Positionierung des Scans über dem Tumor verwendet wird.
Erfassen Sie 10 positive Echobilder mit einem Echo-Zeitabstand von fünf Millisekunden. Wiegen Sie am experimentellen Endpunkt die Maus und berechnen Sie das Volumen von d-Luciferin, das für eine Dosierung von 150 Milligramm pro Kilogramm verabreicht werden soll. Führen Sie 10 Minuten nach der Injektion eine Live-Biolumineszenz-Bildgebung durch, wie zuvor beschrieben.
Platzieren Sie die Petrischale mit dem herausgeschnittenen Gehirn der euthanasierten Maus in den IVIS-Scanner. Bilden Sie das Gehirn sowohl mit Biolumineszenz- als auch mit Fluoreszenzmodalitäten ab, wobei Sie die gleichen Aufnahmeeinstellungen wie bei der In-vivo-Bildgebung verwenden. Die Cy5.5-Fluoreszenz- und Biolumineszenzsignale in magnetischen Nanopartikeln, die mit antimicroRNA 10b injiziert wurden, zeigten eine deutliche Kolokalisation, was auf eine Abgabe der Nanopartikel an den Tumor hinweist, während Kontrollmäuse kein Fluoreszenzsignal zeigten.
Ex-vivo-Fluoreszenzbildgebung zeigte die Lokalisierung der Nanopartikel in wichtigen Clearance-Organen wie Leber und Nieren. Eine charakteristische Abnahme des T2-gewichteten MRT-Signals zeigt das Potenzial von magnetischen Nanopartikeln, anti-microRNA 10b als MRT-Kontrastmittel, die Blut-Hirn-Schranke zu überwinden und sich in der Tumorregion anzureichern.
