Immunfärbung und automatisierte Zählung von retinalen Ganglienzellen der Maus mit einem KI-basierten Programm

Nachdem Sie die gesamte Mount-Netzhaut von der Maus isoliert haben, waschen Sie die Netzhaut fünf Minuten lang unter sanftem Rühren in PBS. Tauchen Sie die gewaschene Netzhaut 30 Minuten lang in einen Blockierungspuffer. Nach der Inkubation ist der Blockierungspuffer durch den primären Antikörper BRN3A zu ersetzen.

Inkubieren Sie die Netzhaut über Nacht bei vier Grad Celsius, um eine spezifische Antigen-Antikörperbindung zu ermöglichen. Waschen Sie die Netzhaut am nächsten Tag dreimal jeweils fünf Minuten lang mit PBS, bevor Sie sie zwei Stunden lang mit Alexa 594 oder Alexa 488 konjugiertem Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper inkubieren, um Zielantigene sichtbar zu machen. Nachdem Sie die immungefärbte Netzhaut mit PBS gewaschen haben, übertragen Sie sie vorsichtig auf einen Glasobjektträger.

Glätten Sie die Netzhaut, um Falten oder Verzerrungen zu minimieren. Positionieren Sie einen Deckglas über der montierten Netzhaut und stellen Sie sicher, dass sich keine Luftblasen bilden. Laden Sie den Code über den GitHub-Link herunter.

Laden Sie dann die erforderlichen Dateien von der Cloud-Disk herunter und entpacken Sie sie. Suchen Sie die Konfiguration. ini-Datei und ändern Sie den Inhalt so, dass er auf den yolov5_cpu Pfad verweist.

Klicken Sie dann auf Benutzeroberfläche. exe, um die grafische Oberfläche zu öffnen. Prüfen Sie, ob die pmse_plus.

Die PT-Modelldatei befindet sich im Stammverzeichnis von Laufwerk C.Wenn nicht, kopieren Sie sie aus dem Ordner weights des yolov5-Ordners. Öffnen Sie die Zellzählsoftware. Klicken Sie auf Bild öffnen, um das Bild zu importieren, und klicken Sie dann auf Ausführen, damit die Software die Zellen automatisch zählen kann.

Die automatisierte Zellzählsoftware identifizierte 15.231 retinale Ganglienzellen im N-Methyl-D-Aspartat-induzierten Glaukom-Mausmodell genau und zeigte einen signifikanten Zellverlust im Vergleich zu etwa 45.000 bis 50.000 RGCs in einer normalen Netzhaut.