Wir bedanken uns bei Britta Hoehn, Guihua Sun, Harris Soifer und Lisa Scherer für hilfreiche Diskussionen. Die CHO-EE-und CHO-Zellen gp160: Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse der National Institutes of Health AI29329 und HL07470 verliehen Folgende Reagenzien JJR wurden durch die NIH AIDS Research and Reference Reagent Program, Division of AIDS, NIAID, NIH erhalten Unterstützung Linie, die pNL4-3 luc-Vektor; HIV-1 BaL gp120 aus DAIDS, NIAID.

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	<li>Tuerk, C., Gold, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+evolution+of+ligands+by+exponential+enrichment:+RNA+ligands+to+bacteriophage+T4+DNA+polymerase.">Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: RNA ligands to bacteriophage T4 DNA polymerase.</a> Science. 249, 505-510 (1990).</li><li>Ellington, A. D., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+selection+of+RNA+molecules+that+bind+specific+ligands.">In vitro selection of RNA molecules that bind specific ligands.</a> Nature. 346, 818-822 (1990).</li><li>Robertson, D. L., Joyce, G. 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J. R und JZ haben ein zum Patent angemeldetes auf &quot;Cell-spezifischen Aptamer-siRNA-System für HIV-1-Therapie&quot;. USPTO, Nr.<strong&gt; 12/328994</strong&gt;, Datum der Veröffentlichung: 11. Juni 2009.

Aptamere sind in vitro entwickelt Nukleinsäuren, die spezifische und stabile dreidimensionale Formen annehmen, wodurch eine sehr spezifische, enge Bindung an gezielten Moleküle 8. Die niedrigen nanomolaren Bindungsaffinität und exquisite Spezifität der Aptamere, um ihre Ziele machen vielseitige Werkzeuge für Diagnose, Bildgebung in vivo, und Therapeutika 9. Mit dem Aufkommen der Aptamer-Technologie zur gezielten siRNA Anlieferung ist es nun möglich, die Aptamer-Bindung-Funkt...

<table border="1"><tbody><tr><th> Name des Reagenzes </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th><th> Kommentare (optional) </th></tr><tr><td> MF-Millipore Membranfilter </td><td> Millipore </td><td> HAWP01300 </td><td> Porengröße 0,45 um </td></tr><tr><td> Swinnex Filterhalter </td><td> Millipore </td><td> SX0001300 </td><td> 13 mm Durchmesser </td></tr><tr><td> QIAquick Gel Extraction Kit </td><td> QIAGEN </td><td> 28706 </td><td> DNA-Aufreinigung </td></tr><tr><td> Microcon YM-30 Säule </td><td> Millipore </td><td> 42410 </td><td> RNA-Konzentration </td></tr><tr><td> Bio-Spin-30 Säulenvolumina </td><td> Bio-Rad </td><td> 732-6250 </td><td> RNA-Reinigung </td></tr><tr><td> Taq PCR-DNA-Polymerase </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D1806 </td><td></td></tr><tr><td> ThermoScript RT-PCR-System </td><td> Invitrogen </td><td> 11146-024 </td><td></td></tr><tr><td> DuraScribe T7 Transkription Kit </td><td> EpiCentre </td><td> DS010925 </td><td></td></tr><tr><td> dNTP für PCR </td><td> Roche </td><td> 1 581 295 </td><td></td></tr><tr><td> Ribonukleinsäure, Transfer vom E.coli </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R1753 </td><td> tRNA Wettbewerber </td></tr><tr><td> HIV-1 Ba-L gp120-Protein </td><td> die AIDS-Forschung und Referenzreagens Programm </td><td> 4961 </td><td> Zielprotein </td></tr><tr><td> Silencer siRNA Labeling Kit - Cy3 </td><td> Ambion </td><td> 1632 </td><td></td></tr><tr><td> Saure Phenol / Chloroform 5 / 1 Lösung (pH 4,5) </td><td> Ambion </td><td> AM9720 </td><td></td></tr><tr><td> Chloroform / Isopropanol 24 / 1 Lösung </td><td> Sigma </td><td> C0549 </td><td></td></tr><tr><td> Kalbsdarmphosphatase (CIP) </td><td> New England Biolab </td><td> M0290L </td><td></td></tr><tr><td> T4-Polynukleotid-Kinase </td><td> New England Biolab </td><td> M0201L </td><td></td></tr><tr><td> Glykogen </td><td> Roche </td><td> 10 901 393 001 </td><td> RNA Niederschläge </td></tr><tr><td> Gamma-P 32-ATP </td><td> MP Biomedical </td><td> 013502002 </td><td> Radiactivity </td></tr><tr><td> 40% AccuGel 19.01 </td><td> National Diagnostics </td><td> EC-850 </td><td></td></tr><tr><td> 10xTBE </td><td> National Diagnostics </td><td> EC-860 </td><td></td></tr><tr><td> N, N, N, N&#39;-Tetramethylethylendiamin (TMEMD) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T9281 </td><td></td></tr><tr><td> Ammoniumpersulfat (APS) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A3678 </td><td></td></tr><tr><td> L-methioine Sulfoximin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M5379-250 mg </td><td></td></tr><tr><td> RPMI Medien 1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 11835-030 </td><td></td></tr><tr><td> Natriumhydrogencarbonat-Lösung, 7,5% w / v </td><td> Invitrogen </td><td> 25080-094 </td><td></td></tr><tr><td> Minimum Essential Medium (MEM) (10 ) </td><td> Invitrogen </td><td> 11430-030 </td><td></td></tr><tr><td> MEM nicht essentielle Aminosäure (100 ) </td><td> Invitrogen </td><td> 11140-050 </td><td></td></tr><tr><td> TA Cloning-Kit mit pCR 2.1 </td><td> Invitrogen </td><td> K2040-01 </td><td></td></tr></tbody></table>

development of cell-type specific anti-hiv gp120 aptamers for sirna delivery

Die globale Epidemie der HIV-Infektion hat ein dringender Bedarf für neue Klassen von antiretroviralen Wirkstoffen erstellt. Die starke Fähigkeit von small interfering (si) RNAs, die Expression der komplementären RNA-Transkripte verhindern wird als eine neue Klasse von Therapeutika für eine Vielzahl von Krankheiten, einschließlich HIV ausgenutzt. Viele frühere Berichte haben gezeigt, dass neue RNAi-basierte anti-HIV/AIDS therapeutische Strategien sehr vielversprechend sind, jedoch ist ein zentrales Hindernis für die erfolgreiche therapeutische Anwendung und klinische Umsetzung von siRNAs effiziente Lieferung. Besonders, wenn man die Sicherheit und Wirksamkeit von RNAi-basierten Therapeutika, ist es höchst wünschenswert, um eine gezielte intrazelluläre siRNA Ansatz für spezifische Zellpopulationen oder Geweben entwickeln. Die HIV-1 gp120-Protein, einem Glykoproteinumhüllung auf der Oberfläche des HIV-1, spielt eine wichtige Rolle in Eindringen des Virus in CD4-Zellen. Die Interaktion von gp120 und CD4, dass HIV-1-Eintrag löst und initiiert Zellfusion wurde als klinisch relevant anti-virale Strategie für die Wirkstoffforschung validiert. Im Folgenden stellen wir zunächst besprechen die Auswahl und Identifizierung von 2&#39;-F modifiziert Anti-HIV-gp120 RNA-Aptameren. Mit einem herkömmlichen Nitrocellulosefilter SELEX-Methode wurden mehrere neue Aptamere mit nanomolaren Affinität von einem 50 zufällige nt RNA-Bibliothek isoliert. Um erfolgreich zu erhalten gebundenen Spezies mit höherer Affinität, ist die Auswahl Stringenz sorgfältig durch Einstellen der Bedingungen gesteuert. Die selektierten Aptamere spezifisch binden können und schnell in Zellen, die das HIV-1 Hüllprotein internalisiert werden. Darüber hinaus können die Aptamere allein neutralisieren HIV-1 Infektiosität. Basierend auf den besten Aptamer A-1, erstellen wir auch einen neuartigen dualen hemmende Funktion anti-gp120 Aptamer-siRNA-Chimäre, in denen sowohl die Aptamer und die siRNA Teile haben starke anti-HIV-Aktivitäten. Darüber hinaus nutzen wir die gp120 Aptamer-siRNA Chimären für die Zell-spezifische Auslieferung der siRNA in HIV-1 infizierten Zellen. Diese Doppelfunktion Chimäre zeigt ein erhebliches Potenzial für die Kombination von verschiedenen Nukleinsäure-Therapeutika (Aptamer-und siRNA) in der Unterdrückung von HIV-1-Infektion, so dass die Aptamer-siRNA Chimären attraktive therapeutische Kandidaten für Patienten, bei denen hochaktive antiretrovirale Therapie (HAART).

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Development of Cell-type specific anti-HIV gp120 aptamers for siRNA delivery

Mehrere 2&#39;-Fluoro RNA-Aptamere gegen HIV-1Ba-L gp120 mit Nanomol Affinität von einer RNA-Bibliothek isoliert durch<em&gt; In-vitro-</em&gt; SELEX Verfahren. Ein neuer Dual-hemmende Funktion anti-gp120 Aptamer-siRNA-Chimäre wird erstellt und zeigt viel versprechend für die systemische Anti-HIV-Therapie.

Entwicklung von Zell-spezifischen Anti-HIV-gp120-Aptamere für siRNA

The global epidemic of infection by HIV has created an urgent need for new classes of antiretroviral agents. The potent ability of small interfering ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

19.4K Aufrufe.  Beckman Research Institute of City of Hope. Mehrere 2'-Fluoro RNA-Aptamere gegen HIV-1Ba-L gp120 mit Nanomol Affinität von einer RNA-Bibliothek isoliert durch In-vitro- SELEX Verfahren. Ein neuer Dual-hemmende Funktion anti-gp120 Aptamer-siRNA-Chimäre wird erstellt und zeigt viel versprechend für die systemische Anti-HIV-Therapie.