Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse von der belgischen Bundesregierung (IUAP P6/28), der Research Foundation-Flandern (FWO) (G.0565.07 und G.0686.09), der Astellas European Foundation Award 2009 und dem Research Council der KU Leuven unterstützt (GOA 2009/07, EF/95/010 und PFV/10/006). PU und wir sind Doktoranden der Research Foundation-Flanders (FWO). MB ist ein Marie-Curie-Stipendiat. DDR eine grundlegende-klinischen Stipendiat der FWO.

Ein. Laboratory Animals <ol><li> Tiere (Mäuse, Ratten) in einem spezialisierten Tier-Anlage mit einer 12-Stunden-Hell-Dunkel-Zyklus und ad libitum Zugang zu Wasser und Standard Futterpellets untergebracht. Sowohl Alter und Geschlecht der Tiere sind wichtige Parameter, die standardisiert sein sollte entsprechend den Bedürfnissen. Wir führen typischerweise Zystometrie in 10 - 12 Wochen alten weiblichen Tieren 5,6. </li><li> Alle Tierexperimente wurden in Übereinstimmung mit den europäischen Union Community Council Richtlinien durchgeführt und von der lokalen Ethikkommission. </li></ol> 2. Anästhesie <ol><li> Isofluran-Narkose ist für die Durchführung kleiner chirurgischer Eingriffe verwendet, da es einfach zu dosieren aufgrund seiner kurzen Halbwertszeit ist. Entsprechende Abgas Aufräumen ist notwendig, wenn mit Isofluran. <ol class="lalpha"><li> Die Tiere werden in einer geschlossenen Box, mit Isofluran 5% in reinem Sauerstoff (1 l / min) begast platziert. </li><li> Nach Induktion, Anästhesie an der entsprechenden l1 l / min Sauerstoff mit - 1 - 1,5% Isofluran evel wird durch eine kleine Maske (ein Schnitt 10 ml Spritze) um 0,8 gehalten wird. </li></ol></li><li> Bei Mäusen ist Urethannarkose während der funktionellen Aufnahmen (vgl. Infra) verwendet. Urethannarkose wird während der funktionellen Aufnahmen verwendet werden, da im Gegensatz zu den meisten anderen Anästhetika, die Mikturations Reflex wird durch diese Narkosemittel 4 unterdrückt. Urethan 1,2 g / kg Körpergewicht subkutan (sc) 60 min vor Beginn der Aufnahmen verabreicht. Gegebenenfalls kann die Dosis des Urethan für eine einwandfreie Anästhesie erhalten durch Verabreichen weitere Dosen (0,1 g / kg) subkutan titriert werden. Es sollte angemerkt werden, jedoch kann, dass zusätzliche Anästhesie verändern die Hohlraumbildung und damit die Effizienz Miktionsfrequenz 7,8. Daher sollten die zystometrischen Aufnahmen engmaschig überwacht werden und verworfen, wenn signifikante Abweichungen von der Steuerung Verhalten beobachtet werden. Anästhetika sollte nicht verabreicht, während sein TestVerbindungen angewendet werden, um Fehlinterpretationen der Daten zu vermeiden. </li></ol> 3. Chirurgische Verfahren - Blasenkatheter Implantation <ol><li> Chirurgische Instrumente werden in einem Autoklav vor Gebrauch sterilisiert. Shave den Bauch des Tieres, desinfizieren mit Ethanol 70% und eine Low Mittellinie Laparotomie, um die Blase freizulegen. </li><li> Unter einem Operationsmikroskop, setzen Sie ein Tabaksbeutelnaht in der Blase Kuppel mit einem nicht-resorbierbaren, Monofilamentnahtmaterial (Größe 6-0). </li><li> Durchführen einer kleinen Zystostomie (wir verwenden eine bevorzugt 18 G Nadel) innerhalb des Tabaksbeutelnaht und Einfügen eines PE 50 Katheters Polyethylen, mit einer kleinen Manschette am Ende (erhalten durch vorsichtiges Erhitzen des Schlauchs) durch dieses Loch. In unseren Händen haben dünnere Rohre (PE 10) eine höhere und variable Widerstand. Der Schlauch kann, indem es in einem Ethanol-Lösung 70% oder im Autoklaven sterilisiert desinfiziert werden. Vor der Implantation muss der Schlauch mit Kochsalzlösung gespült werden. </li><li> Sichern Sie die Geldbörse strING um das Rohr mit einem Chirurgen Knoten. Ziehen des Katheters leicht nach außen, bis der glockenförmigen Spitze direkt unter dem Faden positioniert wird. Schieben Sie ein Stück 18 G-Katheter in Richtung der Naht zu verhindern undicht. </li><li> Infuse ein kleines Volumen von Kochsalzlösung (100 - 200 ul) vorsichtig auf Lecks überprüfen. Wenn Undichtigkeiten vorhanden sind, sollte eine zusätzliche Naht gelegt werden. </li><li> Schließen der Bauchmuskulatur mit monofilen Fäden, so dass ein Durchgang für den Katheter in den oberen Teil des Schnittes. </li><li> Tunnel das Rohr zum interskapularen Bereich unter Verwendung einer hohlen Metallstange, wodurch verhindert wird, die Tiere, um das Rohr während des Experiments zu beißen. </li><li> Die Haut wird geschlossen mit nicht-resorbierbaren, monofilen Fäden. Die implantierten Katheter mit Kochsalzlösung gespült, um die Durchlässigkeit zu überprüfen. </li><li> Bevor die Tiere erwachen, sind Analgetika subkutan (Buprenorphin, 0,05 mg / kg) angegeben. </li></ol> 4. Setup und Zystometrie <ol><li> Abhängig von der experimentellen questiauf (und die Arten verwendet) Zystometrie in wach (Zurückhaltung oder Ungebundenheit) oder Urethan-narkotisierten Tieren durchgeführt. Während Zystometrie ist durchaus möglich in wachen Ratten, die bleiben in einem verhaltenen Umfeld ruhig neigen, wir führen in der Regel Zystometrie unter Urethannarkose (1,2 mg / kg, subkutan) bei der Verwendung von Mäusen 3,5,6,9. </li><li> An narkotisierten Mäusen, Körpertemperatur wird ständig überwacht und bei 36,5 ° C ± 0,2 ° C mit Hilfe eines Temperaturfühlers und einer Wärmelampe. </li><li> Das Set-up wird vor jedem Versuch nach den Anweisungen des Herstellers kalibriert. </li><li> Die implantierte Katheter wird durch einen Luer-Stichleitung zu einem 3-Wege-Hahn, der mit dem Druckwandler (Edwards Lifesciences) auf einer Seite und einer Infusionspumpe auf der anderen (Harvard Apparatus) verbunden ist. Der Druckwandler über einen Verstärker (78534c Monitor, Hewlett Packard) mit dem Datenerfassungssystem (DI-730-USB, DATAQ Instrumente) und eines Co verbundenmputer. WinDaq / Lite-Software können für die Aufnahme verwendet werden. </li><li> Infusionspumpe gestartet, so dass die Infusion von Kochsalzlösung oder PBS bei beispielsweise 100 pl / min (bei Ratten) oder 20 ul / min (an Mäusen). Als solche ist die Blase wird bei einer konstanten Rate gefüllt werden, während die intravesikale Druck aufgezeichnet ist. </li><li> Abbildung 5 zeigt eine typische Druck Spur: Während Flüssigkeitsinfusion, gibt es einen langsamen Druckaufbau in der Blase, bis ein bestimmtes Volumen / Druck erreicht ist, der Miktion Schwelle. Sobald dies erreicht ist, wird die Blase Kontrahierungszwang und anschließend das Urinsphinkter öffnet, um den Durchtritt von Urin durch die Harnröhre. Als solche, die Blase entleert ist, wird die Kontraktion zu stoppen, und der Druck wird wieder fallen zum &quot;basal&quot;-Pegel. </li><li> Da die Ratte in einem metabolischen Käfig und über einer digitalen Waage platziert ist, kann das Volumen ungültig gleichzeitig gemessen werden, die Informationen über die vakuolenhaltige Volumen. Aufgrund der geringen ungültig Bände mice, kann es sehr schwierig sein unter Verwendung dieses Systems. Deshalb erlischt Volumen bestimmt mit kleinen Filterpapiere vor und nach Miktion gewogen. </li><li> Typischerweise lassen wir das System für 30 Minuten, gefolgt von einer Aufnahme von 30 min gefolgt äquilibrieren. Dann können Medikamente systemisch oder intravesikal verabreicht werden und weitere 30 min aufgezeichnet. </li><li> Die aufgezeichneten Daten können als. Csv-Dateien, die in eine spezielle Software für die quantitative Analyse importiert werden können exportiert werden. Wir verwenden in der Regel Origin (OriginLab Corporation, MA, USA). </li><li> Nach Experimenten werden die Tiere durch Genickbruch (Mäuse) oder CO 2 Intoxikation (Ratten) geopfert. </li></ol> 5. Repräsentative Ergebnisse <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig1.jpg" /> Abbildung 1. Laparotomie Überblick. A) Setzen Sie die Ratte in der Rückenlage. B) Rasur und antiseptisch Vorbereitung der OP-Gebiet. C) Inzision der Haut. D) Incision of die Bauchmuskeln und Blase Exposition. <img alt="Abbildung 2" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig2.jpg" /> Abbildung 2. A Tabaksbeutelnaht. <img alt="Abbildung 3" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig3.jpg" /> Abbildung 3. Catheter Implantation. <img alt="Abbildung 4" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig4.jpg" /> Abbildung 4. Tunnelling des Katheters. Beispiele für Druckmessungen während intravesikale Perfusion von Salzlösung in einer bewussten Ratte und einer narkotisierten Maus sind in Abbildung 5 dargestellt. Mehrere Parameter können aus dem Drucksignal (zB die intercontractile Intervall, das Basisdruck und dem Schwellendruck) extrahiert werden. Für eine umfassende Beschreibung dieser Parameter finden Sie Andersson et al. (Ref 4) und Yoshiyama et al. (<html> ref 10). Wir haben vor kurzem Zystometrie verwendet, um die molekularen Targets von Senföl (MO), eine sehr reaktive Verbindung, die schon lange in experimentellen Modellen der Entzündung und Hyperalgesie der viszeralen Organe wie Harnblase 11,12 identifizieren. Intravesikale Infusion von 10 mM MO induziert einen starken Anstieg in der Blasenentleerung Frequenz (Abnahme der intercontractile Intervall) in Wildtyp-Mäusen (6A, B) und eine Abnahme der für nichtig erklärten Band 6. Interessanterweise induzierte MO ähnliche Veränderungen in defizienten Mäusen der MO-Rezeptor TRPA1. Im Gegensatz dazu induzierte MO viel schwächer Veränderungen in cystometrischen Parameter in TRPV1 KO Mäusen als in WT Mäusen und war ohne Wirkung Trpa1/Trpv1 KO-Mäusen. Zusammen mit Messungen der Freisetzung des Calcitonin Gene Related Peptide (CGRP) 6 zeigen diese Daten zeigen, dass TRPV1 kann eine wichtige Rolle bei viszeralen Reizung durch MO induzierte spielen. ve_content &quot;&gt; <img alt="Abbildung 5" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig5.jpg" /> Abbildung 5. Repräsentative Spuren intravesikale Druck in einem bewussten weiblichen Ratte (A) und in einem narkotisierten weiblichen Maus (B) aufgezeichnet. Der niedrigste Druck wird als &quot;Baseline Druck&quot; (rote Pfeile) definiert. Der Druck am Ende der Füllphase ist mit blauen Pfeilen markiert. Das Volumen der Flüssigkeit zwischen diesen Punkten, durch die Druckdifferenz geteilt, infundiert ermöglicht die Berechnung der Einhaltung der Blasenwand (Compliance = infundierten Volumens / (Druckschwelle -. Basisdruck) Die &quot;intercontractile Intervall&quot; (ICI) ist die Zeit zwischen zwei voiding Kontraktionen. <img alt="Abbildung 6" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig6.jpg" /> Abbildung 6. Auswirkungen von intravesikale Anwendung von Senföl auf dem Zystometrie Muster in Wildtyp und TRPA1, TRPV1 und Trpa1/Trpv1 Knockout-Mäusen.(A) Repräsentative Beispiele für intravesikale Druckänderungen in WT, TRPA1 KO, TRPV1 KO und Trpa1/Trpv1 KO-Mäuse in Reaktion auf Infusion von Kochsalzlösung und 10 mM MO aufgezeichnet. (B) Zeitlicher Verlauf der durchschnittlichen sofortige Entleerung Frequenz vor und während intravesikale Infusion von MO. Bei allen Mäusen, wurden die Daten auf die durchschnittliche Frequenz während Kochsalzlösungsinfusion erhaltenen normalisiert. Diese Daten werden von Everaerts et al. (Ref 6) angepasst, mit Genehmigung von Elsevier.

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	<li>Everaerts, W., Gevaert, T., Nilius, B., De Ridder, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+origin+of+bladder+sensing:+Tr(i)ps+in+urology.">On the origin of bladder sensing: Tr(i)ps in urology.</a> Neurourol. Urodyn. 27, 264-2673 (2008).</li><li>Fry, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+and+their+use+in+understanding+lower+urinary+tract+dysfunction.">Animal models and their use in understanding lower urinary tract dysfunction.</a> Neurourol. Urodyn. 29, 603-608 (2010).</li><li>Gevaert, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+the+transient+receptor+potential+cation+channel+TRPV4+impairs+murine+bladder+voiding.">Deletion of the transient receptor potential cation channel TRPV4 impairs murine bladder voiding.</a> J. Clin. Invest. 117, 3453-3462 (2007).</li><li>Andersson, K. E., Soler, R., Fullhase, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+for+urodynamic+investigation.">Rodent models for urodynamic investigation.</a> Neurourol. Urodyn. 30, 636-646 (2011).</li><li>Everaerts, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+the+cation+channel+TRPV4+improves+bladder+function+in+mice+and+rats+with+cyclophosphamide-induced+cystitis.">Inhibition of the cation channel TRPV4 improves bladder function in mice and rats with cyclophosphamide-induced cystitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 19084-19089 (2010).</li><li>Everaerts, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+capsaicin+receptor+TRPV1+is+a+crucial+mediator+of+the+noxious+effects+of+mustard+oil.">The capsaicin receptor TRPV1 is a crucial mediator of the noxious effects of mustard oil.</a> Curr. Biol. 21, 316-321 (2011).</li><li>Yoshiyama, M., Roppolo, J. R., Thor, K. B., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+LY274614,+a+competitive+NMDA+receptor+antagonist,+on+the+micturition+reflex+in+the+urethane-anaesthetized+rat.">Effects of LY274614, a competitive NMDA receptor antagonist, on the micturition reflex in the urethane-anaesthetized rat.</a> Br. J. Pharmacol. 110, 77-86 (1993).</li><li>Yoshiyama, M., Roppolo, J. R., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+MK-801+on+the+micturition+reflex+in+the+rat--possible+sites+of+action.">Effects of MK-801 on the micturition reflex in the rat--possible sites of action.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 265, 844-850 (1993).</li><li>Boudes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Characterization+of+a+Chronic+Cyclophosphamide-Induced+Overactive+Bladder+Model+in+mice.">Functional Characterization of a Chronic Cyclophosphamide-Induced Overactive Bladder Model in mice.</a> Neurourol. Urodyn. , (2011).</li><li>Yoshiyama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex-related+differences+in+activity+of+lower+urinary+tract+in+response+to+intravesical+acid+irritation+in+decerebrate+unanesthetized+mice.">Sex-related differences in activity of lower urinary tract in response to intravesical acid irritation in decerebrate unanesthetized mice.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 295, R954-R960 (2008).</li><li>McMahon, S. B., Abel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+the+study+of+visceral+pain+states:+chronic+inflammation+of+the+chronic+decerebrate+rat+urinary+bladder+by+irritant+chemicals.">A model for the study of visceral pain states: chronic inflammation of the chronic decerebrate rat urinary bladder by irritant chemicals.</a> Pain. 28, 109-127 (1987).</li><li>Du, S., Araki, I., Yoshiyama, M., Nomura, T., Takeda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+receptor+potential+channel+A1+involved+in+sensory+transduction+of+rat+urinary+bladder+through+C-fiber+pathway.">Transient receptor potential channel A1 involved in sensory transduction of rat urinary bladder through C-fiber pathway.</a> Urology. 70, 826-831 (2007).</li><li>Streng, T., Santti, R., Talo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similarities+and+differences+in+female+and+male+rat+voiding.">Similarities and differences in female and male rat voiding.</a> Neurourol. Urodyn. 21, 136-141 (2002).</li><li>Igawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cystometric+findings+in+mice+lacking+muscarinic+M2+or+M3+receptors.">Cystometric findings in mice lacking muscarinic M2 or M3 receptors.</a> J. Urol. 172, 2460-2464 (2004).</li><li>Schroder, A., Newgreen, D., Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrusor+responses+to+prostaglandin+E2+and+bladder+outlet+obstruction+in+wild-type+and+Ep1+receptor+knockout+mice.">Detrusor responses to prostaglandin E2 and bladder outlet obstruction in wild-type and Ep1 receptor knockout mice.</a> J. Urol. 172, 1166-1170 (2004).</li><li>Chen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+of+the+lower+urinary+tract+in+mice+lacking+alpha1d-adrenoceptor.">Function of the lower urinary tract in mice lacking alpha1d-adrenoceptor.</a> J. Urol. 174, 370-374 (2005).</li><li>May, V., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bladder+dysfunction+and+altered+somatic+sensitivity+in+PACAP-/-+mice.">Bladder dysfunction and altered somatic sensitivity in PACAP-/- mice.</a> J. Urol. 183, 772-779 (2010).</li><li>Thorneloe, K. S., Meredith, A. L., Knorn, A. M., Aldrich, R. W., Nelson, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urodynamic+properties+and+neurotransmitter+dependence+of+urinary+bladder+contractility+in+the+BK+channel+deletion+model+of+overactive+bladder.">Urodynamic properties and neurotransmitter dependence of urinary bladder contractility in the BK channel deletion model of overactive bladder.</a> Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 289, 604-610 (2005).</li></ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Die Zystometrie hier vorgestellte Technik ermöglicht die Durchführung in vivo Messungen der Blasenfunktion in Tiermodellen. Ratten sind wahrscheinlich die am häufigsten verwendete Tiermodell. Mäuse sind schwieriger zu handhaben, bieten aber den Vorteil der Verwendung genmanipulierter Tiere. Wegen der technischen Schwierigkeiten bei der Verwendung bewusste Mäuse, die sehr aktiv zu sein, was zu Lockerung der implantierten Katheter und Veränderungen in den intra-abdominalen Druck, die intravesikale Druck bee...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Handelsname, Firma, </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Urethan </td><td> Urethan, Sigma-Aldrich </td><td> 315419 </td><td> Karzinogen der Gruppe 2B </td></tr><tr><td> Isofluran </td><td> Isoba, Schering-Plough Animal Health </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Polyethylenkatheter </td><td> Intramedic Polyethylen-Schlauch PE50, Becton Dickinson </td><td> 427411 </td><td></td></tr><tr><td> Operationsmikroskop </td><td> Op-Mi 6, Carl Zeiss </td><td> Op-Mi 6 </td><td></td></tr><tr><td> Tabaksbeutelnaht </td><td> Prolene 6/0, Ethicon </td><td> 8610H </td><td></td></tr><tr><td> Faszie und Hautnaht </td><td> Ethilon 4/0 oder 5/0, Ethicon </td><td> 662g oder 661G </td><td></td></tr><tr><td> postoperative Analgetika </td><td> Temgesic, Schering-Plough Animal Health </td><td></td><td> Dosierung für Ratten: 0,05 mg / kg </td></tr><tr><td> Verstärker </td><td> 78534c Monitor, Hewlett Packard </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Analysenwaagen und Balance Software zur Datenerfassung </td><td> FZ 300i, A &amp; D </td><td> FZ-300i </td><td></td></tr><tr><td> Infusionspumpen </td><td> Pumpe 33, Harvard Apparatur </td><td> HA33 </td><td></td></tr><tr><td> Zystometrie Aufzeichnungssystem </td><td> DATAQ Instruments, DI-730 Serie und WinDaq / Lite </td><td> DI-730-USB WinDaq / Lite </td><td></td></tr><tr><td> Temperatur-Registrierung </td><td> Fluke 52 KJ-Thermometer </td><td> 52 KJ </td><td></td></tr><tr><td> Druckaufnehmer </td><td> Edwards Lifesciences, Druck Monitoring-Set </td><td> T322247A </td><td></td></tr></tbody></table>

the use of cystometry in small rodents: a study of bladder chemosensation

<p class="jove_content"&gt; Die unteren Harntraktes (LUT) Funktionen als dynamisches Reservoir, das in der Lage, den Urin zu speichern und effizient zu vertreiben es zu einem geeigneten Zeitpunkt ist. Während des Speicherns Urin, jedoch wird die Blase über einen längeren Zeitraum, um Abfallprodukte ausgesetzt. Indem sie als dichte Barriere, vermeidet der epithelialen Auskleidung der LUT, das Urothel, Re-Absorption von Schadstoffen. Darüber hinaus stimulieren schädlichen Chemikalien der Blase nozizeptive Innervation und initiieren Miktion Kontraktionen der Blase Inhalte zu vertreiben. Interessanterweise hat der Blase Empfindlichkeit gegenüber schädlichen Chemikalien erfolgreich in der klinischen Praxis eingesetzt, durch intravesikal Infusion der TRPV1-Agonisten Capsaicin neurogenen Blasenüberaktivität behandeln<sup&gt; 1</sup&gt;. Dies unterstreicht den Vorteil, sich die Blase als chemosensorischen Orgel und fordert für die weitere klinische Forschung. Allerdings, ethische Fragen schränken die Möglichkeiten durchzuführen, bei Menschen, die invasive Messungen, die erforderlich sind, um die molekularen Grundlagen der LUT klinische Pharmakologie zu entwirren sind. Eine Möglichkeit, diese Einschränkung zu überwinden, ist die Verwendung von mehreren Tiermodellen<sup&gt; 2</sup&gt;. Hier beschreiben wir die Umsetzung der Zystometrie bei Mäusen und Ratten, eine Technik, die die Messung der intravesikale Druck unter den Bedingungen der kontrollierten Blase Perfusion ermöglicht.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; Nach Laparotomie wird ein Katheter in der Blase implantiert Kuppel und subkutan zur interskapularen Region getunnelt. Dann wird die Blase kann mit einer kontrollierten Geschwindigkeit befüllt werden, während die Harnröhre frei bleibt für Miktion. Während der sich wiederholenden Zyklen der Befüllung und Entleerung können intravesikale Druck über die implantierten Katheter gemessen werden. Als solche kann die Druckänderungen quantifiziert und analysiert werden. Darüber hinaus ermöglicht die gleichzeitige Messung des Volumens ungültig Unterscheidungsmerkmal Miktion Kontraktionen aus nicht Miktion Kontraktionen<sup&gt; 3</sup&gt;.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; Wichtig ist, aufgrund der Unterschiede in Harnen Steuerung zwischen Nagern und Menschen weisen zystometrischen Messungen in diesen Tieren nur begrenzte translatorische Wert<sup&gt; 4</sup&gt;. Dennoch sind sie ganz maßgeblich an der Studie von Blasenkrebs Pathophysiologie und Pharmakologie in der experimentellen präklinischen Einstellungen. Neuere Forschungen mit dieser Technik hat die Schlüsselrolle der neuartigen molekularen Akteure in den mechano-und Chemo-sensorischen Eigenschaften der Blase enthüllt.</p

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The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

Zystometrie ist eine hocheffiziente Technik zur Funktion der Blase von kleinen Tieren zu messen<em&gt; In vivo</em&gt;. Die Blase wird kontinuierlich mit Raten durch eine intravesikale Katheters kontrolliert, während die Harnröhre bleibt frei für Miktion infundiert. Dies ermöglicht eine wiederholte Füllen und Entleeren der Blase, während intravesikale Druck und Volumen ungültig erfasst werden.

Die Verwendung von Zystometrie in kleine Nagetiere: A Study of Bladder Chemosensorik

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

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22.3K Aufrufe.  KU Leuven, Belgium. Zystometrie ist eine hocheffiziente Technik zur Funktion der Blase von kleinen Tieren zu messen In vivo. Die Blase wird kontinuierlich mit Raten durch eine intravesikale Katheters kontrolliert, während die Harnröhre bleibt frei für Miktion infundiert. Dies ermöglicht eine wiederholte Füllen und Entleeren der Blase, während intravesikale Druck und Volumen ungültig erfasst werden.

Serie: The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

Mouse Bladder Wall Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. Before starting injections, the surgical area must be cleaned with soap and water and antiseptic solution. Surgical equipment must be sterilized before use and between each animal. Each mouse is placed under inhaled isoflurane anesthesia (2-5% for induction, 1-3% for maintenance) and its bladder exposed by making a midline abdominal incision with scissors. If the bladder is full, it is partially decompressed by gentle squeezing between two fingers. The cell suspension of interest is intramurally injected into the wall of the bladder dome using a 29 or 30 gauge needle and 1 cc or smaller syringe. The wound is then closed using wound clips and the mouse allowed to recover on a warming pad. Bladder wall injection is a delicate microsurgical technique that can be mastered with practice.

Mouse bladder wall injection is a useful approach to orthotopically study bladder stem cell and cancer biology. This delicate microsurgical method can be mastered with careful technique and practice.

Maus Blasenwand Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

Forschung

Medizin

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for objective diagnosis but also for the evaluation of therapeutic efficacy and resilience to trauma. Ongoing research is directed at identifying molecular biomarkers for PTSD, including traumatic stress induced proteins, transcriptomes, genomic variances and genetic modulators, using biologic samples from subjects' blood, saliva, urine, and postmortem brain tissues. However, the correlation of these biomarker molecules in peripheral or postmortem samples to altered brain functions associated with psychiatric symptoms in PTSD remains unresolved. Here, we present an animal model of PTSD in which both peripheral blood and central brain biomarkers, as well as behavioral phenotype, can be collected and measured, thus providing the needed correlation of the central biomarkers of PTSD, which are mechanistic and pathognomonic but cannot be collected from people, with the peripheral biomarkers and behavioral phenotypes, which can.
Our animal model of PTSD employs restraint and tail shocks repeated for three continuous days - the inescapable tail-shock model (ITS) in rats. This ITS model mimics the pathophysiology of PTSD 17, 7, 4, 10. We and others have verified that the ITS model induces behavioral and neurobiological alterations similar to those found in PTSD subjects 17, 7, 10, 9. Specifically, these stressed rats exhibit (1) a delayed and exaggerated startle response appearing several days after stressor cessation, which given the compressed time scale of the rat's life compared to a humans, corresponds to the one to three months delay of symptoms in PTSD patients (DSM-IV-TR PTSD Criterian D/E 13), (2) enhanced plasma corticosterone (CORT) for several days, indicating compromise of the hypothalamopituitary axis (HPA), and (3) retarded body weight gain after stressor cessation, indicating dysfunction of metabolic regulation.
The experimental paradigms employed for this model are: (1) a learned helplessness paradigm in the rat assayed by measurement of acoustic startle response (ASR) and a charting of body mass; (2) microdissection of the rat brain into regions and nuclei; (3) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for blood levels of CORT; (4) a gene expression microarray plus related bioinformatics tools 18. This microarray, dubbed rMNChip, focuses on mitochondrial and mitochondria-related nuclear genes in the rat so as to specifically address the neuronal bioenergetics hypothesized to be involved in PTSD.

We describe a rat model of post traumatic stress disorder (PTSD) that reveals the persistent alterations in neuroendocrine function and the delayed long-term, exaggerated fear response, characteristic of PTSD patients. The animal model and methods described here are useful for correlating biomarkers in brain nuclei, which are mechanistic but cannot be measured in patients, with biomarkers in peripheral white blood cells, which can.

Biomarker in einem Tiermodell für die Aufdeckung Neural, hämatologischen und Behavioral Korrelate der PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human malignancies.1 Other than surgery for the minority of patients who present with localized disease, there is little or no survival benefit of systemic therapy. Therefore, there is a great need to better understand the biology of NETs, and in particular define new therapeutic targets for patients with nonresectable or metastatic neuroendocrine tumors. 3D cell culture is becoming a popular method for drug screening due to its relevance in modeling the in vivo tumor tissue organization and microenvironment.2,3 The 3D multicellular spheroids could provide valuable information in a more timely and less expensive manner than directly proceeding from 2D cell culture experiments to animal (murine) models.
To facilitate the discovery of new therapeutics for NET patients, we have developed an in vitro 3D multicellular spheroids model using the human NET cell lines. The NET cells are plated in a non-adhesive agarose-coated 24-well plate and incubated under physiological conditions (5% CO2, 37 &deg;C) with a very slow agitation for 16-24 hr after plating. The cells form multicellular spheroids starting on the 3rd or 4th day. The spheroids become more spherical by the 6th day, at which point the drug treatments are initiated. The efficacy of the drug treatments on the NET spheroids is monitored based on the morphology, shape and size of the spheroids with a phase-contrast light microscope. The size of the spheroids is estimated automatically using a custom-developed MATLAB program based on an active contour algorithm. Further, we demonstrate a simple method to process the HistoGel embedding on these 3D spheroids, allowing the use of standard histological and immunohistochemical techniques. 
This is the first report on generating 3D spheroids using NET cell lines to examine the effect of therapeutic drugs. We have also performed histology on these 3D spheroids, and displayed an example of a single drug's effect on growth and proliferation of the NET spheroids. Our results support that the NET spheroids are valuable for further studies of NET biology and drug development.

We present a simple agarose overlay platform to grow 3D multicellular spheroids using neuroendocrine cancer cell lines. This method provides a very convenient way to examine the effect of therapeutic drugs on the neuroendocrine tumor cells. It could also help us establish human neuroendocrine tumor spheroids for cancer therapy.

Menschliche neuroendokrinen Tumor-Zelllinien als dreidimensionales Modell für das Studium der menschlichen neuroendokrinen Tumor-Therapie

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized by increased urgency and frequency of urination, as well as nocturia and general pelvic pain, especially upon bladder filling or voiding. Despite years of research, the cause of IC/BPS remains elusive and treatment strategies are unable to provide complete relief to patients. In order to study nervous system contributions to the condition, many animal models have been developed to mimic the pain and symptoms associated with IC/BPS. One such murine model is urinary bladder distension (UBD). In this model, compressed air of a specific pressure is delivered to the bladder of a lightly anesthetized animal over a set period of time. Throughout the procedure, wires in the superior oblique abdominal muscles record electrical activity from the muscle. This activity is known as the visceromotor response (VMR) and is a reliable and reproducible measure of nociception. Here, we describe the steps necessary to perform this technique in mice including surgical manipulations, physiological recording, and data analysis. With the use of this model, the coordination between primary sensory neurons, spinal cord secondary afferents, and higher central nervous system areas involved in bladder pain can be unraveled. This basic science knowledge can then be clinically translated to treat patients suffering from IC/BPS.

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized in part by pelvic pain. In order to study nervous system contributions to the condition, a physiological model of urinary bladder pain is used in mice and rats.

Harnblase Aufdehnung evozierte viszeromotorische Antworten als Modell für Bladder Pain in Mäuse

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. Sublethal ischemia has also been shown to upregulate protective mechanisms in remote tissues. A brief period of ischemia (5-10 min) in the hind limb of mammals induces self-protective responses in the brain, lung, heart and retina. The effect is known as remote ischemic preconditioning (RIP). It is a therapeutically promising way of protecting vital organs, and is already under clinical trials for heart and brain injuries. This publication demonstrates a controlled, minimally invasive method of making a limb &#8211; specifically the hind limb of a rat &#8211; ischemic. A blood pressure cuff developed for use in human neonates is connected to a manual sphygmomanometer and used to apply 160 mmHg pressure around the upper part of the hind limb. A probe designed to detect skin temperature is used to verify the ischemia, by recording the drop in skin temperature caused by pressure-induced occlusion of the leg arteries, and the rise in temperature which follows release of the cuff. This method of RIP affords protection to the rat retina against bright light-induced damage and degeneration.

Remote ischemic preconditioning (RIP) is a method of conditioning tissues against damaging stress. We have established a method of remote ischemia at the hind limb, by inflating a sphygmomanometer cuff for 5-10 min. The neuroprotective capabilities of RIP have been demonstrated in a model of retinal degeneration in rodents.

Remote Limb ischämischen Präkonditionierung: eine neuroprotektive Technique in Nagetiere

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment epithelium (RPE) cells. RPE provide critical support for photoreceptors and death or dysfunction of RPE cells is characteristic of age-related macular degeneration (AMD), the leading cause of permanent vision loss in people age 55 and older. While no cure for AMD has been identified, implantation of healthy RPE in diseased eyes may prove to be an effective treatment, and large numbers of RPE cells can be readily generated from pluripotent stem cells. Several interesting questions regarding the safety and efficacy of RPE cell delivery can still be examined in animal models, and well-accepted protocols used to inject RPE have been developed. The technique described here has been used by multiple groups in various studies and involves first creating a hole in the eye with a sharp needle. Then a syringe with a blunt needle loaded with cells is inserted through the hole and passed through the vitreous until it gently touches the RPE. Using this injection method, which is relatively simple and requires minimal equipment, we achieve consistent and efficient integration of stem cell-derived RPE cells in between the host RPE that prevents significant amount of photoreceptor degeneration in animal models. While not part of the actual protocol, we also describe how to determine the extent of the trauma induced by the injection, and how to verify that the cells were injected into the subretinal space using in vivo imaging modalities. Finally, the use of this protocol is not limited to RPE cells; it may be used to inject any compound or cell into the subretinal space.

Here we present a community accepted protocol in multimedia format for subretinally injecting a bolus of RPE cells in rats and mice. This approach can be used for determining rescue potentials, safety profiles, and survival capacities of grafted RPE cells upon implantation in animal models of retinal degeneration.

Darstellende Subretinale Injektionen in Nagetiere zu retinalen Pigmentepithelzellen in Suspension liefern

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold standard treatment for the high-grade non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC). However, since the treatment-related side effects are relevant, newer biological response modifiers with a better benefit/side effects ratio are needed.
The tumour microenvironment can influence both tumour development and therapy efficacy. In order to obtain a good model, it is desirable to implant tumour cells in the organ from which the cancer originates.
In this protocol, we describe a method for establishing a tumour in the bladder cavity of female mice and subsequent delivery of therapeutic agents; the latter are exemplified by our use of Helicobacter pylori neutrophil activating protein (HP-NAP). A preliminary chemical burn of the mucosa, followed by the injection of mouse urothelial carcinoma cell line MB49 via urethral catheterization, enables the cells to attach to the bladder mucosa. After a period, required to allow an initial proliferation of the cells, mice are treated with HP-NAP, administrated again via catheterization. The anti-tumour activity of HP-NAP is evaluated comparing the tumour volume, the extent of necrosis and the degree of vascularization between vehicle- and HP-NAP-treated animals.

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Here the method to establish a syngeneic mouse model of orthotopic bladder tumour to evaluate the anti-tumour efficacy of the bacterial protein HP-NAP is described.

Bewertung der Wirksamkeit der<em&gt; H. pylori</em&gt; Protein HP-NAP als therapeutisches Werkzeug zur Behandlung von Blasenkrebs in einem orthotopen Mausmodell

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold ...

Use of Ultra-high Field MRI in Small Rodent Models of Polycystic Kidney Disease for In Vivo Phenotyping and Drug Monitoring

Several in vivo pre-clinical studies in Polycystic Kidney Disease (PKD) utilize orthologous rodent models to identify and study the genetic and molecular mechanisms responsible for the disease, and are very convenient for rapid drug screening and testing of promising therapies. A limiting factor in these studies is often the lack of efficient non-invasive methods for sequentially analyzing the anatomical and functional changes in the kidney. Magnetic resonance imaging (MRI) is the current gold standard imaging technique to follow autosomal dominant polycystic kidney disease (ADPKD) patients, providing excellent soft tissue contrast and anatomic detail and allowing Total Kidney Volume (TKV) measurements.A major advantage of MRI in rodent models of PKD is the possibility for in vivo imaging allowing for longitudinal studies that use the same animal and therefore reducing the total number of animals required. In this manuscript, we will focus on using Ultra-high field (UHF) MRI to non-invasively acquire in vivo images of rodent models for PKD. The main goal of this work is to introduce the use of MRI as a tool for in vivo phenotypical characterization and drug monitoring in rodent models for PKD.

Use of Ultra-high Field MRI in Small Rodent Models of Polycystic Kidney Disease for In Vivo Phenotyping and Drug Monitoring

The use of ultra-high field MRI as a non-invasive way to obtain phenotypic information of rodent models for polycystic kidney disease and to monitor interventions is described. Compared with the traditional histological approach, MRI images can be acquired in vivo, allowing for longitudinal follow-up.

Verwendung von Ultrahochfeld-MRT in Kleintier Modelle aus Polyzystische Nierenerkrankung für<em&gt; In Vivo</em&gt; Phänotypisierung und Drug Monitoring

Several in vivo pre-clinical studies in Polycystic Kidney Disease (PKD) utilize orthologous rodent models to identify and study the genetic and molecular ...

Use of a Piglet Model for the Study of Anesthetic-induced Developmental Neurotoxicity (AIDN): A Translational Neuroscience Approach

Anesthesia cannot be avoided in many cases when surgery is required, particularly in children. Recent investigations in animals have raised concerns that anesthesia exposure may lead to neuronal apoptosis, known as anesthesia-induced developmental neurotoxicity (AIDN). Furthermore, some clinical studies in children have suggested that anesthesia exposure may lead to neurodevelopmental deficits later in life. Nonetheless, an ideal animal model for preclinical study has yet to be developed. The neonatal piglet represents a valuable model for preclinical study, as they share a striking number of developmental similarities with humans.
The anatomy and physiology of piglets allow for implementation of rigorous human perioperative conditions in both survival and non-survival procedures. Femoral artery catheterization allows for close monitoring, thus enabling prompt correction of any deviation of the piglet's vital signs and chemistries. In addition, there are multiple developmental similarities between piglets and human neonates. The techniques required to use piglets for experimentation will require experience to master. A pediatric anesthesiologist is a critical member of the investigative team. We describe, in a general sense, the appropriate use of a piglet model for neurodevelopmental study.

Use of a Piglet Model for the Study of Anesthetic-induced Developmental Neurotoxicity AIDN: A Translational Neuroscience Approach

Anesthesia-induced developmental neurotoxicity (AIDN) research has focused on rodents, which are not broadly applicable to humans. Non-human primate models are more relevant, but are cost-prohibitive and difficult to use for experimentation. The piglet, in contrast, is a clinically relevant, practical animal model ideal for the study of anesthetic neurotoxicity.

Verwendung eines Ferkelmodells für die Untersuchung der anästhetisch-induzierten Entwicklungsneurotoxizität (AIDN): Ein Translational Neuroscience Approach

Anesthesia cannot be avoided in many cases when surgery is required, particularly in children.  Recent investigations in animals have raised concerns that ...

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal model to investigate bladder remodeling in pBOO are female rodents undergoing partial obstruction at the proximal urethra. Variability in the degree of obstruction and animal mortality are major concerns with proximal obstruction. Furthermore, dissecting around the proximal urethra and bladder neck jeopardizes bladder innervation.
We developed a nerve-sparing mid-urethral obstruction (NeMO) model for pBOO avoiding the disadvantages of the traditional model. We approached the urethra just inferior to the pubic symphysis, which obviated the need for laparotomy as well as for dissection in this area; also, the striated urethral sphincter remained untouched. We performed NeMO in female Sprague-Dawley rats (12 obstructions, 6 sham animals) as well as in female C57/bl6 mice (20 obstructions, 18 sham animals). After two weeks, we evaluated bladder function, bladder mass, and body mass.
We had no mortalities among obstructed- or sham-operated female rats; as described for the traditional proximal pBOO-method, we tied the suture around the proximal urethra and a temporarily placed 0.9 mm metal rod. NeMO induced an 85% increase in bladder mass after two weeks, average residual urine volume was 0.4 mL in partially obstructed rats while only 0.03 mL in sham animals. In mice, we tested 3 sizes of cannulas that we placed along the urethra when tying the suture. We found that using a 27-gauge cannula resulted in over 50% animal mortality; placing the 25-gauge cannula did not yield the desired response in increasing bladder mass; utilizing a 26-gauge cannula yielded favorable results with minimal animal mortality (1/8) yet a significant 2-fold increase in bladder mass.

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

Traditional modeling of partial bladder outlet obstruction in rodents is fraught with animal mortality. A denervation injury from dissection around the proximal urethra and bladder neck is also of major concern. We developed and evaluated a safe and reliable mid-urethral obstruction model, avoiding the shortcomings of the traditional model.

Nerve sparende Mittelharnröhrenobstruktion (NEMO) in Female Kleine Nagetiere

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...