Vielen Dank an Elena Mitsi (Wissenschaftlicher Mitarbeiter) und Sr. Carole Hancock (Research Krankenschwester) und OP-Personal für ihren Beitrag zu filmen, und David Shaw (Forschung Krankenschwester) für seine Unterstützung mit unseren Forschungs Bronchoskopien. Vielen Dank auch an unsere ehrenamtlichen Rebecca Dunphy dafür, dass dieses Verfahren, gefilmt zu werden.

1. Die Themen werden auf Anreise mit dem Atem Forschung Krankenschwester Met <ol><li> Das Thema wurde Fasten für&gt; 4 h für feste Nahrung und 2 h für klare Flüssigkeiten ein. </li><li> Das Verfahren wird als Tag Fall mit entsprechenden Pre-und Post-Prozedur überprüft (nach Standard-Krankenhauspolitik) durchgeführt. </li><li> Das Thema trägt einen Krankenhauskittel. </li><li> Eine kleine Gauge-Kanüle eingeführt wird (idealerweise in die linke Hand) und bleibt in situ bis zum Ende der Post-Verfahren Erholungsphase ein. </li><li> Vorverfahren Beobachtungen getroffen werden (Blutdruck, Herzfrequenz, Sauerstoffsättigung [sats]). </li><li> Das Thema ist mit der Bronchoskopie-Suite übertragen. </li></ol> 2. Das Thema ist für die Vorgehensweise in der Suite durch eine Atemforschungsmediziner in Bronchoskopie Erfahrene Vorbereitet <ol><li> Überwachungsgeräte angeschlossen ist, einschließlich, 3-Kanal-EKG, Pulsoximeter 1,10 und Blutdruckmessgerät. Anesthetic-Unterstützung ist nicht erforderlich einschließlich schriftlicher Einwilligung. </li><li> Sauerstoff kann über eine Nasenkanüle mit bis zu 4 l / min geliefert werden, zu erreichen sats&gt; 90% ein. </li><li> Der Betreiber prüft die Bronchoskop, dies beinhaltet eine effektive Absaugung durch Absaugen sterile physiologische Kochsalzlösung. </li><li> Lokalanästhesie mit Lidocain in die Nasenwege (mit Instillagel 1) und der Mundschleimhaut erreicht (mit Xylocain) </li><li> Wenn Sedierung geeignete und von der Person beantragt, so wird die intravenöse Midazolam ein. Eine entsprechende Umkehrmittel (Flumazenil) ist ab sofort verfügbar. </li><li> Reanimationsausrüstung sollten leicht zugänglich sein 1,10. </li></ol> 3. Das Bronchoskop wird eingefügt und positioniert, <ol><li> Intubation ist in der Regel über die Nase. Ist dies nicht möglich, da Nasenpolypen, entzündeten Nasenmuscheln oder irgendwelche Beschwerden dann das Motiv über den Mund intubiert (ein Mundschutz verwendet wird, um zu verhindern,Schäden an Rahmen oder der Person Zähne). </li><li> Lokalanästhesie an der Kehlkopf wird mit 4% Lidocain abgeschlossen, in der Regel insgesamt von 4-6 ml verwendet. Häufig dies verursacht Husten auf Instillation. </li><li> Die Stimmbänder übergeben werden, und ferner Schleimhautanästhesie mit 2 ml Aliquots von 2% Lidocain bei der Carina bei der Teilung des rechten Unterlappen (RLL) und rechte Mittellappen (RML) und an der RML Eingang. </li><li> Das Bronchoskop wird innerhalb des RML positioniert, idealerweise im Mittelsegment in einer Position, wo es distal genug, um in einer sicheren Position ist, aber nicht zu, so daß die distalen Luftwege zusammenbricht, wenn ein Saugen angewandt unter Verwendung des Saug-Taste (&quot;Wink-Test&quot; ). </li><li> Gute Positionierung während der Test Nachricht von einem Bronchoskop, die vollständig in Position durch den bronchoscopist und einem Atemwege, die nicht vollständig schließen sofort auf sanfte Saugwirkung tut aufrechterhalten werden kann angezeigt. </li></ol> 4. Die BAL durchgeführt <ol><li> Vier 60-ml-Spritzen sind vorge60 ml, 50 ml, 50 ml und 40 ml in aufeinander Spritzen - mit erwärmter physiologischer Kochsalzlösung gefüllt. Wenn das Motiv und bronchoscopist sind bereit die erste Spritze von Kochsalzlösung wird von der Bronchoskopie Assistent eingeflößt während die bronchoscopist hält die Position in der RML. </li><li> Sanften Hand Sog wird dann vom Assistenten mit dem gleichen Port und 50-ml-Spritze durchgeführt. </li><li> Dieses Verfahren wird dann wiederholt eine weitere 3x mit einem maximalen Volumen von 200 ml in den spezifischen Technik verwendet. </li><li> Die abgerufenen BAL-Flüssigkeit wird sanft in gekennzeichneten Behältern bereits auf schmelzendem Eis gehalten ausgewiesen. Glasbehälter kann, um die Zellhaftung zu hemmen und zu maximieren Zellrück presiliconized werden. </li><li> Die BAL-Flüssigkeit trüb erscheint gegen das Licht mit Oberflächen Seifenblasen durch Tenside gebildet. </li><li> Das Bronchoskop wird langsam vollständig zurückgezogen. </li><li> Die BAL-Flüssigkeit wird unverzüglich auf Eis zur sofortigen Verarbeitung transportiert. </li></ol> 5. Betreff Rettung </p&gt; <ol><li> Das Thema wird für 2-4 Stunden durch die Atemforschungs Krankenschwester auf einer Station erholt. </li><li> Während dieser Zeit dürfen sie zur Ruhe und dann nur essen und trinken&gt; 60 min 1 nach dem Eingriff (wenn ihre Schwalbe als sicher beurteilt), um das Risiko der Aspiration. </li><li> Postprozedurale Beobachtungen werden überwacht und aufgezeichnet. Eine klinische Prüfung erfolgt vor der Entlassung. </li><li> Das Thema wird Predischarge über die häufigsten Nebenwirkungen (Fieber, mild rechts submammary Beschwerden in der Brust, Halsschmerzen) informiert und angesichts einer Kontaktnummer für den Fall erhebliche Nebenwirkungen auftreten, ein. </li><li> Das Thema wird an 1-5 Tagen nach dem Eingriff mit einer klinischen Kontakt Follow-up. Dies kann entweder über das Telefon oder in Person zu sein. </li></ol> 6. Die Zellen werden im Labor Isoliert - Führen auf Melting Ice Wo Mögliche <ol><li> Das Volumen der BAL-Flüssigkeit wird durch eine doppelte Schicht von steriler Gaze Tupfer aufgenommen und filtriert,Schleim-Stecker in vorgekühlte, sterile 50 ml Zentrifugenröhrchen entfernen. </li><li> Zellen werden durch Zentrifugation bei 500 × g bei 4 ° C für 5-10 min pelletiert und durch Vortexen in 50 ml kalter physiologischer Kochsalzlösung gewaschen. Zentrifugation wird einmal wiederholt. </li><li> Zellen werden in Kulturmedium resuspendiert (RPMI-1640 + 10% fötales Rinderserum + 2 mM L-Glutamin + Penicillin [40 IU / ml], Streptomycin [75 IU / ml], und Amphotericin B [0,5 IU / ml]) und Differenzzählung durchgeführt wird unter Verwendung eines gleichen Volumens von Trypanblau und einem Hämocytometer. </li><li> Die Zellsuspension wird normalisiert auf die gewünschte Dichte (wir verwenden 1 x 10 6 Zellen / ml), durch Pipettieren in geeignete Gewebekulturplatten eingebracht und bei 37 ° C für 3 Stunden, um Haftung zu Makrophagen inkubiert. 1 ml dieser Zellsuspension pro Well für 24-Well-Kulturplatten geeignet. </li><li> Für Lymphozyten-Arbeit, nach 3 Stunden Inkubation wird das Kulturmedium vorsichtig nach oben und unten 3x pipettiert und gesammelt. Dieses Medium enthält Lymphozytenund nicht-adhärenten Makrophagen und Lymphozyten verwendet werden, um Funktion zu beurteilen, sondern kann auch in Reinigungsschritten verwendet werden, z. B. mit CD14 magnetischen Kügelchen an Makrophagen zu entfernen. </li><li> Makrophagen für Arbeit, nach 3 h Inkubation wird das Medium vorsichtig mit minimaler Pipettieren entfernt und mit frischem, warmem Medium ohne Antibiotika (RPMI 1640 + 10% fötales Rinderserum + 2 mM L-Glutamin) ersetzt. Die Makrophagen sind Anhänger der Gewebekulturplatte (siehe Fig. 1). </li></ol>

<ol>
	<li>BTS, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+British+Thoracic+Society+Bronchoscopy+Guideline+Committee+-+A+sub-Committee+of+the+Standards+of+Care+Committee+of+the+British+Thoracic+Society.">The British Thoracic Society Bronchoscopy Guideline Committee - A sub-Committee of the Standards of Care Committee of the British Thoracic Society.</a> Thorax. 56 (Suppl I), 1-21 (2001).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+recommendations+and+guidelines+for+bronchoalveolar+lavage+(BAL)+report+of+the+European+Society+for+Pneumology+Task+Group.">Technical recommendations and guidelines for bronchoalveolar lavage (BAL) report of the European Society for Pneumology Task Group.</a> Eur. Respir. , 561-585 (1989).</li><li>Gordon, S. B., Irving, G. R., Lawson, R. A., Lee, M. 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G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+lavage+in+the+normal+volunteer+subject.+2.+Safety+and+results+of+repeated+BAL,+and+use+in+the+assessment+of+intrasubject+variability.">Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. 2. Safety and results of repeated BAL, and use in the assessment of intrasubject variability.</a> Chest. 94, 281-285 (1988).</li><li>De Brauwer, E. I., Jacobs, J. A., Nieman, F., Bruggeman, C. A., Drent, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+lavage+fluid+differential+cell+count.+How+many+cells+should+be+counted.">Bronchoalveolar lavage fluid differential cell count. How many cells should be counted.</a> Anal. Quant. Cytol. Histol. 24, 337-341 (2002).</li><li>Mtunthama, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malawians+permit+research+bronchoscopy+due+to+perceived+need+for+healthcare.">Malawians permit research bronchoscopy due to perceived need for healthcare.</a> J. Med. Ethics. 34, 303-307 (2008).</li><li>Pereira, W., Kovnat, D. M., Snider, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+prospective+cooperative+study+of+complications+following+flexible+fiberoptic+bronchoscopy.">A prospective cooperative study of complications following flexible fiberoptic bronchoscopy.</a> Chest. 73, 813-816 (1978).</li><li>Huang, Y. C., Bassett, M. A., Levin, D., Montilla, T., Ghio, A. 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Andrea M. Collins wird von der Bill-und-Melinda-Gates-Stiftung, und keine potenziellen Interessenkonflikte finanziert. Sie hat Mittel von Merck (MSD) und GSK zu Konferenzen und Vortragshonorare zu besuchen. 50 Forschungs BALs unabhängig voneinander durchgeführt. Jamie Rylance wird durch den Wellcome Trust finanziert und hat keinen Interessenkonflikt. Er hat keine anderen Mittel erhalten. 70 Forschungs BALs unabhängig voneinander durchgeführt. Daniel G. Wootton wird von einem NIHR PhD Fellowship finanziert und hat keine Interessenkonflikte. 40 Forschungs BALs unabhängig voneinander durchgeführt. Angela D. Wright hat keine potenzielle Interessenkonflikte. Mit über 100 Forschungs BALs unterstützt. Adam Wright KA hat keine potenzielle Interessenkonflikte. Er hat über 50 BAL-Proben verarbeitet. Duncan G. Fullerton </strong&gt; Hat keine potenzielle Interessenkonflikte. 100 Forschungs BALs unabhängig voneinander durchgeführt. Stephen B. Gordon hat keine potenzielle Interessenkonflikte. Er hat Mittel von Merck (MSD) und Novartis um an Konferenzen teilzunehmen. 400 Forschungs BALs unabhängig voneinander durchgeführt.

Um gute Ergebnisse zu erzielen, die folgenden sind hilfreich: <ol><li> Gute anesthetisation an der Basis der Zunge und der hinteren Rachen. Dies ist wichtig, weil es Verfahrens Toleranz des Patienten und der Gesamtkomfort verbessert. </li><li> Entweder ein pädiatrischer (Außendurchmesser 3,4-3,6 mm) oder erwachsenen Bronchoskop (Außendurchmesser 4,8 bis 5,9 mm) verwendet werden. </li><li> Wenn es irgendein Unbehagen während nasale Intubation, bevorzugt orale Intubation. Im Allgemeinen Nasen Intubation ist entweder eine einfache Technik oder aufgegeben werden sollte. </li><li> Nach der erstmaligen Einträufeln von Lidocain auf die Oropharynx, können Gegenstand der Bronchoskop zurückgenommen bevorzugen anhängigen dem Beginn der Anästhesie, insbesondere wenn das Bronchoskop oral eingeführt. </li><li> Stellen Sie sicher, mindestens 10 x 10 ml-Spritzen sind mit nur 2-4 ml Lidocain vorgefüllt. Die Luft sollte in den Spritzen ermöglicht verbesserte Lieferung der Narkose direkt auf Schnüre und endobronchialer schleimig gelassen werdensa. </li><li> Seit Husten während des Verfahrens deutlich reduziert BAL Ausbeute; erwärmt mit Kochsalzlösung und eine gute Schleimhautanästhesie sind wichtig, um diese zu reduzieren. </li><li> Die 50-ml-Spritzen sind mit Kochsalzlösung vorgefüllt erwärmt werden. Es ist für die ersten 50 ml physiologischer Kochsalzlösung eingeflößt, zwischen 10-20 ml aufgrund dead-space Verlust und der Rest läuft in der terminalen Luftwege ergeben gemeinsam. Weitere Aliquots geben einen größeren Anteil der Flüssigkeit. </li><li> Der Betreiber sollte immer die Bronchoskop vor der Intubation zu überprüfen, einschließlich der Gewährleistung effektiven Absaugung durch Absaugen sterile physiologische Kochsalzlösung. Verlust der Saugwirkung kann allgemein durch Abknicken des Schlauches oder Lecks um die Verbindungen mit dem Bronchoskop oder Saugvorrichtung auftreten. </li><li> Bei der manuellen Absaugung, idealerweise der Atemwege sollten nicht zusammenbrechen. Wenn Sog immer wieder zusammenbricht, die Atemwege sind BAL kehrt zu einem Ventilmechanismus reduziert und lokale Entzündungen und Blutungen ist wahrscheinlicher: dies wiederum macht die Atemwege mErz reizbar und Husten wahrscheinlicher. Die Wahl der am besten geeigneten RML subsegmentalen Zweig und mit geringer Saugdrücke sind deshalb beide wichtig. </li><li> Wenn Luft ständig abgesaugt überprüfen Sie die Verbindung der Spritze mit dem Bronchoskop und auch die Position des Bronchoskops im distalen Luftwege. Wenn dies ein wiederkehrendes Problem, post-Verfahren zu gewährleisten, dass keine Löcher in der Bronchoskop selber. </li><li> BAL von Rauchern häufig dunkler aufgrund der Anwesenheit des intrazellulären Partikel. Raucher können die Bronchoskopie weniger gut vertragen und haben vermehrtes Husten. </li><li> Die bevorzugte BAL Volumenausbeute&gt; 100 ml. Eine Ausbeute von&gt; 150 ml ist ausgezeichnet. Es wurden keine Erträge&gt; 170 ml erlebt. Gibt es keine lineare Beziehung zwischen der Zellausbeute und BAL Volumenausbeute. </li><li> Die Renditen von &lt;100 ml sind, nach unserer Erfahrung eher zu Nebenwirkungen wie Husten, Brustschmerzen und Fieber führen. Wir beraten, dass Probanden mit Ausbeuten von &lt;100 ml reco seinin Linksseitenlage Vered, kann diese Entwässerung eines verbleibenden Lungenflüssigkeit helfen. </li><li> Klinische Kontakt sollte mit dem Thema innerhalb von 1-5 Tagen erfolgen, um keine Nebenwirkungen zu gewährleisten. </li><li> Midazolam Sedierung ist für &lt;50% der Patienten in Großbritannien und &lt;5% in Malawi eingesetzt. Midazolam scheint nicht direkt die Verträglichkeit zu verbessern, einige Betreiber das Gefühl, dass Sedierung kann manchmal kontraproduktiv sein bei der Aufrechterhaltung einer kohärenten (und beruhigend) Dialog mit dem Thema. </li><li> Nach unserer Erfahrung gibt es eine signifikante Lernkurve mit dieser Technik. Zum Beispiel die Koordination zwischen Arzt und Krankenschwester braucht Zeit, und die Renditen sind oft niedriger am Anfang des Lernprozesses. </li><li> Bei HIV-positiven Patienten, verwenden wir Antibiotika prophylaktisch prebronchoscopy. </li></ol>

Hintergrund Bronchoskopie wurde für die klinische Praxis entwickelt, es ist weit verbreitet sowohl diagnostisch als auch therapeutisch 1,2 verwendet. Bronchoalveoläre Lavage (BAL) entfernt nicht-adhärenten Zellen und Lunge Futter Flüssigkeit aus der Schleimhautoberfläche; Biopsie wird verwendet, um Schleimhaut und Submukosa Gewebe probieren. In Forschungsumgebungen ermöglicht BAL Abtastung angeborenen (Lungen-Makrophagen 3-5), Mobil (B-und T-Zellen, 6) und humorale (Immunglobulin 7) Reaktionen in der Lunge. BAL ist international für Forschungszwecke 8 angenommen und seit 1999 die Technik in&gt; 1.000 Probanden in Großbritannien und Malawi von unserer Gruppe durchgeführt. Wir verwenden diese Technik in den Studien der angeborenen zellulären und humoralen Immunantwort auf den Pneumokokken-Antigen einschließlich experimenteller menschlichen Pneumokokken-Wagen 9,17, Biomasse Rauch 5, HIV und die Impfung und Ergänzung der Behandlung stustirbt in Genesung von einer Lungenentzündung. Unsere Technik nutzt sanfte Hand Absaugen von Flüssigkeit eingeflößt, dies ist für die BAL-Volumen zurück maximieren und gelten Mindestscherkraft auf Flimmerepithelien, um die Struktur und Funktion von Zellen in der BAL-Flüssigkeit zu bewahren. In einem Forschungskontext BAL nutzt eine andere Technik als die durch Atem-und Intensivmediziner (oft als bronchiale Wäsche, Wasch, Spülung, oder BAL), die darauf abzielen, diagnostischen oder therapeutischen Nutzen zu gewinnen praktiziert. Die Forschung Technik wurde entwickelt, um Zellen zu ernten und Lebensfähigkeit zu erhalten, um das Wachstum von Zellen in Kultur ex vivo zu erleichtern. Aus diesen Gründen ist die Forschung Technik verwendet ein größeres Volumen instillate (typischerweise in der Größenordnung von 200 ml) und beschäftigt manuellen Absaugung zu Zellschäden zu verringern. Die Patienten werden Lokalanästhetikum gegeben, bot Sedierung (Midazolam), und gut vertragen das Verfahren mit minimalen Nebenwirkungen. Mündliche und schriftliche subjektivent Informationen verbessert die Toleranz und eine schriftliche Einverständniserklärung ist zwingend ein. Ziel Das übergeordnete Ziel ist, dass das Verfahren sicher und wirksam zu sein. Themen sollten keine physiologische Störung erleben und Betreiber sollten konsequent von über 100 ml BAL von Patienten zu sammeln. Nach dem Eingriff sollten Themen minimalen Nebenwirkungen zu erleben. Sicherheit Sicherheit der Person im Vordergrund steht. Themen werden sorgfältig mit klarem und Ausschlusskriterien ausgewählt. Dieses Protokoll enthält eine Beschreibung der möglichen Risiken und die getroffenen Maßnahmen, um sie zu mildern. Kontraindikationen für Forschung Bronchoskopie kann absolut oder relativ ausgedrückt werden kann, und werden in unserem Studienprotokoll als Ausschluss-und Einschlusskriterien enthalten. Unsere Themen sind alle abgeschirmt zu voller Gesundheit zu gewährleisten. Absolute Kontraindikationengehören instabile Halswirbelsäule, reagiert Hypoxie, instabile Angina pectoris, Blutungsneigung, Herzrhythmusstörungen und bösartige. Relative Kontraindikationen, einschließlich der Bedingungen mit erhöhten Komplikationsraten verbunden sind, gehören: Allgemein: schlecht Genossenschaft ein Thema, eine signifikante allgemeine medizinische Problem zB Epilepsie, vorherige schlecht vertragen Bronchoskopie, bekannten Nebenwirkungen von Lidocain oder Midazolam, Schwangerschaft, schlechte Ernährung. Atemwege: Hypoxie [Sättigungen (sats) on air &lt;94%], Hyperkapnie, instabile Asthma 1, wesentlich beeinträchtigt Atemfunktion 1 (FEV 1 &lt;1 l), Lungenbluthochdruck. Herz-Kreislauf: Urämie, innerhalb von 6 Wochen nach Myokardinfarkt 1, obere Hohlvene Obstruktion. Sonstiges: Immunsuppression (unsere Gruppe führt regelmäßig dieses Verfahdure bei HIV-positiven Patienten). Siehe Tabelle 1 - Risiken mit BAL für Forschung verbunden.

<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:966px;" width="966">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:25px;">
			Material
			</td>
			<td style="width:161px;height:25px;">
			Company
			</td>
			<td style="width:151px;height:25px;">
			Catalogue Number
			</td>
			<td style="width:410px;height:25px;">
			Comments
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Fibreoptic bronchoscope, light and suction source
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Surgical gown, sterile gloves
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sphygnomanometer
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For continuous patient monitoring
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Pulse oximeter
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For continuous patient monitoring
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			3 lead ECG monitor
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For continuous patient monitoring
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Nasal oxygen delivery 2-4l/min
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Lidocaine 10% spray (Xylocaine)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			AstraZeneca
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For topical anaesthesia
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Lidocaine hydrochloride 2%
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For topical anaesthesia
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Lidocaine gel (Instillagel)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Farco-Pharma, Germany
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Normal saline, sterile 200ml
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Warm to 30oC
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			10ml taper-end syringe (x10)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For administration of lidocaine
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Intravenous cannula 18G
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For administration of midazolam
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Midazolam
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For sedation
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Flumazenil
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Reversal of benzodiazepine sedation (emergency use only)
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			60ml taper-end syringes (x4)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For normal saline injection and BAL fluid withdrawal.
			May require connector to attach to the injection port of the bronchoscope
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sterile gauze swab
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Vernaid, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sterile container for BAL fluid
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			See text and comments
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Siliconised glass bottles reduce macrophage adherence. Alternatively, 50ml centrifuge tubes may be used (total capacity 200ml)
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sigmacote
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			SL2
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Only if siliconised glass bottles used. NB: Harmful and flammable. If used, follow precautions detailed in manufacturer&#8217;s MSDS
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Centrifuge
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;"></td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			At least 4x50ml tube capacity. Refrigeration to 4oC preferred.
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Shandon Cytospin centrifuge
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Thermo Scientific, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			RPMI 1640 medium with L-glutamine
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			R8758
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Fetal bovine serum
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			F6178
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Penicillin-Streptomycin
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			P4333
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Amphotericin B
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			A2942
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Tissue culture plates
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Greiner Bio-One, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			662160
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Glass microscope slides
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Shandon cytofunnel
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Thermo Scientific, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			A78710003
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Shandon cytoclip
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Thermo Scientific, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			59910052
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Hemacolor staining set (fixative, red and blue reagents)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Merck, Germany
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			111661
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Use according to manufacturer&#8217;s instructions
			</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bronchoalveolar lavage (bal) for research; obtaining adequate sample yield

Wir beschreiben eine Technik für die Forschung Bronchoskopie mit BAL (BAL) mit manuellen Hand Sog, um nicht-adhärenten Zellen und Lunge Futter Flüssigkeit aus der Schleimhautoberfläche zu entfernen. In Forschungsumgebungen ermöglicht BAL Abtastung angeborenen (Lunge Makrophagen), Mobil (B-und T-Zellen) und die humorale (Immunglobulin)-Antworten innerhalb der Lunge. BAL ist international für Forschungszwecke akzeptiert und seit 1999 die Technik in&gt; 1.000 Probanden in Großbritannien und Malawi von unserer Gruppe durchgeführt. Unsere Technik nutzt sanfte Hand Absaugen von Flüssigkeit eingeflößt, dies ist für die Maximierung der BAL-Volumen zurückgeführt und gelten Mindestscherkraft auf Flimmerepithelien, um die Struktur und Funktion von Zellen in der BAL-Flüssigkeit erhalten und lebensfähig zu erhalten, um das Wachstum zu erleichtern von Zellen in ex-vivo-Kultur. Die Forschungstechnik verwendet daher ein größeres Volumen insDestillat (typischerweise in der Größenordnung von 200 ml) und beschäftigt manuelle Absaugung, um Zellschäden zu reduzieren. Die Patienten werden Lokalanästhetikum gegeben, bot Sedierung (Midazolam), und gut vertragen das Verfahren mit minimalen Nebenwirkungen. Mündliche und schriftliche Fachinformationen verbessert die Toleranz und eine schriftliche Einverständniserklärung ist Pflicht. Sicherheit der Person im Vordergrund steht. Themen werden sorgfältig mit klarem und Ausschlusskriterien ausgewählt. Dieses Protokoll enthält eine Beschreibung der möglichen Risiken und die Schritte unternommen, um sie zu mildern, eine Liste der Kontraindikationen, Pre-und Post-Prozedur überprüft, sowie präzise Bronchoskopie-und Labortechnik.

Gute klinische Ergebnisse sind ein BAL Volumen von über 100 ml und ein Thema, die in den meisten erlebt hat, kleinere Beschwerden (siehe Tabelle 1). Dies erfordert eine entspannte und kooperative Thema. Der Arzt muss sicher sein, voll und ganz bereit (Werkstoffe) und Verständnis gegenüber der Freiwilligen. Inter-und intraindividuelle Variabilität in der Zellausbeute (einschließlich Differentialblut) beschrieben worden. Differentialzellzählungen von gesunden Probanden in der Regel&gt; 90% Makrophagen, die mit einer kleinen Anzahl von Neutrophilen (&lt;2%) und Lymphozyten (5-10%). BAL-Zellen auf Objektträger zentrifugiert, kann mit einem Differenzkernfärbung angefärbt werden, um diese Informationen (Abbildung 1) zu erhalten. In Fig. 1 sind BAL-Zellen wurden fixiert und gefärbt mit Hemacolor Färbung nach den Anweisungen des Herstellers. Mindestens 300 Zellen gezählt, um zuverlässige Ergebnisse zu erhalten, werden Makrophagen,Neutrophile und Lymphozyten; 500 Zellen für seltener Zelltypen. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Gefahr </td><td> Risiko </td><td> In diesem Protokoll reduziert nach: </td></tr><tr><td colspan="3"> Wirkung der Bronchoskopie und BAL 1, 14 </td></tr><tr><td> Leichte Beschwerden </td><td> &lt;25% 14 # </td><td> Entsprechende Analgesie und Sedierung. Zuversichtlich und fürsorgliche Umgang mit dem Thema. </td></tr><tr><td> Nasenbluten </td><td> &lt;1% # </td><td> Mild Druck für nur nasale Intubation. Wenn unterliegen Beschwerden oder verengte Öffnung - orale Intubation statt. </td></tr><tr><td> Endobronchial Blutung (Bluthusten) </td><td> &lt;0,1% * 15 </td><td> Keine Biopsien entnommen. Eine sorgfältige Kontrolle während der Bronchoskopie - Vermeidung Schleimhaut der Atemwege. </td></tr><tr><td> Nausea, Erbrechen und Aspiration Pneumonie </td><td> &lt;0,02% 14, # </td><td> Fasten für feste Nahrung&gt; 4 Std. Vorverfahren ein. Angemessene Lokalanästhesie. Semirecumbent Position während der Prozedur. Sorgfältige Beobachtung post-Verfahren. </td></tr><tr><td> Fieber </td><td> 0,01 14-1% #, 16 </td><td> Bezieht sich auf die Entzündung und kann durch maximal Sammlung von BAL minimiert. Einzellappen BAL nur. # </td></tr><tr><td> Wunde Nase / Rachen und Heiserkeit </td><td> &lt;25% 14 # </td><td> Angemessene Lokalanästhesie von Nase, Rachen und Kehlkopf (Minimierung Husten). </td></tr><tr><td> Infektion </td><td> &lt;0,1% der HIV-negativen, 1% der HIV-positiven 14, # </td><td> Standard-Bronchoskop Waschverfahren ein. Einzellappen BAL nur. # Frühzeitiges Erkennen der Infektion: klinische Prüfung innerhalb 1 Stunde eind klinischen Kontakt 1-5 Tage nach der Bronchoskopie. </td></tr><tr><td> Brustschmerzen / Husten </td><td> &lt;0,2% 14, # </td><td> Einzellappen nur BAL. Maximal BAL-Sammlung. # </td></tr><tr><td colspan="3"> Auswirkungen von Drogen: Lidocain, Midazolam </td></tr><tr><td> Arrhythmie </td><td> Sehr selten * </td><td rowspan="3"> Maximal 5 mg / kg 14 Lidocain verwendet. Erwärmt normaler Kochsalzlösung getropft. # Pulsoximetrie (sats&gt; 90% mit Sauerstoff Ergänzung), Herzüberwachung im gesamten Verfahren. Benzodiazepine Antagonisten (Flumazenil) sofort verfügbar. </td></tr><tr><td> Desorientierung / Agitation </td><td> &lt;0,1% † # </td></tr><tr><td> Cardio Atemdepression </td><td> Sehr selten * </td></tr></tbody></table> * Nicht in unserer Gruppe in über 1.500 Forschungsverfahren erlebt. † idiosyncratic eher als Dosis-abhängige Reaktion. # Erfahrung unserer Gruppe in über 1.500 Forschungsverfahren. Tabelle 1. Risiken im Zusammenhang mit BAL für Forschung verbunden. Dies schließt die Gefahr oder ein Risiko und wie diese unter Verwendung der beschriebenen Technik reduziert. Auswirkungen der Bronchoskopie / BAL und Auswirkungen von Arzneimitteln verwendet werden, enthalten. <img alt="Figur 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/4345/4345fig1highres.jpg" width="500" /> Fig. 1 ist. Ein Objektträger Zeige BAL Makrophagen und Neutrophile Gelegentliche. BAL-Zellen in Methanol fixiert und mit Hemacolor rot (Eosin Y) und Blau (Azur B) gefärbt.

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Bronchoalveolar Lavage BAL for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

Wir beschreiben eine Technik für die Forschung Bronchoskopie und BAL mit Niederdruck-Absaugung. Die Technik wird verwendet, um die Immunzellen aus der Lunge bronchoalveolären Oberflächen ernten. Lokalanästhesie und milden Sedierung (Midazolam) verwendet. Themen vertragen die Prozedur gut und Erfahrung minimalen Nebenwirkungen.

Bronchoalveoläre Lavage (BAL) für Forschung, Beschaffung angemessene Probenausbeute

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove ...

bronchoalveolar-lavage-bal-for-research-obtaining-adequate-sample

Research

JoVE Journal

Medicine

Bronchoalveolar Lavage (BAL) for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

73.0K Aufrufe.  National Institute for Health Research.  Wir beschreiben eine Technik für die Forschung Bronchoskopie und BAL mit Niederdruck-Absaugung. Die Technik wird verwendet, um die Immunzellen aus der Lunge bronchoalveolären Oberflächen ernten. Lokalanästhesie und milden Sedierung (Midazolam) verwendet. Themen vertragen die Prozedur gut und Erfahrung minimalen Nebenwirkungen. 

Serie: Bronchoalveolar Lavage BAL for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

Generation of Comprehensive Thoracic Oncology Database - Tool for Translational Research

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer specimens and clinical data to be available to researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database also captures a large volume of genomic and proteomic data obtained from various tumor tissue studies. A team of clinical and basic science researchers, a biostatistician, and a bioinformatics expert was convened to design the database. Variables of interest were clearly defined and their descriptions were written within a standard operating manual to ensure consistency of data annotation. Using a protocol for prospective tissue banking and another protocol for retrospective banking, tumor and normal tissue samples from patients consented to these protocols were collected. Clinical information such as demographics, cancer characterization, and treatment plans for these patients were abstracted and entered into an Access database. Proteomic and genomic data have been included in the database and have been linked to clinical information for patients described within the database. The data from each table were linked using the relationships function in Microsoft Access to allow the database manager to connect clinical and laboratory information during a query. The queried data can then be exported for statistical analysis and hypothesis generation.

A thoracic oncology database was developed to serve as a comprehensive repository for clinical and laboratory data for the purposes of translational research. The database will serve translational cancer researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database is adaptable to other cancer models, as well as other human diseases.

Generation umfassender Thoracic Oncology Database - Tool für Translational Research

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer ...

Forschung

Medizin

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

Bilaterale Arteria carotis communis Occlusion als adäquate Vorbehandlung Stimulus zu frühe ischämische Toleranz zu Focal zerebraler Ischämie induzieren

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a valuable tool for understanding ovarian cancer, their use has many limitations. These include the lack of heterogeneity and the plethora of genetic alterations associated with extended in vitro passaging.&#160;Here we describe a method that allows for rapid establishment of primary ovarian cancer cells form solid clinical specimens collected at the time of surgery. The method consists of subjecting clinical specimens to enzymatic digestion for 30 min. The isolated cell suspension is allowed to grow and can be used for downstream application including drug screening. The advantage of primary ovarian cancer cell lines over established ovarian cancer cell lines is that they are representative of the original specific clinical specimens they are derived from and can be derived from different sites whether primary or metastatic ovarian cancer.

This study describes a detailed method for isolation and characterization of primary ovarian cancer cells from solid clinical specimens. Ovarian cancer clinical specimens are subjected to enzymatic digestion to obtain viable, fibroblast-free epithelial ovarian cancer (EOC) cells highly suitable for downstream applications.

Verfahren zur Gewinnung von Primäreierstockkrebszellen von Solid Proben

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human specimens, precious samples must be handled with the greatest care in order to ensure integrity of organs, tissues, and cells to the highest degree. Unfortunately, tissue processing by definition requires extraction of tissues from the host, a change which can cause great cellular stress and have major repercussions on subsequent analyses. These stresses could result in the specimen being no longer representative of the site from which it was retrieved. Therefore, a strict protocol must be adhered to while processing these specimens to ensure representativeness. The desired assay(s) must also be taken into consideration in order to ensure that an optimal technique is used for sample processing. Outlined here is a protocol for tissue retrieval, processing and various analyses which may be performed on processed tissue in order to maximize downstream production from limited tissue samples.

Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

Arbeiten mit menschlichen Geweben für Translationale Krebsforschung

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

Lavage-induced Surfactant Depletion in Pigs As a Model of the Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS)

Various animal models of lung injury exist to study the complex pathomechanisms of human acute respiratory distress syndrome (ARDS) and evaluate future therapies. Severe lung injury with a reproducible deterioration of pulmonary gas exchange and hemodynamics can be induced in anesthetized pigs using repeated lung lavages with warmed 0.9% saline (50 ml/kg body weight). Including standard respiratory and hemodynamic monitoring with clinically applied devices in this model allows the evaluation of novel therapeutic strategies (drugs, modern ventilators, extracorporeal membrane oxygenators, ECMO), and bridges the gap between bench and bedside. Furthermore, induction of lung injury with lung lavages does not require the injection of pathogens/endotoxins that impact on measurements of pro- and anti-inflammatory cytokines. A disadvantage of the model is the high recruitability of atelectatic lung tissue. Standardization of the model helps to avoid pitfalls, to ensure comparability between experiments, and to reduce the number of animals needed.

Lavage-induced Surfactant Depletion in Pigs As a Model of the Acute Respiratory Distress Syndrome ARDS

Repeated pulmonary lavages in anesthetized pigs induce lung injury resembling major aspects of human acute respiratory distress syndrome (ARDS). For this purpose the lungs are repeatedly lavaged with 0.9% saline at 37 &#176;C. The goal of the protocol is a reproducible mitigation of gas exchange and hemodynamics for research in ARDS.

Lavage-induzierte Surfactant Depletion in Schweine als Modell des Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS)

Various animal models of lung injury exist to study the complex pathomechanisms of human acute respiratory distress syndrome (ARDS) and evaluate future ...

Sample Preparation for Computed Tomography-based Three-dimensional Visualization of Murine Hind-limb Vessels

Blood vessels are complex networks with tree-like structures, and vascular networks are essential for maintaining both circulation and maintaining organ function. Clarifying the mechanism of blood vessel formation is therefore extremely useful for elucidating developmental processes and pathological mechanisms. Murine hind-limb vessels are often used as a model for physiological and pathological angiogenesis. Evaluation is mainly performed via a two-dimensional method using tissue sections. However, methods for evaluating three-dimensional (3D) vascular morphology are particularly limited. This paper introduces a method for visualizing murine hind-limbs using computed tomography (CT). Radiation-opaque resin is injected through the descending aorta, and whole vessels are filled with dye. By adjusting the time of dye injection, arterial-specific filling is also possible, and samples can be obtained with any micro-X-ray CT device. This contrast method provides a basic technique for the 3D evaluation of murine blood vessels in the lower extremities. Furthermore, this method can be used to visualize all blood vessels below the diaphragm and evaluate blood vessels in the abdominal organs.

Here, we describe a visualization and quantification method for murine hind-limb vessels using micro-X-ray computed tomography.

Probenvorbereitung für computertomographisch basierte dreidimensionale Visualisierung von Murinen Hintergliedmaßengefäßen

Blood vessels are complex networks with tree-like structures, and vascular networks are essential for maintaining both circulation and maintaining organ ...

Technique for Obtaining Mesenchymal Stem Cell from Adipose Tissue and Stromal Vascular Fraction Characterization in Long-Term Cryopreservation

Human mesenchymal stem cells derived from adipose tissue have become increasingly attractive as they show appropriate features and are an accessible source for regenerative clinical applications. Different protocols have been used to obtain adipose-derived stem cells. This article describes different steps of an improved time-saving protocol to obtain a more significant amount of ADSC, showing how to cryopreserve and thaw ADSC to obtain viable cells for culture expansion. One hundred milliliters of lipoaspirate were collected, using a 26 cm three-hole and 3 mm caliber syringe liposuction, from the abdominal area of nine patients who subsequently underwent elective abdominoplasty. The stem cells isolation was carried out with a series of washes with Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline (DPBS) solution supplemented with calcium and the use of collagenase. Stromal Vascular Fraction (SVF) cells were cryopreserved, and their viability was checked by immunophenotyping. The SVF cellular yield was 15.7 x 105 cells/mL, ranging between 6.1-26.2 cells/mL. Adherent SVF cells reached confluence after an average of 7.5 (&#177;4.5) days, with an average cellular yield of 12.3 (&#177; 5.7) x 105 cells/mL. The viability of thawed SVF after 8 months, 1 year, and 2 years ranged between 23.06%-72.34% with an average of 47.7% (&#177;24.64) with the lowest viability correlating with cases of two-year freezing. The use of DPBS solution supplemented with calcium and bag resting times for fat precipitation with a shorter time of collagenase digestion resulted in an increased stem cell final cellular yield. The detailed procedure for obtaining high yields of viable stem cells was more efficient regarding time and cellular yield than the techniques from previous studies. Even after a long period of cryopreservation, viable ADSC cells were found in the SVF.

The present protocol describes an improved methodology for ADSC isolation resulting in a tremendous cellular yield with time gain compared to the literature. This study also provides a straightforward method for obtaining a relatively large number of viable cells after long-term cryopreservation.

Technik zur Gewinnung mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe und stromaler vaskulärer Fraktion Charakterisierung in der Langzeitkryokonservierung

Human mesenchymal stem cells derived from adipose tissue have become increasingly attractive as they show appropriate features and are an accessible ...

Isolation of Murine Intestinal Mesenchyme Resulting in a High Yield of Telocytes

The murine small intestine, or colon mesenchyme, is highly heterogenous, containing distinct cell types including blood and lymphatic endothelium, nerves, fibroblasts, myofibroblasts, smooth muscle cells, immune cells, and the recently identified cell type, telocytes. Telocytes are unique mesenchymal cells with long cytoplasmic processes, reaching a distance of tens to hundreds of microns from the cell body. Telocytes have recently emerged as an important intestinal stem cell niche component, providing Wnt proteins that are essential for stem and progenitor cell proliferation.
Although protocols on how to isolate mesenchyme from the mouse intestine are available, it is not clear whether these procedures allow the efficient isolation of telocytes. Isolating telocytes efficiently requires special protocol adjustments that would allow dissociation of the strong cell-cell contact between telocytes and neighboring cells without affecting their viability. Here, available intestinal mesenchyme isolation protocols were adjusted to support the successful isolation and culture of mesenchyme containing a relatively high yield of viable single-cell telocytes.
The obtained single-cell suspension can be analyzed by several techniques, such as immunostaining, cell sorting, imaging, and mRNA experiments. This protocol yields mesenchyme with sufficiently conserved antigenic and functional properties of telocytes, and can be used for several applications. For example, they can be used for co-culture with mouse- or human-derived organoids to support organoid growth with no growth factor supplementation, to better reflect the situation in the original tissue.

Here, we present a protocol to isolate murine intestinal mesenchyme, including telocytes. These can be used for several applications, such as co-culture with mouse or human-derived organoids, to support growth and better reflect the situation in the original tissue.

Isolierung des murinen intestinalen Mesenchyms, was zu einer hohen Ausbeute an Telozyten führt

The murine small intestine, or colon mesenchyme, is highly heterogenous, containing distinct cell types including blood and lymphatic endothelium, nerves, ...

Preparing Zanba-Stir-Fried Tiebangchui (TBC) Sample for Processing Technology Optimization

To begin a single factor experiment to compare Tiebangchui, or TBC slice thickness, for processing technology optimization, prepare five test groups each having 30 grams of TBC, but different slice thickness. Then weigh 90 grams of Zanba, which is three times as much as that of the TBC in each group. Set the temperature and the time of the automatic stir fry machine to 140 degrees Celsius and 40 minutes respectively.After the machine has heated up to the set temperature, add the weighed amounts of TBC and Zanba into the machine. Then using a high speed smashing machine, grind the Zanba stir-fried TBC into powder. Next, weigh two grams of Zanba stir-fried TBC powder in a conical flask.To the sample in the flask, add three milliliters of ammonia solution followed by 50 milliliters of a mixture of isopropyl alcohol and ethyl acetate, having a volume ratio of one is to one. After recording the weight of the conical flask with the contents, ultrasonicate the TBC sample for 30 minutes at 220 volts and 40 kilohertz maintaining a temperature below 25 degrees Celsius. Weigh the conical flask with the sample once again after the ultrasonic extraction.Make up for the lost weight by adding the isopropyl alcohol and ethyl acetate mixture mentioned previously, and filter the sample solution. Evaporate 25 milliliters of the filtrate to dryness using a rotary evaporator at 40 degrees Celsius. Then dissolve the residue in five milliliters of a solution of 0.05 hydrochloric acid in methanol.Filter the solution through a 0.2 micron syringe filter, and analyze it by performing high performance liquid chromatography, or HPLC. Calculate the contents of the MDA and DDAs in different processing products according to the standard curve. Calculate the comprehensive score based on the results via the critic method.Following the method demonstrated above, compare the amounts of Zanba, processing temperatures, and times for processing technology optimization. The results of the single factor tests revealed that the comprehensive scores of Zanba stir-fried TBC were highest when the sliced thickness is two centimeters, the amount of Zanba is three times, the processing temperature is 120 degrees Celsius, and the processing time is 60 minutes. The results revealed the range of slicing thickness, amount of Zanba, processing temperature, and processing time to be used for future experiments.

Vorbereitung der Zanba-Stir-Fried-Tiebangchui-Probe (TBC) für die Optimierung der Verarbeitungstechnologie

Nicht-invasive Biomarker-Entdeckung für die Tränenproteomik mittels LC-MS

A Protein Suspension-Trapping Sample Preparation for Tear Proteomics by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

Tear fluid is one of the easily accessible biofluids that can be collected non-invasively. Tear proteomics has the potential to discover biomarkers for several ocular diseases and conditions. The suspension trapping column has been reported to be an efficient and user-friendly sample preparation workflow for the broad application of downstream proteomic analysis. Yet, this strategy has not been well-studied in the analysis of human tear proteome. The present protocol describes an integrated workflow from clinical human tear samples to purified peptides for non-invasive tear protein biomarker research using mass spectrometry, which provides insights into disease biomarkers and monitoring when combined with bioinformatics analysis. A protein suspension trapping sample preparation was applied and demonstrated the discovery of tear proteome with fast, reproducible, and user-friendly procedures, as a universal, optimized sample preparation for human tear fluid analysis. In particular, the suspension trapping procedure outperformed in-solution sample preparation in terms of peptide recovery, protein identification, and shorter sample preparation time.

Autor im Rampenlicht: Weiterentwicklung der Tränenflüssigkeitsanalyse unter Verwendung eines standardisierten Protokolls für die Proteomikforschung 

This protocol describes a method for collecting tear samples using Schirmer strips and an integrated quantitative workflow for discovering non-invasive tear protein biomarkers. The suspension trapping sample preparation workflow enables fast and robust tear sample preparation and mass spectrometric analysis, resulting in higher peptide recovery yields and protein identification than standard in-solution procedures.

Eine Proteinsuspensions-Trapping-Probenvorbereitung für die Tränenproteomik mittels Flüssigkeitschromatographie-Tandem-Massenspektrometrie

Tear fluid is one of the easily accessible biofluids that can be collected non-invasively. Tear proteomics has the potential to discover biomarkers for ...