Die Autoren bedanken sich bei American Heart Association Nationale Entwicklung Scientist Grant (10SDG2600001), Stanford Bio-X Interdisziplinäre Initiative Program und Stanford Medical Research Program Wissenschaftler für die Finanzierung bestätigen.

1. Polymer Synthesis <ol><li> In einer Abzugshaube, wiegen 3.523 mg Butandiol-(C) und Transfer in ein Glasszintillationsröhrchen enthält einen Rührstab. </li><li> Pre-Wärme-5-Amino-1-Pentanol (32) auf 90 ° C, um das Salz löslich zu machen, dann in einem Abzug, wiegen 1.533 mg 32 und zu der Scintillations-Fläschchen mit C. Diese Methode wird in einem Mol-Verhältnis führen C: 32 = 1:1,2. </li><li> Sofort die Küvette, die beide Lösungen auf einer Rührplatte. Stellen Rührgeschwindigkeit bei 600 Umdrehungen pro Minute. </li><li> Übertragen Sie die Szintillationsfläschchen zu einem Ofen bei 90 ° C eingestellt Eingestellt Rührgeschwindigkeit auf 1000 Upm für 4 Stunden. Wenn der Rührstab stecken bleibt, verringern Sie die Geschwindigkeit. Nach 4 h niedriger Geschwindigkeit auf 300 Upm und halten bei 90 ° C für weitere 12-16 Stunden. </li><li> 5 g C32 zu 10 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran (THF) in einem Glasszintillationsröhrchen einen Rührstab enthielt. In Folie wickeln und Wirbel auf High, bis sie vollständig aufgelöst. </li><li> In einem separaten Glasszintillationsröhrchen containing einem Rührstab, mit 10 mM Tetraethyleneglycoldiamine (122). 40 ml THF. </li><li> Legen Sie beide Fläschchen (C32 und 122) auf einer Rührplatte für 5 min miteinander kombinieren, dann. Decken Sie in der Folie und lassen bei Raumtemperatur unter Rühren bei 400 Umdrehungen pro Minute für 24 Stunden. Das Endprodukt wird als C32-122. </li><li> Wiegen Sie 5 x 50 ml-Falcon-Röhrchen für jede Charge von 5 g C32-122. Beachten Sie die Masse jedes Rohr in einem Notebook. </li><li> Übertragungs 30 ml wasserfreiem Diethylether zu je 50 ml Falcon-Röhrchen. </li><li> Über 10 ml C32-122 zu je 50 ml-Falcon-Röhrchen. </li><li> Vortex-Falcon-Röhrchen kräftig dann zentrifugieren bei 2.500 rpm für 2 min. Hinweis: Das extrahierte Polymer wird an der Basis des Röhrchens zu sammeln. </li><li> Entsorgen Sie die obere Lösung und wiederholen Sie die Schritte 1.9 und 1.11 zwei weitere Male. </li><li> Die offenen Röhrchen mit den extrahierten C32-122 im Exsikkator und Vakuum über Nacht. Sicherstellen, dass alle Rohre vor Licht geschützt. </li><li> Wiegen Sie alle Röhrchen, die C32-122, um die endgültige Masse der BestimmungPolymer extrahiert. </li><li> Löse das extrahierte Polymer in wasserfreiem DMSO bei einer Konzentration von 100 mg / ml. </li><li> Bewahren Sie die gelösten Polymers bei -20 ° C vor Licht und Feuchtigkeit geschützt. </li></ol> 2. Zellaussaat <ol><li> Vorbeschichtung der Basis eines T-150-Gewebekulturkolben, der mit 0,1% (w / v) Gelatine. Die Gelatine sollte in der Flasche für 30-45 min zu bleiben. Die Gelatine-Beschichtung hilft, Haftung ADSCs. </li><li> Saugen Gelatine aus der Vor-beschichtet T-150-Kolben. </li><li> Add 4 x 10 6 ADSCs (≤ Gang 3) in den Kolben in 20 ml DMEM mit 10% FBS, 1% Penicillin / Streptomycin und 10 ng / ml bFGF. </li><li> Setzen Sie den T-150-Kolben im Brutschrank bei 37 ° C, 5% CO 2 über Nacht. </li><li> Am folgenden Tag beginnen Transfektion Verfahren. </li></ol> 3. Nanopartikel-Herstellung und Transfektion <ol><li> Das folgende Verfahren ist für die Herstellung von Nanopartikeln enthaltend 16,1 ug Plasmid-DNA pro1,0 x 10 6 Zellen in einer Polymer-Gewichtsverhältnis von 30:1 Plasmid. </li><li> Verdünnte Plasmid-DNA (1 mg / ml, pVEGF165, Aldevron, ND, USA) zu einer Endkonzentration von 120 ug / ml in Natriumacetatpuffer (25 mM) in einem 15 ml Falcon-Röhrchen. </li><li> Verdünnen C32-122 (100 mg / ml) bis zu einer Endkonzentration von 3,6 mg / ml in Natriumacetatpuffer (25 mM) in einer zweiten 15 ml-Falcon-Röhrchen. </li><li> Die Inhalte der einzelnen Falcon-Röhrchen in einem einzigen 15 ml Falcon-Röhrchen und Wirbel sofort auf hoch für 10 sek. </li><li> Lassen Sie das Rohr bei Raumtemperatur stehen lassen für 10 min für die Nanopartikelbildung auftreten. </li><li> Während der Inkubation ersetzen Medium in Zellkulturflasche mit 7,8 ml vollständig ergänzt DMEM pro 1,0 x 10 6 Zellen transfiziert. </li><li> Übertragen Sie die Nanopartikel-Lösung für die Zellkulturflasche und kippen nach vorne und nach hinten, um gleichmäßig verteilt. </li><li> Platzieren der Zellkulturflasche in den Inkubator bei 37 ° C, 5% CO 2 für 4 Stunden. </li><li> Nach 2 Stunden, ersetzen Sie den Nanokel haltigen Medien mit DMEM. </li><li> Nach weiteren 2 h Inkubation bei 37 ° C, 5% CO 2 werden die Zellen bereit für die in vivo-Injektion. </li></ol> 4. Ischämie der Hintergliedmaßen Ordnung <ol><li> Alle Experimente wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien der Stanford University Animal Care und Verwenden Ausschuss und genehmigt APLAC Protokollen durchgeführt. Die Erzeugung der Mausmodell der Ischämie der Hintergliedmaßen wie zuvor beschrieben durchgeführt. 8 Bitte beachten Sie die Referenz für detaillierte Anweisungen. Eine kurze Beschreibung ist unten angegeben. </li><li> Platzieren Sie die Maus unter Anästhesie mit 1-3% Isofluran Dosierung durch Einatmen und Sauerstoffflussrate von 1 l / min. Stellen Sie sicher, Narkosetiefe von Zehen-und Zuziehen, Verringerung der Atemfrequenz, und Lethargie. </li><li> Entfernen Sie Haare aus der Bauchregion und den beiden hinteren Gliedmaßen Bereiche der Maus mit Rasierschaum. </li><li> Machen Einschnitt in der Mitte der medialen Oberschenkel in Richtung Mittellinie und dann durch darüberliegende Fettpolster Ex geschnittenstellen die Oberschenkelarterie. </li><li> Ligation der Arterie an zwei Standorten: distale Stadt (in der Nähe der Knie) und der proximalen Seite (distal des Leistenbandes). </li><li> Um die Ligationen zu erstellen, trennen Sie die Arterie von der Vene und Faden 5-0 Seidenfaden um die Arterie. Binden Sie die Arterie mit zwei Knoten, um die Ligation zu machen. </li><li> Entfernen Sie die Arterie zwischen den beiden Ligation Punkten. </li><li> Mit PBS Waschen Sie den OP-Bereich und dann nähen, der Schnitt geschlossen. </li><li> Die Anästhesie kann nun entfernt werden. Halten Sie die Maus warmen, bis Wiedererwachen. Für die postoperative Pflege, 2-4 mg / kg Lidocain subkutan an der Einschnittstelle vor dem Wiedererwachen injiziert werden. Weitere Schmerz-Management kann subkutane Abgabe von 0,05 bis 0,1 mg / kg Buprenorphin bei 12 und 24 Stunden umfassen. Überwachung des Gesundheitsstatus der Mäuse einmal täglich für sieben Tage durch Beobachtung von Veränderungen der Atemmuster, offene Schmerzen oder Leiden und Hautfarbe. </li><li> Bestätigen Ischämie der Hintergliedmaßen durch Laser-Doppler-Perfusions-Bildgebung.</li></ol> 5. Zellinjektionen <ol><li> Wenn die transfizierten Zellen und die Mäuse sind bereit, waschen transfizierten Zellen mit PBS, trypsinize, Zentrifuge, und dann zählen. </li><li> Die Zellen in einer Dichte von 10 x 10 6 Zellen pro ml in PBS. </li><li> Zellsuspensionen sollten in einem Volumen von 110 &amp;mgr; l in getrennte Eppendorf-Röhrchen getrennt werden. Dadurch wird sichergestellt, dass jede Maus erhält eine gleiche Anzahl von Zellen. </li><li> Platzieren Sie jede Maus in Narkose (2,5% Isofluran, 1 L / min Sauerstoff-Fluss). </li><li> Reinigen Sie die Injektionsstelle mit Alkoholtupfern. </li><li> Mit Hilfe einer 27 G Tuberkulin-Spritze in die Spritze zu ziehen, die Zellen auf und ab, um sicherzustellen, eine homogene Suspension erreicht. Auszuarbeiten 100 ul der Zellsuspensionsvolumen in die Spritze. </li><li> Injizieren Sie die Hälfte der Zellsuspension in die Adduktoren-Region und dann zu injizieren, die andere Hälfte in den Wadenmuskel Region. Nach der Injektion, lassen Sie die Spritze in Platz für mindestens 15 bis 30 Sek.ein Austreten der Zellsuspension. </li><li> Geeignete Kontrollen für die Tierstudie, die folgenden: 1) Zellen, die mit einem nicht-kodierenden Plasmids (z. B. Plasmid, ohne die biologische Aktivität) transfiziert, 2)-Zellen allein und 3) PBS. </li><li> Bei Injektionen abgeschlossen sind, entfernen Sie die Maus aus der Narkose und warm halten, bis die Maus wieder erwacht. </li></ol> 6. Biolumineszenz-Imaging <ol><li> Biolumineszenz-Bildgebung (BLI) beginnen, zu betäuben Mäuse wie oben beschrieben. </li><li> Reinigen Sie die Injektionsstelle mit Alkoholtupfern. </li><li> Verwendung Insulinspritze, Last 100 ul 15 mg / ml D-Luciferin (Substrat für Luciferase). Halten Substrat weg vom Licht. </li><li> Um intraperitoneale Injektionen durchführen, halten Mäuse durch die Haut ihrer zurück zu ziehen, ihre vorderen Haut straff. Setzen Sie die Nadel intraperitoneal in der Bauchregion und injizieren 100 ul Substrat. </li><li> Legen Sie die Maus in die Luciferase IVIS Imaging-Kammer unter Narkose. </li><li&gt; Bild der Mäuse mit einer Belichtungszeit von 1,0 min. Wenn Parameter eingestellt sind, beginnen, um Bilder zu erwerben. </li><li> Wenn das Bild erworben, markieren Sie den Bereich von Interesse, um die Luciferase-Signal zu messen. In diesem Fall kennzeichnen die ischämische Extremität an der Zellinjektionsstelle. </li><li> Weiterhin die Luciferase-Signal messen jede 3-5 min, bis das Signal einen Spitzenwert erreicht und beginnt zu sinken. Dies ist der für den Vergleich zwischen Mäusen und über mehrere Zeitpunkte genutzt Wert. </li><li> Wenn Sie fertig sind, entfernen Sie die Mäuse aus der Kammer und Anästhesie. Halten Mäuse warmen, bis Wiedererwachen. </li></ol> 7. Laser Doppler Perfusion Imaging <ol><li> Laser-Doppler-Perfusions-Bildgebung wird wie zuvor beschrieben durchgeführt. 8 Das Verfahren wird hier kurz beschrieben. </li><li> Vor der Doppler-Bildgebung der Maus sollte in den Bereichen, die über beide Hinterbeine und die Bauchregion zu Artefakt wegen Haar verhindern sauber rasiert sein. </li><li> Bei den Doppler-Bild erstellt, das mouse sollte, wie oben beschrieben narkotisiert. </li><li> Wärmen Sie die Maus, um 36 ° C auf einer heißen Platte, während Überwachung der Körpertemperatur durch rektale Thermometer. </li><li> Platzieren Sie die Maus auf einer nicht-reflektierenden schwarzen Oberfläche und halten narkotisierten von Nasenkegel. Die Maus sollte sich auf seine Rückenfläche mit seinen Gliedmaßen gleichmäßig ausgesetzt platziert werden. </li><li> Positionieren der Laser-Doppler-Sensor etwa 15 cm über die Maus und das Laserzeiger von dem Sensor in Richtung der Leistenregion der Maus. </li><li> Wenn die Maus und die Doppler-Sensor in Position sind, können die Bilder unter Verwendung der Software LDPIwin durch Drücken der Start-Taste getroffen werden. </li><li> Relative Perfusionsmessungen könnte durch Angabe beider Hinterbeine (ischämischen und nicht-ischämischen) als Region of Interest (ROI) entnommen werden. Das Verhältnis von Durchschnittsdurchblutung des ischämischen dem nicht-ischämischen Hinterlauf wird zeigen die relative Durchblutung. </li></ol> 8. Tissue Ernteverfahren <ol><li> Bei der Ernte der Maus tis vorbereitetverklagen, für die Histologie und / oder biochemischen Verarbeitung sollte die Maus eingeschläfert werden. Hier wird die Maus durch Aussetzen zu 5% Isofluran für 3-5 min, dann euthanizing die Maus durch zervikale Dislokation getötet. </li><li> Schneiden Sie die darüber liegende Haut der Hinterlauf umgebenden Umfangsrichtung am distalen und proximalen Bauchregion an der Hintergliedmaße. Die Haut wird von der ventralen zur dorsalen Flächen geschnitten, so dass die Haut kann wieder über den Hinterlauf an den Fuß gezogen werden. </li><li> Beim Ziehen der Haut zurück, konnte die Gliedmaße durch die Verwendung einer Schere stumpf an der Becken-und Oberschenkelgelenk geschnitten amputiert werden. </li><li> Zwei Haupt Gewebe werden zur Analyse entnommen: die medialen Adduktoren und die Wadenmuskulatur. </li><li> Für die Histologie für Kryoschneiden einbetten einen oder beide Gewebe im optimalen Schneidtemperatur (OCT). </li><li> Für die biochemische Analyse, sammeln eine oder beide Gewebe in einem 1,5 ml Eppendorf und tauchen in ein Bad aus flüssigem Stickstoff für mindestens 2 min. Die Proben könnenbei -80 ° C zur weiteren Verarbeitung gespeichert. </li></ol>

<ol>
	<li>Deveza, L., Choi, J., Yang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+angiogenesis+for+treating+cardiovascular+diseases.">Therapeutic angiogenesis for treating cardiovascular diseases.</a> Theranostics. 2, 801-814 (2012).</li><li>Yang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+engineering+of+human+stem+cells+for+enhanced+angiogenesis+using+biodegradable+polymeric+nanoparticles.">Genetic engineering of human stem cells for enhanced angiogenesis using biodegradable polymeric nanoparticles.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 3317-3322 (2010).</li><li>Mangi, A. 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I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+may+be+uniquely+suited+for+combined+gene+therapy+and+cell+replacement:+Evidence+from+engraftment+of+Neurotrophin-3-expressing+stem+cells+in+hypoxic-ischemic+brain+injury.">Neural stem cells may be uniquely suited for combined gene therapy and cell replacement: Evidence from engraftment of Neurotrophin-3-expressing stem cells in hypoxic-ischemic brain injury.</a> Exp. Neurol. 199, 179-190 (2006).</li><li>Green, J. J., Langer, R., Anderson, D. 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Med. 10, 858-864 (2004).</li><li>Kidd, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+evidence+of+mesenchymal+stem+cell+tropism+for+tumor+and+wounding+microenvironments+using+in+vivo+bioluminescent+imaging.">Direct evidence of mesenchymal stem cell tropism for tumor and wounding microenvironments using in vivo bioluminescent imaging.</a> Stem Cells. 27, 2614-2623 (2009).</li><li>Sunshine, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-molecule+end-groups+of+linear+polymer+determine+cell-type+gene-delivery+efficacy.">Small-molecule end-groups of linear polymer determine cell-type gene-delivery efficacy.</a> Adv. Mater. 21, 4947-4951 (2009).</li><li>Sunshine, J. C., Akanda, M. I., Li, D., Kozielski, K. L., Green, J. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+molecular+weight+of+amine+end-modified+poly(beta-amino+ester)s+on+gene+delivery+efficiency+and+toxicity.">Effect of molecular weight of amine end-modified poly(beta-amino ester)s on gene delivery efficiency and toxicity.</a> Biomaterials. 33, 3594-3603 (2012).</li><li>Glover, D. J., Lipps, H. J., Jans, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+safe,+non-viral+therapeutic+gene+expression+in+humans.">Towards safe, non-viral therapeutic gene expression in humans.</a> Nat. Rev. Genet. 6, 299-310 (2005).</li><li>Dave, U. P., Jenkins, N. A., Copeland, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+insertional+mutagenesis+insights.">Gene therapy insertional mutagenesis insights.</a> Science. 303, 333 (2004).</li></ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen konkurrieren.

Hier berichten wir über eine Methode, um adulte Stammzellen zu programmieren, um therapeutische Faktoren überexprimieren mit nicht-viralen, biologisch abbaubare Nanopartikel. Diese Plattform ist besonders nützlich zur Behandlung von Krankheiten, bei denen Stammzellen natürlich Hause kann, wie Ischämie und Krebs. 9-10 Ferner erlaubt die nicht-virale Gen-Abgabeplattform für transiente Überexpression von therapeutischen Faktoren, die für die meisten Geweberegeneration und Wunde Heilungsprozesse. Transfek...

Das Ziel dieser Technik ist die Förderung der therapeutischen Angiogenese mit nicht-viral programmierten Stammzellen Überexpression therapeutischen Faktoren an der Stelle der Ischämie. Stammzellen wurden ex vivo ersten modifizierten mit biologisch abbaubaren Nanopartikel im Labor synthetisiert und in einem Mausmodell der Ischämie der Hintergliedmaßen, um ihr Potenzial zur Verbesserung der Angiogenese und Gewebebergungs validieren dann transplantiert. Gesteuert Gefäßwachstum ist ein wichtiger Bestandteil erfolgreicher Geweberegeneration sowie zur Behandlung verschiedener ischämischer Erkrankungen, wie Schlaganfall, Ischämie der Extremitäten und Myokardinfarkt. Verschiedene Strategien wurden entwickelt, um das Gefäßwachstum, einschließlich Wachstumsfaktor Lieferung und zellbasierte Therapie zu fördern. 1. Trotz der in den Tierkrankheitsmodellen beobachtete Wirksamkeit sind diese Verfahren immer noch mit Einschränkungen wie die Notwendigkeit für supraphysiologischen Dosen Wachstumsfaktor Lieferung oder unzureichende parakrineFreigabe durch Zellen allein. Eine mögliche Strategie, um die oben genannten Einschränkungen zu überwinden, ist die Stammzelltherapie und Gentherapie, wobei Stammzellen genetisch ex vivo vor der Transplantation programmiert, um wünschenswerte therapeutische Faktoren überexprimieren kombinieren. Dieser Ansatz hat sich in verschiedenen Krankheitsmodellen einschließlich Ischämie der Hintergliedmaßen 2, Herzerkrankungen 3, 4 und Knochenheilung Nervenverletzung 5, etc nachgewiesen. Jedoch beruhen die meisten Gentherapietechniken auf virale Vektoren, die mit Sicherheitsbedenken wie potenzielle Immunogenität und Insertionsmutagenese zugeordnet sind. Biomaterialien vermittelte nicht-viralen Gentransfer kann diese Einschränkungen zu überwinden, aber oft leiden unter niedrigen Transfektionseffizienz. Zur Beschleunigung der Entdeckung von neuartigen Biomaterialien für effiziente nicht-viralen Gentransfer haben neuere Studien kombinatorischen Chemie und Hochdurchsatz-Screening-Ansatz verwendet. Biologisch abbaubare Polymerbibliotheken, wie Poly (β-amino ester) (PBAE) entwickelt und gesiebt, die zur Entdeckung der führenden Polymere mit deutlich verbesserte Transfektionseffizienz im Vergleich zu den herkömmlichen Polymer Vektor Kollegen geführt. 6-7 Hier beschreiben wir die Synthese PBAE und Überprüfung ihrer Fähigkeit, aus Fettgewebe abgeleiteten Stammzellen (ADSCs) in vitro zu transfizieren, gefolgt von der anschließenden Transplantation von genetisch modifizierten ADSCs überexprimieren, vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor (VEGF) in einem Mausmodell der Ischämie der Hintergliedmaßen . Die Ergebnisse wurden durch die Verfolgung Zellschicksal mit Biolumineszenz-Bildgebung, Bewertung Gewebe Reperfusion mittels Laser-Doppler-Perfusion Imaging (LDPI) und Bestimmen der Angiogenese und Gewebebergungs histologisch ausgewertet.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>
				Name of the Reagent</td>
			<td>
				Company</td>
			<td>
				Catalogue Number</td>
			<td>
				Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				DMEM</td>
			<td>
				Invitrogen</td>
			<td>
				11965</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Fetal Bovine Serum</td>
			<td>
				Invitrogen</td>
			<td>
				10082</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>
				Invitrogen</td>
			<td>
				15070</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Basic Fibroblast Growth Factor</td>
			<td>
				Peprotech</td>
			<td>
				100-18B</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				1,4-Butanediol Diacrylate (90%)</td>
			<td>
				Sigma Aldrich</td>
			<td>
				411744</td>
			<td>
				Acronym: C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				5-amino-1-pentanol (97%)</td>
			<td>
				Alfa Aesar</td>
			<td>
				2508-29-4</td>
			<td>
				Acronym: 32</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Tetraethyleneglycoldiamine &gt;99%)</td>
			<td>
				Molecular Biosciences</td>
			<td>
				17774</td>
			<td>
				Acronym: 122</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Sodium Acetate</td>
			<td>
				G-Biosciences</td>
			<td>
				R010</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>
				Invitrogen</td>
			<td>
				14190-144</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Tetrahyofuran Anhydrous (&gt;99.9%)</td>
			<td>
				Sigma Aldrich</td>
			<td>
				401757</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Diethyl Ether Anhydrous (&gt;99%)</td>
			<td>
				Fisher Scientific</td>
			<td>
				E138-4</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				DMSO Anhydrous (&gt;99.9%)</td>
			<td>
				Sigma Aldrich</td>
			<td>
				276855</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Gelatin</td>
			<td>
				Sigma Aldrich</td>
			<td>
				G9391</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Trypsin-EDTA</td>
			<td>
				Invitrogen</td>
			<td>
				25200</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				D-luciferin</td>
			<td>
				GoldBio</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Optimal Cutting Temperature (O.C.T)</td>
			<td>
				Tissue-Tek</td>
			<td>
				4583</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Rat anti-Mouse CD31</td>
			<td>
				BD Pharmingen</td>
			<td>
				550274</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Alexa Fluor 594 anti-rat IgG</td>
			<td>
				Invitrogen</td>
			<td>
				A11007</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

	&nbsp;

programming stem cells for therapeutic angiogenesis using biodegradable polymeric nanoparticles

Gesteuert Gefäßwachstum ist entscheidend für eine erfolgreiche Geweberegeneration und Wundheilung sowie zur Behandlung von ischämischen Erkrankungen, wie Schlaganfall, Herzinfarkt oder peripheren arteriellen Erkrankungen. Direkte Zustellung von angiogenen Wachstumsfaktoren hat das Potenzial, neue Blutgefäßwachstum zu stimulieren, wird aber oft mit Einschränkungen wie mangelnde Ausrichtung und kurze Halbwertszeit in vivo assoziiert. Die Gentherapie bietet einen alternativen Ansatz durch die Bereitstellung von Genen angiogenen Faktoren kodieren, aber oft mit Viren erfordert, und wird von Sicherheitsbedenken begrenzt. Hier beschreiben wir eine kürzlich entwickelte Strategie zur Stimulierung von Gefäßwachstum durch Programmierung von Stammzellen zur angiogenen Faktoren in situ überexprimieren mit biologisch abbaubaren polymeren Nanopartikel. Insbesondere verwendet unsere Strategie Stammzellen als Lieferfahrzeuge unter Ausnutzung ihrer Fähigkeit, gegen ischämische Gewebe in vivo zu wandern. Mit den optimierten Polymer Vektoren, Fettgewebe gewonneneStammzellen modifiziert, um einen angiogenen Gens vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor (VEGF) kodiert, überexprimiert. Wir beschriebenen Prozesse für die Polymersynthese, die Nanopartikelbildung, Transfektion Stammzellen in vitro, als auch Verfahren zur Validierung der Wirksamkeit der VEGF-exprimierenden Stammzellen zur Förderung der Angiogenese in einem Mausmodell Ischämie der Hintergliedmaßen.

Beim Vermischen der positiv geladenen Polymer (C32-122) und negativ geladenen DNA-Plasmid Selbstorganisation in Nanopartikel. Nanopartikelbildung kann durch Elektrophorese-Analyse bestätigt werden, dh die Komplexbildung zwischen C32-122 und Plasmid-DNA wird die Mobilisierung der DNA während der Elektrophorese zu verhindern. Das Polymer dient als Transfektionsreagenz um eine verbesserte Aufnahme von DNA in die Zielzellen und die anschließende Expression der Proteine ​​kodiert (Fig. 2) zu ...

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Programming Stem Cells for Therapeutic Angiogenesis Using Biodegradable Polymeric Nanoparticles

Wir beschreiben die Methode der Programmierung Stammzellen zu therapeutischen Angiogenese-Faktoren für Überexpression mit biologisch abbaubaren polymeren Nanopartikel. Beschriebenen Verfahren umfassen die Polymersynthese, die Transfektion von Fettgewebe abgeleitete Stammzellen in vitro, und die Validierung der Wirksamkeit der programmierten Stammzellen Angiogenese in einem Maushinterlauf-Ischämie-Modell zu fördern.

Programmierung Stammzellen für therapeutische Angiogenese mit biologisch abbaubaren Polymernanopartikel

Controlled vascular growth is critical for successful tissue regeneration and wound healing, as well as for treating ischemic diseases such as stroke, ...

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

11.0K Aufrufe.  Stanford University.  Wir beschreiben die Methode der Programmierung Stammzellen zu therapeutischen Angiogenese-Faktoren für Überexpression mit biologisch abbaubaren polymeren Nanopartikel. Beschriebenen Verfahren umfassen die Polymersynthese, die Transfektion von Fettgewebe abgeleitete Stammzellen in vitro, und die Validierung der Wirksamkeit der programmierten Stammzellen Angiogenese in einem Maushinterlauf-Ischämie-Modell zu fördern. 

Serie: Programming Stem Cells for Therapeutic Angiogenesis Using Biodegradable Polymeric Nanoparticles

Formulation of Diblock Polymeric Nanoparticles through Nanoprecipitation Technique

Nanotechnology is a relatively new branch of science that involves harnessing the unique properties of particles that are nanometers in scale (nanoparticles). Nanoparticles can be engineered in a precise fashion where their size, composition and surface chemistry can be carefully controlled. This enables unprecedented freedom to modify some of the fundamental properties of their cargo, such as solubility, diffusivity, biodistribution, release characteristics and immunogenicity. Since their inception, nanoparticles have been utilized in many areas of science and medicine, including drug delivery, imaging, and cell biology1-4. However, it has not been fully utilized outside of "nanotechnology laboratories" due to perceived technical barrier. In this article, we describe a simple method to synthesize a polymer based nanoparticle platform that has a wide range of potential applications. 
The first step is to synthesize a diblock co-polymer that has both a hydrophobic domain and hydrophilic domain. Using PLGA and PEG as model polymers, we described a conjugation reaction using EDC/NHS chemistry5 (Fig 1). We also discuss the polymer purification process. The synthesized diblock co-polymer can self-assemble into nanoparticles in the nanoprecipitation process through hydrophobic-hydrophilic interactions.
The described polymer nanoparticle is very versatile. The hydrophobic core of the nanoparticle can be utilized to carry poorly soluble drugs for drug delivery experiments6. Furthermore, the nanoparticles can overcome the problem of toxic solvents for poorly soluble molecular biology reagents, such as wortmannin, which requires a solvent like DMSO. However, DMSO can be toxic to cells and interfere with the experiment. These poorly soluble drugs and reagents can be effectively delivered using polymer nanoparticles with minimal toxicity. Polymer nanoparticles can also be loaded with fluorescent dye and utilized for intracellular trafficking studies. Lastly, these polymer nanoparticles can be conjugated to targeting ligands through surface PEG. Such targeted nanoparticles can be utilized to label specific epitopes on or in cells7-10.

This article describes a nanoprecipitation method to synthesize polymer-based nanoparticles using diblock co-polymers. We will discuss the synthesis of diblock co-polymers, the nanoprecipitation technique, and potential applications.

Formulierung von Diblock Polymernanopartikel durch Nanopräzipitation Technik

Nanotechnology is a relatively new branch of science that involves harnessing the unique properties of particles that are nanometers in scale ...

Forschung

Biotechnik

Therapeutic Gene Delivery and Transfection in Human Pancreatic Cancer Cells using Epidermal Growth Factor Receptor-targeted Gelatin Nanoparticles

More than 32,000 patients are diagnosed with pancreatic cancer in the United States per year and the disease is associated with very high mortality 1. Urgent need exists to develop novel clinically-translatable therapeutic strategies that can improve on the dismal survival statistics of pancreatic cancer patients. Although gene therapy in cancer has shown a tremendous promise, the major challenge is in the development of safe and effective delivery system, which can lead to sustained transgene expression. 
Gelatin is one of the most versatile natural biopolymer, widely used in food and pharmaceutical products. Previous studies from our laboratory have shown that type B gelatin could physical encapsulate DNA, which preserved the supercoiled structure of the plasmid and improved transfection efficiency upon intracellular delivery. By thiolation of gelatin, the sulfhydryl groups could be introduced into the polymer and would form disulfide bond within nanoparticles, which stabilizes the whole complex and once disulfide bond is broken due to the presence of glutathione in cytosol, payload would be released 2-5. Poly(ethylene glycol) (PEG)-modified GENS, when administered into the systemic circulation, provides long-circulation times and preferentially targets to the tumor mass due to the hyper-permeability of the neovasculature by the enhanced permeability and retention effect 6. Studies have shown over-expression of the epidermal growth factor receptor (EGFR) on Panc-1 human pancreatic adenocarcinoma cells 7. In order to actively target pancreatic cancer cell line, EGFR specific peptide was conjugated on the particle surface through a PEG spacer.8
Most anti-tumor gene therapies are focused on administration of the tumor suppressor genes, such as wild-type p53 (wt-p53), to restore the pro-apoptotic function in the cells 9. The p53 mechanism functions as a critical signaling pathway in cell growth, which regulates apoptosis, cell cycle arrest, metabolism and other processes 10. In pancreatic cancer, most cells have mutations in p53 protein, causing the loss of apoptotic activity. With the introduction of wt-p53, the apoptosis could be repaired and further triggers cell death in cancer cells 11. 
Based on the above rationale, we have designed EGFR targeting peptide-modified thiolated gelatin nanoparticles for wt-p53 gene delivery and evaluated delivery efficiency and transfection in Panc-1 cells.

Type B gelatin-based engineered nanovectors system (GENS) was developed for systemic gene delivery and transfection in the treatment of pancreatic cancer. By modification with epidermal growth factor receptor (EGFR) specific peptide on the surface of nanparticles, they could target on EGFR receptor and release plasmid under reducing environment, such as high intracellular glutathione concentrations.

Gentransfer und Transfektion in humanen Pankreaskarzinom-Zellen mit Epidermal Growth Factor Gelatin-Based Engineered Nanovektoren Rezeptor-gezielte

More than 32,000 patients are diagnosed with pancreatic cancer in the United States per year and the disease is associated with very high mortality 1. ...

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a technology for regenerative medicine2. Unlike viruses, which have significant safety issues, polymeric nanoparticles can be designed to be non-toxic, non-immunogenic, non-mutagenic, easier to synthesize, chemically versatile, capable of carrying larger nucleic acid cargo and biodegradable and/or environmentally responsive. Cationic polymers self-assemble with negatively charged DNA via electrostatic interaction to form complexes on the order of 100 nm that are commonly termed polymeric nanoparticles. Examples of biomaterials used to form nanoscale polycationic gene delivery nanoparticles include polylysine, polyphosphoesters, poly(amidoamines)s and polyethylenimine (PEI), which is a non-degradable off-the-shelf cationic polymer commonly used for nucleic acid delivery1,3 . Poly(beta-amino ester)s (PBAEs) are a newer class of cationic polymers4 that are hydrolytically degradable5,6 and have been shown to be effective at gene delivery to hard-to-transfect cell types such as human retinal endothelial cells (HRECs)7, mouse mammary epithelial cells8, human brain cancer cells9 and macrovascular (human umbilical vein, HUVECs) endothelial cells10.
A new protocol to characterize polymeric nanoparticles utilizing nanoparticle tracking analysis (NTA) is described. In this approach, both the particle size distribution and the distribution of the number of plasmids per particle are obtained11. In addition, a high-throughput 96-well plate transfection assay for rapid screening of the transfection efficacy of polymeric nanoparticles is presented. In this protocol, poly(beta-amino ester)s (PBAEs) are used as model polymers and human retinal endothelial cells (HRECs) are used as model human cells. This protocol can be easily adapted to evaluate any polymeric nanoparticle and any cell type of interest in a multi-well plate format.

A protocol for nanoparticle tracking analysis (NTA) and high-throughput flow cytometry to evaluate polymeric gene delivery nanoparticles is described. NTA is utilized to characterize the nanoparticle particle size distribution and the plasmid per particle distribution. High-throughput flow cytometry enables quantitative transfection efficacy evaluation for a library of gene delivery biomaterials.

Evaluation von polymeren Gene Delivery-Nanopartikeln durch Nanopartikel Tracking-Analyse und High-throughput Durchflusszytometrie

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

Transplantation of Induced Pluripotent Stem Cell-derived Mesoangioblast-like Myogenic Progenitors in Mouse Models of Muscle Regeneration

Patient-derived iPSCs could be an invaluable source of cells for future autologous cell therapy protocols. iPSC-derived myogenic stem/progenitor cells similar to pericyte-derived mesoangioblasts (iPSC-derived mesoangioblast-like stem/progenitor cells: IDEMs) can be established from iPSCs generated from patients affected by different forms of muscular dystrophy. Patient-specific IDEMs can be genetically corrected with different strategies (e.g. lentiviral vectors, human artificial chromosomes) and enhanced in their myogenic differentiation potential upon overexpression of the myogenesis regulator MyoD. This myogenic potential is then assessed in vitro with specific differentiation assays and analyzed by immunofluorescence. The regenerative potential of IDEMs is further evaluated in vivo, upon intramuscular and intra-arterial transplantation in two representative mouse models displaying acute and chronic muscle regeneration. The contribution of IDEMs to the host skeletal muscle is then confirmed by different functional tests in transplanted mice. In particular, the amelioration of the motor capacity of the animals is studied with treadmill tests. Cell engraftment and differentiation are then assessed by a number of histological and immunofluorescence assays on transplanted muscles. Overall, this paper describes the assays and tools currently utilized to evaluate the differentiation capacity of IDEMs, focusing on the transplantation methods and subsequent outcome measures to analyze the efficacy of cell transplantation.

Induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived myogenic progenitors are promising candidates for cell therapy strategies to treat muscular dystrophies. This protocol describes transplantation and functional measurements required to evaluate the engraftment and differentiation of iPSC-derived mesoangioblasts (a type of muscle progenitors) in mouse models of acute and chronic muscle regeneration.

Transplantation von induzierten pluripotenten Stammzellen-abgeleiteten mesoangioblast-ähnlichen myogenen Vorläufern in Mausmodellen der Muskelregeneration

Patient-derived iPSCs could be an invaluable source of cells for future autologous cell therapy protocols. iPSC-derived myogenic stem/progenitor cells ...

Harmonic Nanoparticles for Regenerative Research

In this visualized experiment, protocol details are provided for in vitro labeling of human embryonic stem cells (hESC) with second harmonic generation nanoparticles (HNPs). The latter are a new family of probes recently introduced for labeling biological samples for multi-photon imaging. HNPs are capable of doubling the frequency of excitation light by the nonlinear optical process of second harmonic generation with no restriction on the excitation wavelength.
Multi-photon based methodologies for hESC differentiation into cardiac clusters (maintained as long term air-liquid cultures) are presented in detail. In particular, evidence on how to maximize the intense second harmonic (SH) emission of isolated HNPs during 3D monitoring of beating cardiac tissue in 3D is shown. The analysis of the resulting images to retrieve 3D displacement patterns is also detailed.

Protocol details are provided for in vitro labeling human embryonic stem cells with second harmonic generating nanoparticles. Methodologies for hESC investigation by multi-photon microscopy and their differentiation into cardiac clusters are also presented.

Harmonic Nanopartikel für Regenerative Forschung

In this visualized experiment, protocol details are provided for in vitro labeling of human embryonic stem cells (hESC) with second harmonic generation ...

Ordering Single Cells and Single Embryos in 3D Confinement: A New Device for High Content Screening

Biological cells are usually observed on flat (2D) surfaces. This condition is not physiological, and phenotypes and shapes are highly variable. Screening based on cells in such environments have therefore serious limitations: cell organelles show extreme phenotypes, cell morphologies and sizes are heterogeneous and/or specific cell organelles cannot be properly visualized. In addition, cells in vivo are located in a 3D environment; in this situation, cells show different phenotypes mainly because of their interaction with the surrounding extracellular matrix of the tissue. In order to standardize and generate order of single cells in a physiologically-relevant 3D environment for cell-based assays, we report here the microfabrication and applications of a device for in vitro 3D cell culture. This device consists of a 2D array of microcavities (typically 105 cavities/cm2), each filled with single cells or embryos. Cell position, shape, polarity and internal cell organization become then normalized showing a 3D architecture. We used replica molding to pattern an array of microcavities, &#8216;eggcups&#8217;, onto a thin polydimethylsiloxane (PDMS) layer adhered on a coverslip. Cavities were covered with fibronectin to facilitate adhesion. Cells were inserted by centrifugation. Filling percentage was optimized for each system allowing up to 80%. Cells and embryos viability was confirmed. We applied this methodology for the visualization of cellular organelles, such as nucleus and Golgi apparatus, and to study active processes, such as the closure of the cytokinetic ring during cell mitosis. This device allowed the identification of new features, such as periodic accumulations and inhomogeneities of myosin and actin during the cytokinetic ring closure and compacted phenotypes for Golgi and nucleus alignment. We characterized the method for mammalian cells, fission yeast, budding yeast, C. elegans with specific adaptation in each case. Finally, the characteristics of this device make it particularly interesting for drug screening assays and personalized medicine.

We report a device and a new method to study cells and embryos. Single cells are precisely ordered in microcavity arrays. Their 3D confinement is a step towards 3D environments encountered in physiological conditions and allows organelle orientation. By controlling cell shape, this setup minimizes variability reported in standard assays.

Bestellen Einzelzellen und Einzel Embryos in 3D Confinement: Ein neues Gerät für High Content Screening

Biological cells are usually observed on flat (2D) surfaces. This condition is not physiological, and phenotypes and shapes are highly variable. Screening ...

Fabricating Superhydrophobic Polymeric Materials for Biomedical Applications

Superhydrophobic materials, with surfaces possessing permanent or metastable non-wetted states, are of interest for a number of biomedical and industrial applications. Here we describe how electrospinning or electrospraying a polymer mixture containing a biodegradable, biocompatible aliphatic polyester (e.g., polycaprolactone and poly(lactide-co-glycolide)), as the major component, doped with a hydrophobic copolymer composed of the polyester and a stearate-modified poly(glycerol carbonate) affords a superhydrophobic biomaterial. The fabrication techniques of electrospinning or electrospraying provide the enhanced surface roughness and porosity on and within the fibers or the particles, respectively. The use of a low surface energy copolymer dopant that blends with the polyester and can be stably electrospun or electrosprayed affords these superhydrophobic materials. Important parameters such as fiber size, copolymer dopant composition and/or concentration, and their effects on wettability are discussed. This combination of polymer chemistry and process engineering affords a versatile approach to develop application-specific materials using scalable techniques, which are likely generalizable to a wider class of polymers for a variety of applications.

Two- and three-dimensional superhydrophobic polymeric materials are prepared by electrospinning or electrospraying biodegradable polymers blended with a lower surface energy polymer of similar composition.

Herstellung Superhydrophobe Polymere Materialien für biomedizinische Anwendungen

Superhydrophobic materials, with surfaces possessing permanent or metastable non-wetted states, are of interest for a number of biomedical and industrial ...

Multicolor Fluorescence Detection for Droplet Microfluidics Using Optical Fibers

Fluorescence assays are the most common readouts used in droplet microfluidics due to their bright signals and fast time response. Applications such as multiplex assays, enzyme evolution, and molecular biology enhanced cell sorting require the detection of two or more colors of fluorescence. Standard multicolor detection systems that couple free space lasers to epifluorescence microscopes are bulky, expensive, and difficult to maintain. In this paper, we describe a scheme to perform multicolor detection by exciting discrete regions of a microfluidic channel with lasers coupled to optical fibers. Emitted light is collected by an optical fiber coupled to a single photodetector. Because the excitation occurs at different spatial locations, the identity of emitted light can be encoded as a temporal shift, eliminating the need for more complicated light filtering schemes. The system has been used to detect droplet populations containing four unique combinations of dyes and to detect sub-nanomolar concentrations of fluorescein.

Multicolor fluorescence detection in droplet microfluidics typically involves bulky and complex epifluorescence microscope-based detection systems. Here we describe a compact and modular multicolor detection scheme that utilizes an array of optical fibers to temporally encode multicolor data collected by a single photodetector.

Mehrfarbenfluoreszenzdetektion für Droplet Mikrofluidik Verwendung von Optical Fibers

Fluorescence assays are the most common readouts used in droplet microfluidics due to their bright signals and fast time response. Applications such as ...

Flash NanoPrecipitation for the Encapsulation of Hydrophobic and Hydrophilic Compounds in Polymeric Nanoparticles

The formulation of a therapeutic compound into nanoparticles (NPs) can impart unique properties. For poorly water-soluble drugs, NP formulations can improve bioavailability and modify drug distribution within the body. For hydrophilic drugs like peptides or proteins, encapsulation within NPs can also provide protection from natural clearance mechanisms. There are few techniques for the production of polymeric NPs that are scalable. Flash NanoPrecipitation (FNP) is a process that uses engineered mixing geometries to produce NPs with narrow size distributions and tunable sizes between 30 and 400 nm. This protocol provides instructions on the laboratory-scale production of core-shell polymeric nanoparticles of a target size using FNP. The protocol can be implemented to encapsulate either hydrophilic or hydrophobic compounds with only minor modifications. The technique can be readily employed in the laboratory at milligram scale to screen formulations. Lead hits can directly be scaled up to gram- and kilogram-scale. As a continuous process, scale-up involves longer mixing process run time rather than translation to new process vessels. NPs produced by FNP are highly loaded with therapeutic, feature a dense stabilizing polymer brush, and have a size reproducibility of &#177; 6%.

Flash NanoPrecipitation (FNP) is a scalable approach to produce polymeric core-shell nanoparticles. Lab-scale formulations for the encapsulation of hydrophobic or hydrophilic therapeutics are described.

Flash-NanoPrecipitation für die Kapselung der hydrophoben und hydrophilen Verbindungen in Polymeren Nanopartikel

The formulation of a therapeutic compound into nanoparticles (NPs) can impart unique properties. For poorly water-soluble drugs, NP formulations can ...

Uptake of New Lipid-coated Nanoparticles Containing Falcarindiol by Human Mesenchymal Stem Cells

Nanoparticles are the focus of an increased interest in drug delivery systems for cancer therapy. Lipid-coated nanoparticles are inspired in structure and size by low-density lipoproteins (LDLs) because cancer cells have an increased need for cholesterol to proliferate, and this has been exploited as a mechanism for delivering anticancer drugs to cancer cells. Moreover, depending on drug chemistry, encapsulating the drug can be advantageous to avoid degradation of the drug during circulation in vivo. Therefore, in this&#160;study, this design is used to fabricate lipid-coated nanoparticles of the anticancer drug falcarindiol, providing a potential new delivery system of falcarindiol in order to stabilize its chemical structure against degradation and improve its uptake by tumors. Falcarindiol nanoparticles, with a phospholipid and cholesterol monolayer encapsulating the purified drug core of the particle, were designed. The lipid monolayer coating consists of 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC), cholesterol (Chol), and 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000] (DSPE PEG 2000) along with the fluorescent label DiI (molar ratios of 43:50:5:2). The nanoparticles are fabricated using the rapid injection method, which is a fast and simple technique to precipitate nanoparticles by good-solvent for anti-solvent exchange. It consists of a rapid injection of an ethanol solution containing the nanoparticle components into an aqueous phase. The size of the fluorescent nanoparticles is measured using dynamic light scattering (DLS) at 74.1 &#177; 6.7 nm. The uptake of the nanoparticles is tested in human mesenchymal stem cells (hMSCs) and imaged using fluorescence and confocal microscopy. The uptake of the nanoparticles is observed in hMSCs, suggesting the potential for such a stable drug delivery system for falcarindiol.

This article describes the encapsulation of falcarindiol in lipid-coated 74 nm nanoparticles. The cellular uptake of the nanoparticles&#160;by human stem cells into lipid droplets is monitored by fluorescent and confocal imaging. Nanoparticles are fabricated by the rapid injection method of solvent shifting, and their size is measured with the dynamic light scattering technique.

Aufnahme von neuen Lipid-beschichteten Nanopartikeln mit Falcarindiol von humanen mesenchymalen Stammzellen

Nanoparticles are the focus of an increased interest in drug delivery systems for cancer therapy. Lipid-coated nanoparticles are inspired in structure and ...