Dieses Protokoll ist wichtig, weil es das bestmögliche Modell für pulmonale arterielle Hypertonie produziert. Kein anderes Modell produziert die plexiformen Läsionen, die bei menschlichen PAH-Patienten gefunden werden. Der Hauptvorteil ist, dass wir den Blutfluss in der rechten Lungen- und Lungenarterie verdoppeln, endotheliale Schäden verursachen und die Lunge zwingen, doppelt so hart zu arbeiten.
Unsere Gruppe hat ein hocheffizientes Modell der pulmonalen arteriellen Hypertonie entwickelt, um Therapeutika zu entwickeln. Neben pulmonaler Arterien-Hypertonie könnte diese Methode in der regenerativen Medizin hilfreich sein und Einblicke in andere Krankheiten mit erhöhtem Lungenfluss wie angeborene Herzfehler oder Post-Pneumonektomie-Patienten geben. Für jemanden, der diese Technik noch nie durchgeführt hat, ist mein Rat, das Protokoll genau zu befolgen und sicherzustellen, dass der Chirurg genau sehen kann, was er tut.
Nach der Anästhesisierung der Ratte mit 4%isoflurane wird das Tier mit einem Glasfaser-Gänselicht intubiert, um die Luftröhre zu beleuchten. Legen Sie einen 16-Spur-Katheter in den Kehlkopf ein und verwenden Sie einen kalten Spiegel, um die Kondensation der Feuchtigkeit im ausgeatmeten Atem aus dem Katheter zu beobachten, um die Intubation zu bestätigen. Schließen Sie die Ratte an das Beatmungsgerät an und platzieren Sie die Ratte unter dem Mikroskop in der richtigen Dekubitusposition auf einem 37 Grad Celsius Heizkissen.
Sichern Sie die Vorderbeine mit Klebeband, und verwenden Sie Clipper, um den linken Thorax hinter dem Vorderbein bis zum Ende des Brustkorbs zu rasieren. Reinigen Sie die exponierte Haut mit drei sequenziellen 10%Povidon-Jodlösung und 70%Ethanol-Tüchern, und legen Sie ein Puls-Oximeter auf den Fuß der Ratte, um die Herzfrequenz und Sauerstoffsättigung während der operation zu überwachen. Passen Sie nun das Mikroskop an und rücken Sie den chirurgischen Blick in den Fokus.
Legen Sie dann einen sterilen Vorhang über den Körper der Ratte und das Instrumententablett, um eine sterile Umgebung zu schaffen. Und schließlich sterile Instrumente auf die sterile Instrumentenschale legen. Um eine linke Pneumonektomie durchzuführen, verwenden Sie Cooley-Mayo Schere und Gerald Tissue Zange, um ein zwei bis drei Zentimeter Loch in den chirurgischen Vorhang zu schneiden, und verwenden Sie eine chirurgische Klinge, um einen zwei Zentimeter langen seitlichen Schnitt im linken Thorax zu machen.
Verwenden Sie Cooley-Mayo Schere, um jede Gewebeschicht zu schneiden, bis die Rippen und interkostalen Muskeln ausgesetzt sind. Verwenden Sie eine Mücke, um ein Loch durch den Muskel des dritten interkostalen Raumes zu machen. Bewegen Sie die Lunge mit einer doppelt endenden Sonde, um die Lungenarterie zu visualisieren, und verwenden Sie die McPherson-Vannas Iris Schere, um die interkostalen Muskeln auf eine Breite von etwa ein bis zwei Zentimetern zu öffnen.
Legen Sie einen kleinen selbsterhaltenden Retraktor in die linke Pleura, um die Rippen und Muskeln offen zu halten, und bewegen Sie die linke Lunge unten im Bauch, um den Zugang zur Lungenarterie und bronchus zu ermöglichen. Für die Ligation des linken Hauptbronchus und der Lungenarterie, zuerst, laden Sie einen mittleren Hämoclip in einen Ligating Clip Applikator und verwenden Sie die Wangensteen atraumatischeZange, um vorsichtig den oberen Teil der linken Lunge zu heben, um die Lungenarterie freizulegen. Schließen Sie den Clip und Applikator um die Arterie, wobei Sie darauf achten, die linke Azygosvene nicht zu schließen oder zu brechen.
Und öffnen Sie den Schnitt weiter mit der Mandel, um die Muskelfasern zu trennen. Nachdem Sie einen weiteren mittleren Hämoclip in den Ligating-Clip-Applikator geladen haben, verwenden Sie die atraumatischen Zangen und Standard-Gewebezangen, um den unteren Teil der Lunge aus dem Schnitt zu heben, bis die linke Hauptbronchus und linke Lungenvene visualisiert werden. Die linke Hauptbronchus und Die Lungenvene zusammen mit dem zweiten Hämoclip vorsichtig ligagen und die Lunge mit einer Schere entfernen, ohne den Clip zu schneiden oder zu zerreißen.
Verwenden Sie dann ein kleines Stück sterile Gaze, um Blut aufzunehmen und Blutungen einzudämmen. Verwenden Sie den Nadelhalter und eine 4-0 Prolen-Nähte, um die Rippen und interkostalen Muskeln zu schließen. Bevor Sie die interkostalen Muskeln schließen, legen Sie einen 16-Spur-Katheter in die Brusthöhle weg vom chirurgischen Schnitt und in den siebten interkostalen Raum ein, und entfernen Sie sofort die Nadel, so dass der Katheter an Ort und Stelle bleibt.
Legen Sie eine 5-0 Naht in die Haut und um das Brustrohr, so dass, wenn das Brustrohr entfernt wird, wird das Loch geschlossen gebunden werden, und binden Sie die Nähte, um die Rippen zu schließen. Schließen Sie die Haut und den subkutanen Raum mit einer laufenden 5-0 Naht, und verwenden Sie eine Drei-Milliliter-Spritze, um die Luft aus der Pleurahöhle durch den Katheter zu evakuieren, um den normalen Unterdruck im Thorax wiederherzustellen. Verwenden Sie einen Nadelhalter, um den Katheter sofort zu klemmen, um zu verhindern, dass Luft in die Brusthöhle zurückgelangt.
Entfernen Sie den Katheter und binden Sie die Naht, um das Loch zu schließen. In der Pneumonektomie- und Monokrotingruppe entwickelt sich bis Zum 21. Tag eine schwere pulmonale Hypertonie, wie eine Erhöhung des mittleren Lungenarteriendrucks im Vergleich zur Kontrolle unbehandelter Scheintiere zeigt. In der Pneumonektomie plus Sugen-Gruppe ist der mittlere Lungenarteriendruck dreimal höher als in der Kontrollgruppe.
Der rechtsventrikuläre systolische Druck ist auch bei monocrotin-und Sugen-behandelten Tieren viel höher als bei der Kontrollgruppe. In Hämatoxylin und Eosin gefärbt normale Ratten Lungengewebe Abschnitte, Räume zwischen den Alveolen und den alveolären Strukturen sind offensichtlich, und die Gefäße sind klar und von einer normalen Dicke. In der Lungenarterien-Hypertonie-Lunge gibt es Hinweise auf Umgestaltung, Verdickung der Gefäßwände, schwere Verengung der Gefäße und Entzündungen und fokale Lungenarteritis.
Das Tier muss den Verlust einer Lunge kompensieren, daher ist es wichtig, während der Erholungsphase geduldig zu sein. Überwachen Sie die Vitalzeichen und geben Sie bei Bedarf zusätzliches Sauerstoff- oder Lungenvolumen. Sugen erzeugt endotheliale Apoptose, die klinisch relevantes Zeichen einer pulmonalen arteriellen Hypertonie ist.
Das linke Pneumonektomiemodell bei Nagetieren hat Wissenschaftlern den Weg geebnet, Um Strömungsanomalien zu untersuchen und neuartige Behandlungen für pulmonale arterielle Hypertonie zu entwickeln. Aufgrund der Verwendung von Isofluran, Sugen und/oder MCT in diesem Modell muss die persönliche Schutzausrüstung jederzeit getragen werden.
