Dieses Protokoll kann verwendet werden, um pulmonale Hypertonie zu induzieren und funktionelle Messungen der rechten Herzkammer durchzuführen. Das Sugen Hypoxia Modell ist einfach zu implementieren und kann einige der Merkmale der pulmonalen Hypertonie innerhalb von zwei bis drei Wochen nach der Induktion rekapitulieren. Mit diesem Modell können wir neue Wege identifizieren, die an der Entwicklung der Krankheit beteiligt sind.
Wir können neue Ziele identifizieren und ihr therapeutisches Potenzial testen. Vor Beginn des Induktionsverfahrens die Stickstofftanks in der Nähe der hypoxischen Kammer sichern und den Sauerstoffregler auf einen Punkt von 10% Sauerstoff einstellen. Als nächstes die frisch zubereitete SU5416-Lösung in eine Ein-Milliliter-Spritze mit 25-Spur-Nadel laden und das erste zu injizierende Tier manuell zurückhalten.
Greifen Sie die Haut, um ein Zelt parallel zur Wirbelsäule zu bilden, um sicherzustellen, dass sie den Hinterkopf fest greifen, um eine mögliche Bissverletzung durch die Maus zu vermeiden. Setzen Sie die Nadel subkutan über die Flanke an der lockeren Hautfalte parallel zur Haut und liefern Sie 100 Mikroliter des Spritzeninhalts. Nach 10 Sekunden ziehen Sie die Nadel aus und bringen Sie das Tier in seinen Käfig zurück.
Wenn alle Tiere injiziert wurden, legen Sie die Mäuse in eine belüftete Hypoxiekammer. Bestätigen Sie bei Hypoxie-Exposition, dass die Kammern mit einem Sauerstoffsensor ausgestattet sind, um den Sauerstoffgehalt zu messen, und öffnen Sie die Kammern für nicht mehr als 20 Minuten alle drei Tage für die Reinigung und Zugabe von Nahrung und Wasser. Untersuchen Sie Tiere täglich auf Anzeichen von Stress und wiederholen Sie die SU5416 Injektion wöchentlich für drei aufeinander folgende Wochen.
Bevor Sie das Druckmessverfahren einleiten, bereiten Sie den Y-Rohrstecker vor und verwenden Sie den manuellen Modus, um die Funktion des Beatmungsgeräts zu überprüfen. Stellen Sie den Inspiratordruck auf weniger als einen Zentimeter Wasser ein, um Barotrauma zu vermeiden und die Atemfrequenz auf 110 Atemzüge pro Minute einzustellen. Schneiden Sie einen 20 Gauge intravaskulären Katheter, um ein Endotrachealrohr zu erstellen und schalten Sie die Druckvolumenregelung ein.
Initiieren Sie die Datenerfassungssoftware und platzieren Sie den Druckvolumenkatheter in einem 15 Milliliter Zentrifugenrohr von PBS in einem 37 Grad Celsius Wasserbad. Kalibrieren Sie dann den Katheter entsprechend dem Herstellerprotokoll. Legen Sie die Maus auf ein Heizkissen und legen Sie eine rektale Sonde für die Überwachung der Körpertemperatur.
Als nächstes bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion auf Zehenkneifen in einer anästhesierten Maus und rasieren Sie den Hals und Brustbereich. Sichern Sie die Gliedmaßen der Maus mit chirurgischem Klebeband und machen Sie einen ein Zentimeter Schnitt in der medialen Zervixhaut. Mit einem Baumwolle gekippt Applikator, stumpf trennen die Ohrspeicheldrüsen und submandibulären Speicheldrüsen, um die Muskeln, die die Luftröhre zu belichten.
Schneiden Sie vorsichtig die Muskeln, um die Luftröhre vollständig freizulegen und verwenden Sie eine Schere, um einen kleinen Schnitt zwischen den Trachealknorpeln zu machen. Legen Sie das vorbereitete Endotrachealrohr ein und entfernen Sie die Metallführung des intravaskulären Katheters. Schließen Sie dann den Katheter an das Beatmungsgerät an und überprüfen Sie die Position des Trachealrohrs, indem Sie die Lunge manuell sanft aufblasen.
Sichern Sie die Position mit Klebeband. Für die rechte Ventrikeldruckmessung, machen Sie einen einen Zentimeter Hautschnitt über den xiphoiden Prozess und den Oberbauch und beginnend an der Mittellinie distal zum xiphoid und vorsichtig seitlich auf beiden Seiten bewegen, trennen Sie die Haut über die Brust und Bauchwand. Öffnen Sie die Bauchhöhle, schneiden Sie das Zwerchfell sorgfältig, wobei Darauf geachtet wird, das schlagende Herz oder die Lunge nicht zu verletzen.
Und verwenden Sie einen Baumwolle gekippt Applikator, um sanft das Perikard zu entfernen. Bringen Sie den Druckkatheter in die Nähe der Maus und verwenden Sie einen mit einer Nadel ausgestatteten Baumwollapplikator, um eine Stichwunde im atypischen distalen Teil des rechten Ventrikels zu machen. Ersetzen Sie die Nadel vorsichtig durch Druckkatheter, indem Sie den Druckkatheter parallel zur Richtung des rechten Ventrikels mit der Spitze zur Lungenarterie einsetzen.
Beobachten Sie die Druckwellenverfolgung, um eine korrekte Positionierung des Katheters zu gewährleisten. Sobald sich das Drucksignal stabilisiert hat, halten Sie die Atmungsgeräte an und erhalten Sie mindestens drei Messungen. Wenn alle Messungen aufgezeichnet wurden, geben Sie den Katheter vorsichtig an das PBS-gefüllte Zentrifugenrohr im Wasserbad zurück.
Hierwerden werden repräsentative Druckkurven und eine quantitative Analyse des rechten ventrikulären Drucks am Ende des Beobachtungszeitraums gezeigt. Die histologische Analyse der umgestalteten Lungenarterien nach Hypoxie plus SU5416-Behandlung zeigt eine Zunahme der medialen Wanddicke im Vergleich zu normoxischen Tieren. Weizenkeim Agglutinin Färbung zur Beurteilung der Kardiomyozytenhypertrophie zeigt, dass Hypoxie plus SU5416 Exposition führt zu einer deutlichen Zunahme der Kardiomyozytengröße und rechtsventrikuläre Hypertrophie.
Darüber hinaus bestätigt die morphometrische Auswertung der rechtsventrikulären Hypertrophie durch Messung des Fulton-Index einen Anstieg der rechtsventrikulären Hypertrophie bei hypoxischen Tieren. Die Durchführung der funktionellen Messungen ist wichtig, um Blutungen zu vermeiden, da dies die Ergebnisse der Studie negativ beeinflussen kann. Dieses Protokoll kann auch verwendet werden, um pulmonale Hypertonie bei Ratten mit nur leichten Modifikationen zu induzieren.
Bemerkenswert ist, nur eine Sugen-Injektion bei Ratten ist ausreichend, um pulmonale Hypertonie zu induzieren.
