Diese Methode ist zuverlässig, um die Erzeugung von Myokardinfarkt zu studieren und eine ausgezeichnete Plattform für die Untersuchung der Herzerholung nach, zum Beispiel, Stammzelltransplantation. Der Hauptvorteil dieses Verfahrens ist, dass es verwendet werden kann, um einheitliche Infarktgrößen auf eine schnelle, einfache und reproduzierbare Weise zu erzeugen. In diesem Modell können neuartige experimentelle Interventionen wie pharmakologische oder gewebebasierte Strategien getestet werden.
Und erfolgreich testen, dass Optionen in großen Tiermodellen weiter bestätigt werden können. Nach der Bestätigung einer mangelnden Reaktion auf Schmerzreflex in einer anästhesierten 27 Gramm, 14 Wochen alte Maus, verwenden Sie einen Haarschneider, um das Fell der Brust und Hals des Tieres zu entfernen und legen Sie die Maus in eine Supine-Position auf einem beheizten Pad. Verkleben Sie die Hinter- und Vorderbeine in einer ausgebreiteten Adlerposition und verwenden Sie sequenzielle Povidon-Jod- und 80%Ethanol-Peelings, um die exponierte Haut zu desinfizieren.
Machen Sie einen Mittellinien-Hautschnitt vom unteren Drittel des Brustbeins bis zum Kinn, und verwenden Sie gekrümmte Zangen, um die Muskeln um den Hals vorsichtig zu trennen, um die Luftröhre freizulegen. Verwenden Sie eine Mikroschere, um eine Tracheotomie zwischen dem zweiten und dritten Knorpelringen durchzuführen. Und stellen Sie das Beatmungsgerät auf eine Belüftungsfrequenz von 110 pro Minute bei einem Gezeitenvolumen von 0,5 Millilitern ein.
Legen Sie dann eine an das Beatmungsgerät angeschlossene Kanüle aus Kunststoff und 20 Gauge in die Luftröhre ein. Als nächstes verwenden Sie Kautery, um den rechten Pectoralis-Muskel von seinem sternalen Ursprung zwischen der dritten und siebten Rippe zu lösen. Und verwenden Sie seitlich abgewinkelte Federschere, um die vierte bis sechs Rippen so nah wie möglich am Brustbein zu schneiden.
Sezieren Sie das darunter liegende Bindegewebe, um einen klaren Blick in die Brusthöhle zu erhalten, indem Sie die Brustarterie kauterisieren, um Blutungen bei Bedarf einzudämmen. Legen Sie einen Mini-Goldfleck-Retraktor ein, um die Rippen zu verteilen und die Brusthöhle offen zu halten. Und verwenden Sie stumpfe Zange, um das Perikard zu öffnen, um das Herz zu entblößen.
Verwenden Sie eine stumpfe Stange, um das Herz aus der Brusthöhle zu heben und die Spannung des Retraktors zu verringern, um die Brustöffnung zu reduzieren und das Herz davon abzuhalten, in die Bauchhöhle zurückzufallen. Eine Kryoprobe mit einem Durchmesser von drei Millimetern für 10 Sekunden vorkühlen und die Kryoprobe 10 Sekunden lang auf die innere linke Ventrikelwand auftragen, um einen linksventrikulären Kryoverletzungsinfarkt zu erzeugen. Lösen Sie die Kryoprobe von der linken ventrikulären Wand mit Raumtemperatur-Salinenbewässerung und vergrößern Sie die Brustöffnung mit dem Retraktor.
Verwenden Sie die Stange, um das Herz sanft in die Brusthöhle zurückundlassen und den Retraktor zu entfernen. Verwenden Sie eine 6-0 Naht, um die Sternotomie mit einem einzigen Knoten zu verbinden. Und verwenden Sie eine laufende 6-0 Naht, um die Brusthöhle zu schließen.
Verwenden Sie eine 10 Milliliter Spritze, um die verbleibende Luft aus der Brust zu evakuieren, bevor Sie den Knoten binden und die Haut an der kaudalen Kante anpassen, bevor Sie eine laufende 5-0 Naht verwenden, um das Gewebe bis zum Punkt der Luftröhre zu schließen. Nach der Reduktion des Isoflurans und des tierischen Zufalls wird die Atempause den Luftröhrenkatheter entfernt und der Trachealschnitt mit einem 8-0 Naht. Ersetzen Sie die ventralen Nackenmuskeln wieder in ihre anatomische Position über die Luftröhre und vervollständigen Sie die Hautnaht.
Dann fügen Sie Metamizol in das Trinkwasser für Schmerzanalgesie für drei Tage mit täglicher Tierüberwachung für acht Wochen. Bei kryoverletzten Herzen zeigt die Echokardiographie eine signifikant reduzierte Auswurffraktion und bruchstückhafte Veränderung des Bereichs, wobei funktionelle Beeinträchtigungen vom siebten Tag nach der Operation bis zum experimentellen Endpunkt bei 56 Tagen beobachtet wurden. Wie durch die Druck-Volumen-Loop-Analyse beurteilt, führt die Kryoinfraktion zu einer beeinträchtigten linken Ventrikelfunktion, die als Abnahme des Hubvolumens, der Hubarbeit, der Herzleistung und der vorlastangepassten maximalen Leistung reflektiert wird.
Die optische Ex-vivo-Kartierung fluoreszierender spannungsempfindlicher gefärbter Herzen zeigt eine Blockade der elektrischen Leitung an der Grenze der Verletzung, was auf eine lokale elektrische Entkopplung hindeutet. Die histologische Färbung mit Massons Trichrom zeigt die transmuraale fibrotische Gewebebildung an der Stelle der Verletzung. Die Infarktgröße kann durch Messung der Infarktnarbenfläche oder mittelliniennarbenlangen Länge berechnet werden.
Darüber hinaus bestätigen immunfluoreszierende Färbung enthäuerst gegen einen Kardiomyozytenmarker und Kollagen-I das Vorhandensein von fibrotischem Umbau und den Verlust von Kardiomyozyten an der Unfallstelle. Es ist wichtig, die gleiche Kontaktdauer des Kryoproblems zu halten, da eine unterschiedliche Dauer zu inkongruenten Infarktgrößen führen kann. Einmal gemeistert kann diese Technik in 20 Minuten durchgeführt werden, wenn sie richtig ausgeführt wird.
Nachdem Sie sich dieses Video angeschaut haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie das Kryoverletzungsmodell ausführen. Viel Glück mit Ihren Experimenten.
