Dieses Protokoll bietet eine einfache, zuverlässige und reproduzierbare Methodik zur Induktion einer akuten regionalen myokardialen Ischämie und Reperfusionsschädigung in einem Kaninchenmodell für Nicht-Überlebens- und Überlebensexperimente. Diese Technik hat eine minimale Mortalität und Morbidität durch zwei verschiedene chirurgische Ansätze. Die Methodik ist kostengünstig und hat einen geringen technischen Aufwand und kann daher von Prüfärzten ohne chirurgische Expertise durchgeführt werden.
Die Freilegung der LAD durch eine Mini-Thorakotomie kann eine Herausforderung sein. Wir empfehlen, einen vierten Interkostalraum anterior parasternalis zu machen, der sich fünf bis sechs Zentimeter seitlich erstreckt, und eine solche Exposition und Kaninchennekropsie vorher zu üben. Um eine linke Mini-Thorakotomie für Überlebensstudien durchzuführen, heben Sie die linke Seite des anästhesierten Kaninchens mit einem Kissen um etwa 30 Grad an.
Abtasten und umreißen Sie die knöchernen Landmarken mit einem Markierungsstift mit Filzspitze. Mit einer Klinge Nummer 10 schneiden Sie die Haut über der fünften Rippe ein, die sich von der seitlichen Grenze des Brustbeins bis zu fünf bis sechs Zentimeter seitlich erstreckt. Mittels Elektrokauter wird der Musculus pectoralis major medial und anschließend der Musculus serratus anterior lateral durchtrennt.
Dann teilen Sie die Zwischenrippenmuskeln oberhalb der fünften Rippe, um das neurovaskuläre Bündel zu erhalten. Mit scharfer Dissektion wird das parietale Pleura mit einer Metzenbaum-Schere inzidiert, vorsichtig durch den vierten Zwischenrippenraum in den Pleuraspalt eingeführt und der initiale Pleuraschnitt in beide Richtungen parallel zur Rippe verlängert, bis ein Rippenspreizer oder Sternumretraktor eingeführt werden kann. Platzieren Sie einen Rippenspreizer oder Sternumretraktor im Rippenraum und erweitern Sie ihn, um das Herz und den Herzbeutel sichtbar zu machen.
Verwenden Sie eine DeBakey-Pinzette, um den Herzbeutel anzuheben. Öffnen Sie es mit einer Metzenbaum-Schere und fahren Sie mit der Isolierung der LAD-Arterie fort. Dies ermöglicht eine optimale Visualisierung der anterolateralen Oberfläche des Herzens bei ausreichender Exposition gegenüber dem LAD und seinen Ästen.
Um die LAD-Arterie zu isolieren, umschließen Sie ihren dritten diagonalen Ast mit einer 3-0-Polypropylen-Naht auf einer konischen Nadel und entfernen Sie dann die Nadel. Schneiden Sie im Überlebensfall die drei 3-0-Polypropylenfäden ab, die zur Isolierung des LAD verwendet wurden, und binden Sie die Enden locker zusammen. Die drei 3-0 Polypropylen-Fäden werden verwendet, um den Risikobereich und die Infarktzone bei der Entnahme des Herzens zu identifizieren.
Nach der Operation zwei 2-0-Achterstiche mit Polyglactin 910 um die Rippen binden. Verschließen Sie die muskulären und subkutanen Schichten mit einer 3-0-Polydioxanon-Naht im Lauf. Anschließend wird die Haut subkutikulär mit einer 5-0-Monofilamentnaht verschlossen.
Führen Sie abschließend eine Nadel-Thorakozentese durch, um den Pleurafehler zu evakuieren. Bei Nicht-Überlebensstudien fahren Sie sofort mit der Mittellinien-Sternotomie mit einer gebogenen Mayo-Schere fort. Verwenden Sie einen Sternumretraktor zur Visualisierung des Herzens und des Perikardsacks und öffnen Sie den Perikard wie zuvor demonstriert.
Visualisieren Sie die 3-0-Polypropylen-Fadenschlaufe, die während des zuvor durchgeführten Thorakotomie-Teils des Eingriffs platziert wurde. Um die LAD-Arterie zu isolieren, umschließen Sie ihren dritten diagonalen Ast mit einer 3-0-Polypropylen-Naht auf einer konischen Nadel. Entferne dann die Nadel und fädele beide Enden des Polypropylen-Filaments durch ein kleines Vinylröhrchen, um eine Schlinge zu bilden.
Platzieren Sie mit einer DeBakey-Pinzette ein rechteckiges PTFE-Pappett zwischen den beiden Polypropylen-Filamenten und legen Sie es zwischen die isolierte LAD-Arterie und den Vinylschlauch. Ziehe diese Schlinge fest, indem du auf den Vinylschlauch drückst und an den Polypropylen-Nahtfäden ziehst, um die koronale Arterie zu verschließen. Klemmen Sie den Schlauch mit einer Moskitoklemme fest, um die gewünschte Dichtheit zu erhalten.
Bestätigen Sie die myokardiale Ischämie durch die Beobachtung einer regionalen Zyanose des Epikards. Entfernen Sie die Schlinge nach 30 Minuten Ischämie-Induktion. Am Ende des Experiments entnehmen Sie das Herz für die biochemische und Gewebeanalyse.
Die aufgezeichneten EKGs vor der Ischämie, während der Ischämie und der Reperfusion zeigten Tachykardie, Arrhythmien, Reizleitungssystemdefekte, die Entwicklung von infarktbedingten Q-Wellen und ST-Streckenabweichungen. Die 2D-Echomessungen zeigten, dass die fraktionelle Verkürzung während der Ischämie und Postischämie im Vergleich zur Präischämie abnahm. Nach 30 Minuten induzierter regionaler myokardialer Ischämie wurden Hinweise auf eine Myokardnekrose beobachtet.
Die wichtigsten Schritte des Protokolls sind die sorgfältige Umkreisung des LAD, ohne die Arterie zu beschädigen oder venöse Blutungen zu verursachen, die angemessene Platzierung des PTFE-Pfandes, um Vasospasmus zu verhindern, und die Einbeziehung des LAD, um einen konsistenten Risikobereich zu schaffen. Diese Methodik ist nützlich bei Gefäßverletzungen, chronischer myokardialer Ischämie und akuten myokardialen Betäubungsmodellen, um kardiovaskuläre molekulare Mechanismen, pathophysiologische Mechanismen und therapeutische Ziele zu enthüllen, die Benutzerfreundlichkeit zu demonstrieren und Diagnose- und Behandlungsalgorithmen zu entwickeln.
