Nierenischämie-Reperfusionsverletzung ist die Hauptursache für akutes Nierenversagen. Dieses Modell ist sehr hilfreich, um die pathophysiologischen Veränderungen zu verstehen, die in der Niere nach einer ischämischen Beleidigung auftreten. Dieses Modell ist zeit- und kosteneffizient und liefert hochgradig reproduzierbare Daten.
Darüber hinaus ermöglicht dieses einseitige Nierenischämiemodell dem Forscher, mit längeren ischämischen Zeiten zu arbeiten und gleichzeitig eine hohe Überlebensrate aufrechtzuerhalten. Legen Sie zunächst die betäubte Maus auf den Operationstisch. Nach der Sterilisation des Operationsbereichs verwenden Sie eine Skalpellklinge, um einen etwa einen Zentimeter langen dorsalen lateralen chirurgischen Schnitt an der rechten Flanke hinter der Rippe vorzunehmen und coddley etwa einen Zentimeter parallel zur lumbalen Mittellinie fortzusetzen.
Transektieren Sie die Bauchmuskulatur mit einer Schere, um den retroperitonealen Raum zu visualisieren. Verwenden Sie ein steriles Wattestäbchen, um die kleinen Mengen Blut zu entfernen, die während des Schneidens der Muskeln produziert werden. Als nächstes drücken Sie die rechte Niere aus der Bauchhöhle heraus.
Legen Sie die Niere langsam und vorsichtig mit grauer Pinzette frei und identifizieren Sie den Nierenpedikel. Entfernen Sie dann vorsichtig das Fettgewebe um den Stiel herum. Verwenden Sie einen Halsted Mosquito Hemostat zur Manipulation der Gefäßklemme.
Um die Ischämie zu induzieren, legen Sie die Gefäßklemme über die Nierenarterie und die Vene, die im Nierenstamm vorhanden sind, und vermeiden Sie es, den benachbarten Harnleiter zu klemmen. Decken Sie die eingeklemmte Niere mit steriler Gaze ab, die in Kochsalzlösung getränkt ist, um Austrocknung zu vermeiden. Lassen Sie die Nieren 30 Minuten lang auf der Gaze und überwachen Sie regelmäßig die Anästhesietiefe und Feuchtigkeit der Gaze.
Kurz vor dem Ende der Ischämieperiode decken Sie die Niere auf und halten Sie den Halsted Mosquito Hämostat zur Klemmenentfernung bereit. Öffnen Sie am Ende der Ischämieperiode die Gefäßklemme mit der Hämostat und entfernen Sie die Klemme, um eine Durchblutung der Niere zu ermöglichen. Führen Sie bei Scheinkontrolltieren die nachgewiesene Operation ohne Klemmen des Nierenstiels durch.
Nachdem Sie die Veränderung der Nierenfarbe überprüft haben, bringen Sie die Niere in die Bauchhöhle zurück. Schließen Sie die Bauchmuskulatur in einem Kreuzmuster mit resorbierbarer Naht 5-0. Schließen Sie die Haut in einem horizontalen Matratzenmuster mit resorbierbarer Naht 5-0.
Reinigen Sie die Wunde mit Povidon-Jod-Lösung. Nach der Ischämie-Perfusionsverletzung wurde bei einigen Mäusen eine Verringerung des Körpergewichts mit weniger als 10% des ursprünglichen Körpergewichts beobachtet. Die meisten Mäuse erholten sich jedoch zwischen den Tagen 4 und 7 nach der Operation von ihrem anfänglichen Körpergewicht.
Die Kontrollmäuse zeigten nach der Operation keine Veränderungen des Körpergewichts. Mehrere Veränderungen in der Nierenmorphologie nach der Operation wurden mit Hämatoxylin-Eosin, Periodinsäure-Schiff und Massons Trichrom-Färbung identifiziert. Das Vorhandensein von proteinhaltigem Guss im röhrenförmigen Lumen wurde nach vier Stunden beobachtet.
Eine tubuläre Dilatation wurde nach acht Stunden festgestellt und ein tubulärer Gips sowie zelluläre Nekrose in den medullären Segmenten wurden 16 Stunden nach der IRI-Operation bemerkt. Nach 24 Stunden der Operation wurde eine tubuläre Dilatation beobachtet. Infiltration von Lymphozyten und Makrophagen und vergrößerten Zellkernen wurden nach 48 Stunden nachgewiesen.
Am Tag 4 wurden mitotische tubuläre Zellen beobachtet und am Tag 7 nach der IRI-Operation wurde eine fokale Fibrose festgestellt. Die Nierenrinde der Mäuse während der frühen Reperfusion wurde mittels PAS-Färbung überwacht und eine fortschreitende Abschwächung des Bürstenrandes war sichtbar. Die Bereiche der interstitiellen Fibrose am Tag 7 nach der Operation wurden mit Massons Trichome-Färbung visualisiert.
Ein röhrenförmiges Verletzungs-Scoring-System wurde entwickelt, um den Schaden im Laufe der Zeit zu kategorisieren. Die höchsten tubulären Verletzungswerte wurden zwischen 8 Stunden und 24 Stunden nach der Nieren-IRI erzielt. Einige der kritischsten Schritte sind die korrekte Platzierung der Gefäßklemme im Nierenstamm und die Aufrechterhaltung einer konstanten Körpertemperatur während der Operation.
