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Study of the DNA Damage Checkpoint using <em>Xenopus</em> Egg Extracts

On a daily basis, cells are subjected to a variety of endogenous and environmental insults. To combat these insults, cells have evolved DNA damage ...

University of North Carolina at Charlotte

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Protein-protein interactions play an important role in many virus-encoded functions and in virus-host interactions. While a "classical" yeast two-hybrid system (Y2H) is one of the most common techniques to detect such interactions, it has a number of limitations, including a requirement for the proteins of interest to be relocated to the nucleus. Modified Y2H, such as the Sos recruitment system (SRS), which detect interactions occurring in the cytoplasm rather than the nucleus, allow proteins from viruses replicating in the cytoplasm to be tested in a more natural context. In this study, a SRS was used to detect interactions involving proteins from vesicular stomatitis virus (VSV), a prototypic non-segmented negative strand RNA (NNS) virus. All five full-length VSV proteins, as well as several truncated proteins, were screened against each other. Using the SRS, most interactions demonstrated previously involving VSV phosphoprotein, nucleocapsid (N) and large polymerase proteins were confirmed independently, while difficulties were encountered using the membrane associated matrix and glycoproteins. A human cDNA library was also screened against VSV N protein and one cellular protein, SFRS18, was identified which interacted with N in this context. The system presented can be redesigned easily for studies in other less tractable NNS viruses.

Detecting protein-protein interactions in vesicular stomatitis virus using a cytoplasmic yeast two hybrid system.

Interactions prot&eacute;ines-prot&eacute;ines jouent un r&ocirc;le important dans de nombreuses fonctions de virus-encod&eacute; et virus-h&ocirc;te des interactions. Alors qu&#39;un syst&egrave;me de deux-hybride de levure &laquo; classique &raquo; (Y2H) est l&#39;une des techniques plus courantes pour d&eacute;tecter de telles interactions, il a un certain nombre de lacunes, notamment une exigence pour les prot&eacute;ines d&#39;int&eacute;r&ecirc;t devant &ecirc;tre d&eacute;plac&eacute;s vers le noyau. Y2H modifi&eacute;s, tels que le syst&egrave;me de recrutement de Sos (SRS), qui d&eacute;tectent les interactions qui se produisent dans le cytoplasme, plut&ocirc;t que le noyau, permettent des prot&eacute;ines de virus r&eacute;pliquant dans le cytoplasme &agrave; tester dans un cadre plus naturel. Dans cette &eacute;tude, un SRS a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; pour d&eacute;tecter des interactions impliquant des prot&eacute;ines du virus de la stomatite v&eacute;siculaire (VSV), un prototype non segment&eacute; inter-n&eacute;gatif brin virus ARN (NNS). Toutes les prot&eacute;ines VSV cinq pleine longueur, ainsi que plusieurs prot&eacute;ines tronqu&eacute;es, ont &eacute;t&eacute; projet&eacute;s contre l&#39;autre. En utilisant le SRS, plupart des interactions a d&eacute;montr&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment impliquant phosphoprot&eacute;ine VSV, nucl&eacute;ocapside (N) et prot&eacute;ines de polym&eacute;risation en grand ont &eacute;t&eacute; confirm&eacute;es ind&eacute;pendamment, tandis que les difficult&eacute;s ont &eacute;t&eacute; rencontr&eacute;es &agrave; l&#39;aide de la membrane associ&eacute;e &agrave; la matrice et glycoprot&eacute;ines. Une banque d&#39;ADNc humain a &eacute;t&eacute; &eacute;galement projet&eacute; contre la prot&eacute;ine VSV N et une prot&eacute;ine cellulaire, SFRS18, a &eacute;t&eacute; identifi&eacute;e qui interagissait avec N dans ce contexte. Le syst&egrave;me pr&eacute;sent&eacute; peut facilement &ecirc;tre redessin&eacute; d&#39;&eacute;tudes dans les autres virus NNS moins docile.

D&eacute;tection des interactions prot&eacute;ine-prot&eacute;ine en virus de la stomatite v&eacute;siculeuse &agrave; l&#39;aide d&#39;un syst&egrave;me hybride &agrave; deux levures cytoplasmique.

Protein-Protein Interaktionen spielen eine wichtige Rolle in vielen Virus-codierte Funktionen und Virus-Host Wechselwirkungen. W&auml;hrend eine &quot;klassischen&quot; Hefe-zwei-Hybrid-System (Y2H) einer der am h&auml;ufigsten verwendeten Techniken, um diese Wechselwirkungen zu erkennen ist, hat es eine Reihe von Einschr&auml;nkungen, einschlie&szlig;lich eine Voraussetzung f&uuml;r die Proteine des Interesses zum Kern umgesiedelt werden. Ge&auml;nderte Y2H, wie die Sos-Rekrutierungssystem (SRS), die Interaktionen, die in das Zytoplasma, anstatt den Kern zu erkennen, k&ouml;nnen Proteine vor Viren replizieren im Zytoplasma in einem nat&uuml;rlichen Umfeld getestet werden. In dieser Studie wurde ein SRS verwendet, um Interaktionen mit Proteinen aus vesikul&auml;re Stomatitis-Virus (VSV), eine prototypische nicht segmentiert negativ Strang RNA (NNS) Virus zu erkennen. Alle f&uuml;nf in VSV-Proteine sowie mehrere abgeschnittene Proteine, wurden gegeneinander abgeschirmt. Mit der SRS, die meisten Interaktionen demonstriert zuvor mit VSV Phosphoprotein, Nukleokapsid-(N) und gro&szlig;e Polymerase-Proteine wurden unabh&auml;ngig voneinander best&auml;tigt, w&auml;hrend gro&szlig;e Schwierigkeiten wurden mit die Membran verbunden, Matrix und Glykoproteine. Eine menschliche cDNA-Bibliothek wurde auch gegen VSV N Protein gezeigt und eine zellul&auml;re Protein, SFRS18, wurde identifiziert, die in diesem Zusammenhang mit N interagiert. Das System dargestellt kann leicht f&uuml;r Studien in anderen weniger steuerbar NNS-Viren neu gestaltet werden.

Nachweis von Protein-Protein Interaktionen in vesikul&auml;re Stomatitis-Virus mit einer zytoplasmatischen Hefe-zwei-Hybrid-System.

Interazioni proteina-proteina giocano un ruolo importante in molte funzioni codificati dal virus e virus-ospite interazioni. Mentre un sistema di due-ibrido del lievito &quot;classica&quot; (Y2H) &egrave; una delle tecniche pi&ugrave; comuni per rilevare tali interazioni, ha una serie di limitazioni, tra cui un requisito per le proteine di interesse essere trasferito al nucleo. Y2H modificati, come ad esempio il sistema di reclutamento di Sos (SRS), che consente di rilevare le interazioni che si verificano nel citoplasma piuttosto che il nucleo, consentire le proteine da virus replica nel citoplasma per essere testato in un contesto pi&ugrave; naturale. In questo studio, un SRS &egrave; stato utilizzato per rilevare le interazioni che coinvolgono proteine da virus stomatite vescicolare (VSV), un prototipiche non segmentato negativa filza virus RNA (NNS). Proteine VSV cinque tutti full-length, come pure diverse proteine troncate, sono state proiettate contro l&#39;altro. Utilizzando il SRS, la maggior parte delle interazioni dimostrato in precedenza che coinvolgono fosfoproteina VSV, nucleocapside (N) e proteine della polimerasi grandi sono state confermate in modo indipendente, mentre le difficolt&agrave; sono state incontrate utilizzando la membrana associati matrix e glicoproteine. Una libreria di cDNA umano &egrave; stata proiettata anche contro la proteina VSV N e una proteina cellulare, SFRS18, che ha interagito con N in questo contesto &egrave; stata identificata. Il sistema presentato pu&ograve; essere facilmente riprogettato per studi in altri virus meno trattabili NNS.

Rilevazione di interazioni proteina-proteina in virus stomatite vescicolare utilizzando un sistema ibrido di due lievito citoplasmatica.

&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;-&#x5BBF;&#x4E3B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x518D;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x300C;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;&#x300D;&#x9175;&#x6BCD; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; (&#x9175;&#x6BCD;) &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x624B;&#x6CD5;&#x306E; 1 &#x3064;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x8208;&#x5473;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6838;&#x306B;&#x79FB;&#x8EE2;&#x3059;&#x308B;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x6838;&#x691C;&#x51FA;&#x3001;Sos &#x52DF;&#x96C6;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; (SRS) &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x81EA;&#x7136;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;SRS &#x3092;&#x6C34;&#x75B1;&#x6027;&#x53E3;&#x5185;&#x708E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#xFF08;VSV&#xFF09; &#x30D5;&#x30A9;&#x30EB;&#x30DE;&#x3079;&#x305F;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30CA;&#x30B9;&#x9396; RNA (&#x968E;&#x5C64;&#x578B; NN) &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; 5 &#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9; VSV &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304A;&#x4E92;&#x3044;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x4E0A;&#x6620;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;SRS &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; VSV &#x4EE5;&#x524D;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9; (N) &#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x306B;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x56F0;&#x96E3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x9593;&#x819C;&#x3067;&#x306F;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x304C;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8; cDNA &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA; VSV N &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x3082;&#x4E0A;&#x6620;&#x3055;&#x308C; 1 &#x3064;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;SFRS18&#x3001;N &#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x4EA4;&#x6D41;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x63D0;&#x793A;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x6271;&#x3044;&#x3084;&#x3059;&#x3044; NNS &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7C21;&#x5358;&#x306B;&#x30EA;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30A2;&#x30EB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3067;&#x306E;&#x6C34;&#x75B1;&#x6027;&#x53E3;&#x5185;&#x708E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x691C;&#x51FA;&#x3002;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC5ED;&#xD560; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB9CE;&#xC740; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;-&#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &quot;&#xD074;&#xB798;&#xC2DD;&quot; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (Y2H)&#xC740; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xC220; &#xC911; &#xD558;&#xB098;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xD575; &#xC774;&#xC804; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC0AC;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xB4F1;&#xC758; &#xC81C;&#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC870; &#xB09C; &#xC2E0;&#xD638; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (SRS) &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xD575;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB4F1; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; Y2H &#xB354; &#xC790;&#xC5F0; &#xC2A4;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xD560; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; vesicular &#xAD6C; &#xC5FC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (VSV) prototypic-&#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xAC00;&#xB2E5; RNA (NNS) &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; SRS &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C; &#xBAA8;&#xB4E0; 5 &#xAC1C;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; VSV &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xC11C;&#xB85C; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xC601; &#xD588;&#xB2E4;. SRS&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; VSV phosphoprotein, nucleocapsid (N) &#xC2DC;&#xC5F0; &#xBC0F; &#xD070; &#xD6A8;&#xC18C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;, &#xB9C9; &#xAD00;&#xB828; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xBC0F; glycoproteins&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBB38;&#xC81C;&#xAC00; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; cDNA &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; VSV N &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xC601; &#xBC0F; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, SFRS18, n&#xC774; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xB2E4;&#xB978; &#xB35C; &#xC628;&#xC21C;&#xD55C; NNS &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC27D;&#xAC8C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC124;&#xACC4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; vesicular &#xAD6C; &#xC5FC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;.

Interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na juegan un papel importante en muchas funciones de virus-codificado y en virus-hu&eacute;sped interacciones. Mientras que un sistema de dos h&iacute;bridos de levadura &quot;cl&aacute;sica&quot; (Y2H) es una de las t&eacute;cnicas m&aacute;s comunes para detectar tales interacciones, tiene una serie de limitaciones, incluyendo un requisito para las prote&iacute;nas de inter&eacute;s a ser reasentados en el n&uacute;cleo. Y2H modificado, como el sistema de reclutamiento de Sos (SRS), que detecta las interacciones que ocurren en el citoplasma m&aacute;s el n&uacute;cleo, permiten a las prote&iacute;nas de virus que se replican en el citoplasma para ser probado en un contexto m&aacute;s natural. En este estudio, se utiliz&oacute; un SRS para detectar interacciones con las prote&iacute;nas del virus de la estomatitis vesicular (VSV), un filamento negativo no segmentado un virus ARN (NNS). Se revisaron las cinco prote&iacute;nas VSV integrales, as&iacute; como varias prote&iacute;nas truncadas, cara a cara. Usando el SRS, mayor&iacute;a de las interacciones hab&iacute;an demostrado previamente que fosfoprote&iacute;na VSV, nucleoc&aacute;pside (N) y prote&iacute;nas grandes polimerasa fueron confirmadas independientemente, mientras eran dificultades usando la membrana asociada matriz y glicoprote&iacute;nas. Una biblioteca de cDNA humano tambi&eacute;n se proyect&oacute; contra la prote&iacute;na VSV N y una prote&iacute;na celular, SFRS18, fue identificada que interactuaron con N en este contexto. El sistema presentado puede ser redise&ntilde;ado f&aacute;cilmente para estudios en otros virus NNS menos manejables.

Detecci&oacute;n de interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na en virus de la estomatitis vesicular utilizando un sistema h&iacute;brido dos de levadura citopl&aacute;smico.

Darla DeStephanis

Department of Biology

University of North Carolina at Charlotte

Study of the DNA Damage Checkpoint using Xenopus Egg Extracts

Darla DeStephanis

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University of North Carolina at Charlotte

Study of the DNA Damage Checkpoint using Xenopus Egg Extracts

Department of Biology