Aspectos técnicos de la aortocava Fístula Ratón

Resumen

El objetivo es producir una fístula arteriovenosa que es simple y reproducible. Este método no utiliza suturas o adhesivos pegamento. Por lo tanto las muestras se pueden utilizar con la menor cantidad de materiales extraños para el análisis.

Resumen

Se discuten los aspectos técnicos de la creación de una fístula arteriovenosa en el ratón. Bajo anestesia general, se hizo una incisión abdominal, y la aorta y la vena cava inferior (IVC) están expuestos. La aorta infrarrenal proximal y la aorta distal se diseccionan para la colocación de la abrazadera y la punción de aguja, respectivamente. Se presta especial atención para evitar la disección entre la aorta y la vena cava inferior. Después de sujetar la aorta, se utiliza una aguja de 25 G para la punción ambas paredes de la aorta en la vena cava inferior. El tejido conectivo circundante se utiliza para la compresión hemostático. Creación y el éxito de la FAV se mostrará el flujo de sangre arterial pulsátil en la vena cava inferior. La confirmación adicional de FAV éxito se puede lograr mediante ecografía Doppler post-operatorio.

Introducción

La opción más común elegido para la terapia de reemplazo renal en pacientes con enfermedad renal en fase terminal es la hemodiálisis. Acceso para la hemodiálisis se realiza mediante una fístula arteriovenosa (FAV), injerto arteriovenoso o la colocación del catéter temporal. Aunque AVF son el modo preferido de acceso, AVF todavía están lejos de ser perfecto. Un año de primaria las tasas de permeabilidad AVF son sólo 60 a 65%, con muchas fallas debido a la hiperplasia neointimal. La biología molecular y la fisiología de la formación de AVF normal y la formación de mala adaptación sigue siendo mal caracterizado. Como tal, es mucho más que ganar para mejorar los resultados FAV con la ganancia de acompañamiento en la comprensión de la regulación de la formación de fístulas. ^1-3

La exposición de una vena para el flujo arterial se estudia comúnmente en el contexto de los injertos de vena que son modelos directos de derivación quirúrgica. ^{4, 5} Aunque los injertos de vena y aVF similar exponen una vena para un entorno arterial, hay varios di críticoferencias entre ellos. En primer lugar, la resistencia de la cama escurrimiento distal es mucho más baja en FAV, como la FAV drena a la aurícula derecha, mientras que el injerto de la vena drena a los enfermos a menudo pequeñas arterias distales, lo que resulta en un aumento del flujo sanguíneo y la tensión de cizallamiento en la FAV. En segundo lugar, la sangre venosa en la extremidad de la FAV puede ser una mezcla de sangre venosa y arterial que conduce a una menor oxigenación en comparación con el contenido puramente arterial en el injerto de vena. En tercer lugar, la vena de la FAV no se quita de su cama, lo que lleva a la preservación de su vaso venorum y la inervación nerviosa, en comparación con la transposición completa de la vena del injerto en el lecho arterial. Por último, el número de anastomosis es por lo general dos en injertos de la vena mientras que una FAV típicamente tiene solamente una. En este estudio, se introduce un modelo de ratón de la fístula aorto-cava que se puede utilizar para el estudio de FAV.

Protocolo

1. Procedimientos de anestesia y pre-operatorio

1. La inducción de la anestesia general
   Se obtiene la aprobación por el Cuidado de Animales institucional apropiado y el empleo. C57/black ratones macho, de 10 semanas, se anestesian. Entregar 4% de isoflurano con 0,8 l / min de oxígeno a una caja de plexiglás a través de un vaporizador de isoflurano y colocar el ratón en el interior. Alternativamente, si se prefiere por el cirujano, la anestesia intraperitoneal se puede utilizar.
2. Preservar la anestesia
   Después de la confirmación de la anestesia por la falta de reacción ante pizca dedo del pie, el ratón se pone en la mesa de operaciones en posición supina con una máscara de silicona. El isoflurano se disminuyó a 2% para mantener el nivel de anestesia apropiada.
3. Depilación
   Pelo ventral se retira desde el cuello a la parte inferior del abdomen utilizando un removedor de pelo. Removedor de pelo se prefiere debido a que el cabello que se deja el uso de una máquina de afeitar puede interferir con el ultrasonido Doppler.

2. Ultrasoun preoperatoriad

1. Objetivos de la ecografía
   Ecografía Doppler se lleva a cabo antes de la cirugía FAV con el fin de registrar los resultados de nivel de base que se pueden comparar con los resultados postoperatorios para ver cambios anatómicos y fisiológicos.
2. Puntos de observación
   La vena yugular, supra e infra-renal vena cava inferior (IVC), y la aorta abdominal se examinan usando tanto pulso Doppler y modo B..
3. Mediciones
   Usando el modo B, diámetro de cada vasculatura se mide. Además, la velocidad máxima (velocidad sistólica máxima en las arterias) y formas de onda se registran en cada uno de los puntos de medición descritos anteriormente.

3. Procedimientos Operativos

1. Ratón Preparación
   Prepare el sitio de la incisión con un antiséptico tópico y seguir una técnica aséptica apropiada durante la cirugía, incluyendo el uso de un paño quirúrgico, guantes e instrumentos estériles, etc
2. Laparotomía
   Incisión de línea media abdominal se hace fROM borde inferior del hígado hasta justo por encima del pubis.
3. La exposición de la aorta y la vena cava inferior.
   Un retractor se inserta y todos los intestinos se sacó de la cavidad abdominal en el lado derecho y se mantuvo envuelto en una gasa empapada con una solución salina. Disección de la membrana que conecta el retroperitoneo y la parte inferior del colon para tener una vista completa de la aorta y la vena cava inferior. Aplique presión sobre la vejiga si se dilata y se mete en camino.
4. La exposición del sitio de la punción
   El sitio de punción será de entre media y tres cuartos de la distancia de la vena renal izquierda a la bifurcación aórtica. (Figura 1) diseccionar el margen izquierdo de la aorta de manera que pueda ser perforado. Tenga en cuenta que la aorta se coloca sobre 45 grados detrás de la vena cava inferior y debe ser diseccionada posterior, además de la izquierda. (Figura 2) El punto más importante de esta cirugía no es para diseccionar entre la aorta y la vena cava inferior. Mantener lejos de ellos.
5. La exposición del sitio de abrazadera de la AORta
   Diseccionar la aorta infrarrenal de los tejidos circundantes. Tenga cuidado de no dañar el IVC en las venas renales derecha e izquierda con sus afluentes por la derecha.
6. De sujeción de la aorta
   Sujete la aorta proximal mediante la aplicación de clips de microcirugía.
7. La rotación de la aorta
   Por agarrar el tejido conectivo que rodea la aorta, girar la aorta de manera que la punción se puede hacer de un lado ligeramente dorsal de la aorta (Figura 2).
8. La punción de la aorta a través de IVC
   Mantener la aorta en una posición girada, la punción de la aorta a través de la VCI para el uso de una aguja de 25 G. (Figura 2) Si tiene éxito, la aguja puede ser visto a través de la delgada pared IVC.
9. Hemostasia
   Al tirar de los tejidos retroperitoneales, incluyendo los músculos, envolver el sitio de la punción de la aorta. No comprima la aorta contra la VCI, ya que se puede coagular la FAV (Figura 3).
10. De-sujeción de la aorta
    Después de la confirmaciónde la hemostasia primaria, de-sujetar la aorta. Sangrado adicional puede ocurrir pero puede ser detenido con una mayor compresión se ha descrito anteriormente. Al de-sujeción, la sangre arterial se puede ver que desemboca en la vena cava inferior en lugar del flujo sanguíneo venoso oscuro.
11. Clausura del abdomen
    Volver al intestino a su posición natural y cerrar el abdomen.

4. Procedimientos postoperatorios

1. El cuidado post-operatorio
   Tras el cierre del abdomen, isoflurano se detiene. Cuidados postoperatorios incluyendo la analgesia y cuidado de la herida se aplica de acuerdo con las instrucciones recomendadas por el Cuidado de Animales institucional y el empleo. Para la analgesia usamos buprenorfina a 0,1 mg / kg intrasmuscularly cada 12 horas durante 24 horas después de los procedimientos quirúrgicos.
2. Ecografía postoperatoria
   En el primer día después de la operación, la ecografía Doppler se lleva a cabo para confirmar la FAV. Además, otras variables se miden para comprobar los cambios de pre-operatoriovalores.

Resultados

Después de la práctica, la supervivencia en el primer día post-operatorio es típicamente más del 95%; en el día 7 post-operatorio, la supervivencia fue 91,3% Figuras 1 y 2 muestran el sitio de punción ideales en vistas coronal y transversal;. Colocación de la punción El sitio es fundamental para obtener una buena supervivencia sin hemorragia excesiva. Muertes intraoperatorias y muertes postoperatorias tempranas se deben a hemorragias normalmente. Esto tiende a ocurrir con una disección excesiv...

Discusión

Hay varios informes que han descrito FAV en ratas, incluyendo FAV femoral, ^{6, 7} carótida para yugular FAV ⁸ y aortocava FAV. ^{9, 10} La rata es varias veces más grande que el ratón, lo que facilita la cirugía en comparación con la rata el ratón. Sin embargo, con el fin de tomar ventaja de las cepas y variantes genéticos de ratón el procedimiento debe ser extendida para incluir modelos de ratón. Varios informes publicados anteriormente presentó el modelo de AVF en ratones, pero es...

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Vevo 770 ultrasound machine	Visualsonics	20-60 Mhz scan head; RMV-704
Vascular clamp	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5424
Clamp applying forceps	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5410
25 Gauge Needle	Becton Dickinson	BD PrecisionGlide Needle 25G x 7/8 #305124