Aspectos técnicos da artocava Fístula Rato

Resumo

O objectivo é o de produzir uma fístula artério-venosa que é simples e reprodutível. Este método não utiliza suturas ou cola adesiva. Por conseguinte, as amostras podem ser usadas, com a menor quantidade de materiais estranhos para análise.

Resumo

Aspectos técnicos da criação de uma fístula arteriovenosa no rato são discutidos. Sob anestesia geral, uma incisão abdominal é feita, e a aorta ea veia cava inferior (IVC) são expostos. A aorta infra-renal da aorta proximal e distal são dissecados para a colocação de grampo e punção com agulha, respectivamente. É dada especial atenção para evitar a dissecção entre a aorta ea veia cava inferior. Depois de prender a aorta, uma agulha 25 G é usada para perfurar ambas as paredes da aorta para a VCI. O tecido conjuntivo circundante é utilizado para compressão hemostática. Criação bem sucedida da FAV vai mostrar o fluxo de sangue arterial pulsátil no IVC. A confirmação adicional da FAV bem sucedido pode ser conseguido através de ultra-som Doppler de pós-operatório.

Introdução

A opção mais comum escolhido para a terapia de substituição renal em pacientes com doença renal terminal é a hemodiálise. Acesso para hemodiálise é realizada por fístula arteriovenosa (FAV), enxerto artério-venosa, ou a colocação do cateter temporário. Embora AVF são o modo preferido de acesso, AVF ainda estão longe de ser perfeito. Taxas de permeabilidade de um ano primário FAV são apenas 60-65%, com muitas falhas devido a hiperplasia neointimal. A biologia molecular ea fisiologia da formação AVF normal e formação inadequadas permanece mal caracterizado. Como tal, muito se ganha na melhoria dos resultados FAV com o ganho que o acompanha na compreensão da regulação da formação de fístula ^1-3.

A exposição de uma veia com o fluxo arterial é vulgarmente estudada no contexto de enxertos de veias, que são modelos directos de desvio cirúrgico. ^{4, 5} Embora os enxertos de veia e AVF similarmente expor uma veia para um ambiente arterial, há vários di críticorenças entre eles. Primeiro, a resistência do leito de escoamento distal é muito mais baixa no FAV, como a FAV drena para o átrio direito, enquanto que o enxerto de veia drenos para os doentes, muitas vezes pequenas artérias distais, o que resulta num aumento do fluxo sanguíneo e tensão de cisalhamento na FAV. Em segundo lugar, o sangue venoso do membro da FAV pode ser uma mistura de sangue venoso e arterial que conduz a uma menor oxigenação em comparação com o conteúdo puramente arteriais no enxerto de veia. Em terceiro lugar, a veia da FAV não é removida do seu leito, levando à conservação do seu vaso venorum inervação e nervosas, em comparação com a transposição completa do enxerto de veia para o leito arterial. Por último, o número de anastomoses é geralmente de dois em enxertos de veias Considerando uma FAV tipicamente tem apenas um. No presente estudo, nós apresentamos um modelo de rato com fístula aorto-cava que pode ser usado para o estudo da FAV.

Protocolo

1. Os procedimentos de anestesia e pré-operatória

1. A indução da anestesia geral
   Aprovação pelo Animal Care Institucional e Comitê de uso apropriado é obtido. C57/black camundongos machos, com idade de 10 semanas são anestesiados. Entregar 4% isoflurano com 0,8 L / min de oxigênio a uma caixa de acrílico através de um vaporizador isoflurano e coloque o mouse para dentro. Alternativamente, se preferido pelo cirurgião, a anestesia intraperitoneal pode ser usada.
2. Preservar a anestesia
   Após a confirmação da anestesia pela falta de reação a pitada dedo do pé, o mouse é colocado sobre a mesa de operação em decúbito dorsal com uma máscara de silicone. Isoflurano é reduzida para 2%, para manter o nível de anestesia adequada.
3. Depilação
   Ventral cabelo é removido do pescoço para baixo-ventre usando um removedor de cabelo. Removedor de cabelo é preferido porque o cabelo que fica usando uma máquina de barbear pode interferir com o ultra-som Doppler.

2. Ultrasoun pré-operatóriod

1. Objectivos do ultrassom
   Exame de ultra-som Doppler é realizado antes da cirurgia AVF, de forma a registrar os resultados de nível básico que podem ser comparados com os resultados pós-operatórios para ver as mudanças anatômicas e fisiológicas.
2. Os pontos de observação
   A veia jugular, supra e infra-renal, veia cava inferior (IVC), e da aorta abdominal são examinados utilizando tanto pulso Doppler e em modo-B.
3. Medidas
   Usando o modo B, o diâmetro de cada vasculatura é medido. Além disso, a velocidade máxima (pico de velocidade sistólica em artérias) e as formas de onda são registados em cada um dos pontos de medição descritos acima.

3. Procedimentos Operativos

1. Rato Preparação
   Prepare o local da incisão com um anti-séptico tópico e continuar a técnica asséptica apropriada durante a cirurgia, incluindo o uso de uma cortina cirúrgica, luvas e instrumentos esterilizados, etc
2. Laparotomia
   Incisão na linha média abdominal é feita from borda inferior do fígado para um pouco acima do púbis.
3. A exposição da aorta e veia cava inferior.
   Um afastador é inserido e todos os intestinos são puxados para fora da cavidade abdominal para o lado direito e mantida envolta em gaze embebida em soro fisiológico. Dissecar a membrana que liga o retroperitônio e inferior do cólon para visualização completa da aorta e veia cava inferior. Aplicar pressão sobre a bexiga, se é dilatado e fica no caminho.
4. A exposição do local de punção
   O local da punção será entre meia a três quartos da distância da veia renal esquerda para bifurcação aórtica. (Figura 1) Dissecar a margem esquerda da aorta, de modo que possa ser perfurado. Tenha em atenção que a aorta é posicionado a cerca de 45 graus para trás da VCI e deve ser dissecado posteriormente em adição à esquerda. (Figura 2) O ponto mais importante desta cirurgia não é dissecar entre a aorta ea veia cava inferior. Manter longe deles.
5. A exposição do local de fixação da aorta
   Dissecar a aorta infrarenal de tecidos circundantes. Tenha cuidado para não ferir o IVC nas veias renais esquerda e da esquerda com seus afluentes à direita.
6. Clampeamento da aorta
   Prenda a aorta proximal, aplicando clipes de microcirurgia.
7. A rotação da aorta
   Ao agarrar o tecido conjuntivo em torno da aorta, a aorta girar de modo que o punção pode ser feita a partir do lado dorsal ligeiramente da aorta (Figura 2).
8. Punção da aorta até IVC
   Mantendo a aorta numa posição rodada, por meio de punção na aorta aos VCI usando uma agulha 25 G. (Figura 2) Se for bem sucedido, a agulha pode ser visto através da fina parede da VCI.
9. Hemostasia
   Ao puxar os tecidos retroperitoneais, incluindo os músculos, enrole o local da punção da aorta. Não comprimir a aorta contra a CIV, como for o coágulo FAV (Figura 3).
10. De-pinçamento da aorta
    Depois da confirmaçãoda hemostasia primária, de-clamp da aorta. Sangramento adicional pode ocorrer, mas ele pode ser interrompido com mais compressão descrito acima. Ao de-aperto, o sangue arterial pode ser visto fluindo para o IVC, em vez do fluxo sanguíneo venoso escuro.
11. Encerramento do abdômen
    Retorne as entranhas em sua posição natural e fechar o abdômen.

4. Os procedimentos pós-operatórios

1. Cuidados pós-operatórios
   Após o fechamento do abdômen, isoflurano está parado. Cuidados pós-operatórios, incluindo analgesia e tratamento de feridas é aplicada de acordo com as instruções recomendadas pelo Animal Care Institucional e Comitê de uso. Para analgesia usamos buprenorfina a 0,1 mg / kg intrasmuscularly cada 12 horas durante 24 horas após os procedimentos cirúrgicos.
2. Ultra-som pós-operatória
   No primeiro dia após a operação, de ultra-som Doppler é realizada para confirmar a FAV. Além disso, outras variáveis ​​são medidos para verificar as alterações do pré-operatóriavalores.

Resultados

Depois do treino, a sobrevivência, no primeiro dia pós-operatório é normalmente superior a 95%, no dia pós-operatório 7, a sobrevivência foi de 91,3% As figuras 1 e 2 mostram o local de punção ideal em cortes coronais e transversal,. Colocação do punção local é fundamental para a obtenção de boa sobrevida sem hemorragia excessiva. Óbitos intra-operatórias e as mortes pós-operatórias precoces são normalmente devido à hemorragia. Isto tende a ocorrer com dissecção excessiva entre a...

Discussão

Há vários relatos que descrevem AVF em ratos, incluindo AVF ^{femoral, 6, 7} carótida para jugular AVF ⁸ e aorto-cava AVF. ^{9, 10} O rato é várias vezes maior do que o mouse, permitindo que a cirurgia mais fácil em comparação com o rato o mouse. No entanto, a fim de tirar vantagem das estirpes e variantes genéticas do rato, o processo deverá ser alargado para incluir os modelos de ratinho. Vários relatórios publicados anteriormente introduziu o modelo AVF em ratos, mas esses relat...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Vevo 770 ultrasound machine	Visualsonics	20-60 Mhz scan head; RMV-704
Vascular clamp	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5424
Clamp applying forceps	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5410
25 Gauge Needle	Becton Dickinson	BD PrecisionGlide Needle 25G x 7/8 #305124