Aspects techniques de la fistule aorto-cave de la souris

Résumé

L'objectif est de produire une fistule artério-veineuse qui est simple et reproductible. Cette méthode n'utilise pas de sutures adhésives ou de la colle. Par conséquent, les échantillons peuvent être utilisés avec la moindre quantité de matériaux étrangers à l'analyse.

Résumé

Les aspects techniques de la création d'une fistule artério-veineuse chez la souris sont discutées. Sous anesthésie générale, une incision abdominale est faite, et l'aorte et la veine cave inférieure (VCI) sont exposés. L'aorte sous-rénale proximale et distale de l'aorte sont disséqués pour le placement de serrage et ponction à l'aiguille, respectivement. Une attention particulière est accordée à éviter la dissection entre l'aorte et la veine cave inférieure. Après serrage de l'aorte, une aiguille 25 est utilisé pour perforer les deux parois de l'aorte dans la veine cave inférieure. Le tissu conjonctif environnant est utilisée pour la compression hémostatique. La mise sur pied de l'AVF montrera le flux sanguin artériel pulsatile dans la VCI. Une autre confirmation de AVF succès peut être atteint en post-opératoire échographie Doppler.

Introduction

L'option la plus commune choisie pour la thérapie de remplacement rénal chez les patients atteints d'insuffisance rénale au stade ultime est l'hémodialyse. Accès pour hémodialyse est effectuée par une fistule artério-veineuse (FAV), greffe artérioveineuse ou d'un cathéter temporaire. Bien AVF sont le mode d'accès privilégié, AVF sont encore loin d'être parfait. Les taux de perméabilité primaire AVF d'un an ne sont que 60-65%, avec de nombreux échecs dus à l'hyperplasie intimale. La biologie moléculaire et la physiologie de la formation des AVF normale et la formation inadaptée restent mal caractérisés. En tant que tel, il ya beaucoup à gagner à l'amélioration des résultats AVF avec le gain d'accompagnement dans la compréhension de la régulation de la formation de la fistule. ^1-3

L'exposition d'une veine de flux artériel est couramment étudiée dans le contexte des greffes de veine qui sont des modèles directs de pontage chirurgical. ^{4, 5} Bien que des greffons veineux et AVF exposent une veine similaire à un environnement artérielle, il ya plusieurs di critiquefferences entre eux. Tout d'abord, la résistance du lit de ruissellement distale est beaucoup plus faible dans les AVF, comme l'AVF draine vers l'oreillette droite alors que la greffe de veine draine les petites artères distales souvent malades, ce qui augmente le flux sanguin et la contrainte de cisaillement dans l'AVF. D'autre part, le sang dans le membre veineux de la FAV peut être un mélange de sang veineux et artériel conduisant à une oxygénation plus faible par rapport à la teneur purement artérielle dans la greffe de veine. Troisièmement, la veine de l'AVF n'est pas sorti de son lit, ce qui conduit à la préservation de son vaso venorum et innervation nerveux, par rapport à la transposition complète de la greffe de veine dans le lit artériel. Enfin, le nombre d'anastomoses est habituellement de deux à greffons veineux tandis qu'une AVF a généralement qu'une seule. Dans cette étude, nous présentons un modèle murin de la fistule aorto-cave qui peut être utilisé pour l'étude de l'AVF.

Protocole

1. Procédures d'anesthésie et pré-opératoire

1. Induction de l'anesthésie générale
   Approbation par l'Institutional Animal Care appropriée et le Comité d'utilisation est obtenue. Souris C57/black hommes, âgés de 10 semaines sont anesthésiés. Livrer 4% d'isoflurane à 0,8 L / min d'oxygène à une boîte en plexiglas via un vaporisateur isoflurane et placez la souris à l'intérieur. Alternativement, si l'on préfère par le chirurgien, anesthésie intrapéritonéale peut être utilisé.
2. Préserver l'anesthésie
   Après confirmation de l'anesthésie par le manque de réaction de pincement de l'orteil, la souris est placé sur la table d'opération en décubitus dorsal avec un masque de silicone. L'isoflurane est réduite à 2% pour maintenir le niveau d'anesthésie appropriée.
3. Épilation
   Cheveux ventrale est enlevé de la nuque au bas de l'abdomen en utilisant un épilateur. solvant de cheveux est préférable parce que les cheveux qui est laissé à l'aide d'un rasoir peut interférer avec l'échographie Doppler.

2. Ultrason préopératoired

1. Objectifs de l'échographie
   Échographie Doppler est effectué avant la chirurgie AVF afin d'enregistrer les résultats de niveau de base qui peuvent être comparés avec les résultats post-opératoires à voir des changements anatomiques et physiologiques.
2. Points d'observation
   La veine jugulaire, supra et infra-rénale veine cave inférieure (VCI), et de l'aorte abdominale sont examinés en utilisant deux impulsions Doppler et B-mode.
3. Mesures
   En utilisant le mode B, le diamètre de chaque système vasculaire est mesurée. En outre, la vitesse maximale (pic de vélocité systolique dans les artères) et des formes d'onde sont enregistrées dans chacun des points de mesure décrits ci-dessus.

3. Procédures opérationnelles

1. Préparation de la souris
   Préparez le site d'incision avec un antiseptique topique et continuer technique aseptique appropriée au cours de la chirurgie, y compris l'aide d'un drap chirurgical, gants et des instruments stériles, etc
2. Laparotomie
   Incision abdominale médiane est faite fROM bord inférieur du foie à juste au-dessus du pubis.
3. L'exposition de l'aorte et IVC.
   Un enrouleur est insérée et toutes les entrailles sont tirés hors de la cavité abdominale pour le côté droit et maintenu enveloppé dans de la gaze imbibée de sérum physiologique. Disséquer la membrane qui relie le rétropéritoine et inférieure du côlon pour obtenir la vue de l'aorte et IVC. Appliquer une pression sur la vessie si elle est dilatée et se met en route.
4. L'exposition du point de ponction
   site de ponction sera entre demi à trois quarts de la distance de la veine rénale gauche à la bifurcation aortique. (Figure 1) disséquer la marge gauche de l'aorte de sorte qu'il peut être perforé. Gardez à l'esprit que l'aorte est positionné sur 45 degrés derrière la VCI et il doit être disséqué arrière en plus vers la gauche. (Figure 2) Le point le plus important de cette chirurgie n'est pas à disséquer entre l'aorte et l'IVC. Gardez loin d'eux.
5. Exposition du site de fixation de l'AORTA
   Disséquer l'aorte sous-rénale à partir des tissus environnants. Attention à ne pas blesser l'IVC sur les veines rénales droite et gauche avec ses affluents sur la droite.
6. Serrage de l'aorte
   Fixer l'aorte proximale en appliquant clips de microchirurgie.
7. Rotation de l'aorte
   En saisissant le tissu conjonctif qui entoure l'aorte, l'aorte tourner de sorte que la perforation peut se faire d'un côté légèrement dorsale de l'aorte (figure 2).
8. Ponction de l'aorte à travers IVC
   Garder l'aorte dans une position de rotation, à la perforation de l'aorte par le biais d'IVC en utilisant une aiguille de calibre 25. (Figure 2) En cas de réussite, l'aiguille peut être vu à travers la paroi mince IVC.
9. Hémostase
   En tirant les tissus rétropéritonéaux, y compris les muscles, enveloppez le site de ponction de l'aorte. Ne pas comprimer l'aorte contre l'IVC, car il peut coaguler l'AVF (Figure 3).
10. De-serrage de l'aorte
    Après confirmationde l'hémostase primaire, de-serrer l'aorte. Saignement supplémentaire peut se produire, mais il peut être arrêté avec une compression supplémentaire décrit ci-dessus. Lors de-serrage, le sang artériel est visible circulant dans la veine cave inférieure à la place de l'écoulement de sang veineux foncé.
11. Clôture de l'abdomen
    Retourner les entrailles dans sa position naturelle et fermer l'abdomen.

4. Procédures post-opératoires

1. Les soins post-opératoires
   Après fermeture de l'abdomen, de l'isoflurane est arrêté. Les soins post-opératoires, notamment l'analgésie et le soin des plaies est appliquée en conformité avec les instructions recommandées par le soin des animaux et du Comité institutionnel d'utilisation. Pour l'analgésie, nous utilisons la buprénorphine à 0,1 mg / kg toutes les intrasmuscularly h 12 à 24 h suivant les procédures chirurgicales.
2. Échographie post-opératoire
   Le premier jour après l'opération, l'échographie Doppler est effectuée pour confirmer l'AVF. En outre, d'autres variables sont mesurées pour vérifier les changements de pré-opératoirevaleurs.

Résultats

Après la pratique, la survie, le premier jour post-opératoire est généralement supérieur à 95%; au jour post-opératoire 7, la survie était de 91,3% figures 1 et 2 montrent le site de ponction idéal en vue coronale et transversale;. Placement de la ponction site est essentiel pour obtenir une bonne survie sans hémorragie excessive. Décès intra-opératoires et les décès post-opératoires précoces sont généralement dues à une hémorragie. Ceci tend à se produire avec dissection excessive...

Discussion

Il ya plusieurs rapports qui ont décrit AVF chez les rats, y compris AVF ^{fémorale, 6, 7} carotide à jugulaire AVF ⁸ et aorto-cave AVF. ^{9, 10} Le rat est plusieurs fois plus grande que la souris, permettant de faciliter la chirurgie chez le rat par rapport à la souris. Néanmoins, afin de profiter des souches et des variantes génétiques de souris la procédure doit être étendue pour inclure des modèles de souris. Plusieurs rapports publiés précédemment introduit le modèle AVF c...

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Vevo 770 ultrasound machine	Visualsonics	20-60 Mhz scan head; RMV-704
Vascular clamp	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5424
Clamp applying forceps	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5410
25 Gauge Needle	Becton Dickinson	BD PrecisionGlide Needle 25G x 7/8 #305124