Implementación de un sistema coherente anti-Stokes Raman Scattering (CARS) en un Ti: Zafiro y OPO láser basado en Laser Standard Microscopio de Barrido

Vasyl Mytskaniuk; Fabrice Bardin; Hassan Boukhaddaoui; Herve Rigneault; Nicolas Tricaud

doi:10.3791/54262

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Implementación de un sistema coherente anti-Stokes Raman Scattering (CARS) en un Ti: Zafiro y OPO láser basado en Laser Standard Microscopio de Barrido

DOI:

10.3791/54262

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July 17th, 2016

Vasyl Mytskaniuk*¹, Fabrice Bardin*²^,³, Hassan Boukhaddaoui¹^,⁵, Herve Rigneault⁴, Nicolas Tricaud¹

¹INSERM U1051, Institut des Neurosciences de Montpellier (INM), Université de Montpellier, ²Université de Nîmes, ³CNRS, IES, UMR 5214, ⁴Aix-Marseille Université, CNRS, École Centrale Marseille, Institut Fresnel, UMR 7249, ⁵Montpellier RIO Imaging (MRI)

* Estos autores han contribuido por igual

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Resumen

Coherente dispersión anti-Stokes Raman (CARS) microscopía basada en la vibración inherente de la molécula se adhiere permite imágenes de células vivas químicamente selectivo libre de etiquetas. Este trabajo presenta la aplicación de una técnica de microscopía complementaria en un microscopio de barrido láser estándar multifotónica basado en un femtosegundo Ti: zafiro láser y un láser de OPO.

Resumen

microscopios de barrido láser de femtosegundo que combinan una Ti: zafiro láser y un oscilador paramétrico óptico (OPO) para duplicar la línea de láser se han hecho disponibles para los biólogos. Estos sistemas están diseñados principalmente para múltiples canales de dos fotones microscopía de fluorescencia. Sin embargo, sin ninguna modificación, microscopía óptica no lineal complementaria tales como la generación de segundo armónico (SHG) o tercera generación armónica (THG) también se puede realizar con esta puesta a punto, permitiendo de imágenes libre de etiquetas de moléculas estructuradas o medio acuoso interfaces de lípidos. Estas técnicas son muy adecuadas para la observación in vivo, pero son limitados en la especificidad química. Químicamente imagen selectiva se puede obtener de las señales de vibración inherentes en base a la dispersión Raman. Confocal Raman microscopía proporciona una resolución espacial en 3D, pero requiere alta potencia media y de largo tiempo de adquisición. Para superar estas dificultades, los recientes avances en la tecnología láser han permitido el desarrollo de la microscopía óptica no lineal vibratorio, en particular, coherente anti-Stokes dispersión Raman (CARS). Por lo tanto, la microscopía CARS ha surgido como una poderosa herramienta para imágenes de células biológicas y en directo, por los lípidos químicamente mapeo (a través de la vibración de estiramiento CH), agua (a través de las vibraciones de estiramiento OH), proteínas o ADN. En este trabajo se describe la aplicación de la técnica de los coches en un microscopio de barrido láser estándar multifotónica OPO acoplado. Se basa en la sincronización en tiempo de las dos líneas de láser mediante el ajuste de la longitud de uno de la trayectoria del haz láser. Presentamos una implementación paso a paso de esta técnica en un sistema múltiple de fotones existentes. Una base de fondo en la óptica experimental es servicial y el sistema que se presenta no requiere costosos equipos suplementarios. También ilustramos CARS por imágenes obtenidas en las vainas de mielina del nervio ciático de roedores, y se muestra que esta imagen se puede realizar simultáneamente con otra óptica no lineal de imágenes, tal como t normawo-fotón técnica de fluorescencia y la generación de segundo armónico.

Introducción

La microscopía óptica se ha convertido en una técnica importante para la visualización no destructiva de los procesos dinámicos en los sistemas biológicos vivos con una resolución subcelular. Microscopía de fluorescencia es actualmente el contraste de imagen más popular usado en células vivas debido a su alta especificidad y sensibilidad ^1. Una gran gama de sondas fluorescentes ha surgido (colorantes exógenos, las proteínas codificadas genéticamente, nanopartículas de semiconductores). Varios muestra de iluminación técnicas basadas en fluorescentes han florecido (como la microscopía confocal o de dos fotones) para realizar las imágenes en 3D y para reducir....