Comience fijando el tejido DRG diseccionado de la médula espinal del ratón anestesiado en formaldehído al 4% durante tres horas a temperatura ambiente. A continuación, incubar el tejido en sacarosa al 30% en PBS a cuatro grados centígrados durante la noche. A continuación, prepare la OCT base agregando el compuesto OCT y cubriendo la superficie superior del bloque de aluminio.
Congele el bloque de aluminio cubierto a menos 20 grados centígrados durante cinco a 10 minutos. Corte la parte superior de la OCT con un grosor de 30 micrómetros con el criostato, hasta que su superficie sea tan plana como la OCT base. Marque la parte inferior de la OCT base en la posición 6:00, antes de quitar el bloque de aluminio del criostato.
Para realizar la inclusión OCT de los GRD, seque el tejido de los GRD colocándolo sobre una placa de Petri seca y moviéndolo de un lugar a otro dos o tres veces con las pinzas secas. A continuación, coloque el DRG seco sobre la base OCT en la posición 12:00, utilizando unas pinzas secas. Asegúrese de mantener una distancia de al menos cinco milímetros entre el borde superior del GRD y el borde superior de la OCT base, con la parte dorsal en la posición 12:00 y la parte ventral en la posición 6:00.
A continuación, agregue OCT en forma redonda u ovalada para incrustar todo el tejido DRG con el DRG en el centro. Congele la muestra de OCT y DRG de cobertura a menos 20 grados centígrados durante cinco minutos. Una vez hecho esto, corte la parte superior de la tapa OCT con un grosor de 30 micrómetros hasta que el DRG sea visible.