Comience transfiriendo al animal anestesiado al marco estereotáxico, y luego asegure la cabeza en el cono de la nariz y las barras de las orejas. Coloque las sondas para medir el pulso, la saturación de oxígeno del pulso, la presión arterial y la temperatura del animal. Aplícate un ungüento para los ojos.
Retirar el vello con crema depilatoria y limpiar asépticamente el cuero cabelludo con tres pasadas de yodo y alcohol. Para un estudio terminal, se extirpa el cuero cabelludo con unas tijeras quirúrgicas y se expone el cráneo a unos tres milímetros de la sutura lamboide caudalmente y a tres milímetros frontales a la bregma. Extirpar el cuero cabelludo parietalmente para exponer la parte interna del músculo temporal en ambos lados.
A continuación, retire cualquier tejido conectivo subcutáneo residual para que el cráneo quede limpio y seco para aplicar los electrodos estimulantes. A continuación, aplique gel conductor en el lado de los electrodos que estará en contacto con el cráneo. Coloque el electrodo en este músculo temporal y asegúrelo con superpegamento quirúrgico alrededor del borde en puntos intermitentes.
Luego, aplique pasta de lidocaína en el músculo temporal y el cuero cabelludo en ambos lados sin alterar los electrodos. Pruebe la impedancia de los electrodos de estimulación extracraneal. A continuación, coloque el ratón debajo de un dispositivo de imágenes de manchas láser sin electrodos de registro intracraneales.
Para aplicar la estimulación entre los dos electrodos tACS del cráneo, utilice un dispositivo de estimulación comercial compatible con humanos que suministre una corriente constante. Antes de la estimulación, obtenga una línea de base clara. Aplique breves períodos de estimulación de encendido/apagado a varias amplitudes a cada lado del cráneo.
Asegúrese de tener una línea de base clara después de la estimulación. Después de colocar los electrodos estimuladores extracraneales cuatro milímetros lateralmente a cada lado del cráneo, marque la posición de los orificios de las rebabas a dos milímetros a cada lado de la línea media, a cuatro milímetros de distancia entre sí y ortogonales a la sutura sagital. Luego, taladre dos agujeros de rebaba para los electrodos de vidrio.
Rellene estos orificios con aceite mineral estéril para evitar la entrada de corriente en el cráneo desde los electrodos extracraneales. A continuación, llene los microelectrodos de vidrio agrupado con cloruro de sodio 0,2 molar y colóquelos con un micromanipulador en los dos orificios de rebaba colocados lateralmente a la sutura sagital. Coloque los microelectrodos de vidrio en los orificios de las rebabas.
A continuación, pruebe la impedancia de los electrodos de estimulación extracraneal después de la colocación del orificio de fresa para verificar que estos no interfieran con el flujo de corriente hacia el cerebro. Para medir el flujo sanguíneo cerebral resultante de la estimulación extracraneal, coloque al ratón debajo de un dispositivo de imágenes de manchas láser con electrodos de registro intracraneal. Una vez insertados en el cerebro, realice perfiles de profundidad a varias profundidades simétricas para asegurarse de que estos microelectrodos de vidrio estén aproximadamente un milímetro dentro de la corteza cerebral.
Utilice un sistema de digitalización para registrar datos continuos de las sondas Doppler y los microelectrodos durante una duración de referencia suficientemente estable. A continuación, aplique la estimulación de encendido/apagado y pruebe la estimulación craneal adicional. Para los experimentos para inducir la expansión de la depresión, agregue un tercer orificio de fresa en el lado derecho del cráneo, 1,5 milímetros de sutura rostral a coronal y un milímetro de sutura lateral a frontal posterior.
Rellene este orificio de rebaba con KCL para su posterior aplicación. En respuesta a la tACS de baja intensidad, se obtuvieron datos para los registros eléctricos de CC directa intracraneal y los registros Doppler láser bilaterales del flujo sanguíneo cerebral. Se observó una respuesta pequeña en respuesta a un estímulo de 0,75 miliamperios, mientras que se observó una respuesta mayor en respuesta a un estímulo de un miliamperio.
Tanto para los rastros de flujo sanguíneo eléctrico como para el cerebral, las respuestas fueron asimétricas entre el lado derecho e izquierdo del cráneo. Las imágenes de cráneo moteado con láser del flujo sanguíneo cerebral durante los ataques mostraron un aumento del flujo sanguíneo en respuesta a la estimulación, que se difundió uniformemente por toda la corteza. Después de la estimulación, el flujo sanguíneo volvió a la línea de base.
