Utilice las suspensiones celulares obtenidas después de la digestión de las articulaciones de la rodilla del ratón y siembre la suspensión en el plato recubierto de colágeno. Incubar la placa durante una hora a 37 grados centígrados en una atmósfera humidificada con un 5% de dióxido de carbono. Después de la incubación, recoja las células no adherentes con una pipeta.
Lave el plato recubierto de colágeno con medio de cultivo y recoja el medio. Luego, agregue medio fresco a la placa para cultivar las células adherentes que exhiben una morfología fibroblastoide. Trate las células con tripsina al 0,05% en la solución salina equilibrada de Hank y haga pasar las células subconfluentes.
Si se requieren células similares a fibroblastos de alta pureza, realice pases repetidos. Asegúrese de utilizar celdas con menos de cinco pasajes. Se aislaron células similares a fibroblastos del tejido inflamatorio de la artritis, inducidas en ratones hembra C57BL/6 de siete a ocho semanas de edad.
La pureza de las células aisladas se evaluó mediante RTQPCR La expresión de ARNm de marcadores de fibroblastos sinoviales, como Vcam1, Cdh11, Col6a1 y Csf1 en las células aisladas, sugirió que las fracciones ricas en fibroblastos se aislaron del tejido de la sinovitis.
