Comience preparando una dilución de 1 a 20 de tinta china negra y tampón del sistema de glicerol, luego centrifugue durante 10 minutos a 15,000 g a temperatura ambiente. Agregue 40 microlitros de solución de tinta y tampón del sistema de glicerol a la primera sección de la placa de 384 pocillos. Ahora agregue 25 microlitros de tampón del sistema de glicerol a todos los pocillos de dilución uno y 40 microlitros a todos los pocillos de dilución dos, tres y cuatro.
Agregue 25 microlitros de muestra de glicano extraída a los pocillos de dilución para diluir las muestras en una proporción de uno a uno. Diluya en serie cada muestra cuatro veces transfiriendo 10 microlitros del pozo de dilución uno al pozo de dilución dos, luego mezcle suavemente con una pipeta. Repita el proceso transfiriendo 10 microlitros de la muestra de la dilución dos al pocillo de dilución tres.
Después de repetir el proceso para el pocillo de dilución cuatro, deseche 10 microlitros de él para que todos los pocillos tengan un volumen final de 40 microlitros. Agregue 40 microlitros de solución de tinta y tampón del sistema de glicerol a la placa final. A continuación, cubra la placa con una cubierta adhesiva antes de centrifugarla durante 10 minutos a 3000 g a temperatura ambiente.
Para imprimir las muestras en la membrana de nitrocelulosa, comience purgando el cabezal de impresión y los capilares varias veces con tampón del sistema de glicerol. Inicie una tirada de impresión de prueba cargando una plancha solo con el búfer. Para configurar el instrumento para que imprima directamente desde el depósito de búfer limpio, haga clic en Archivo, seguido de Nuevo y, a continuación, elija Tirada de impresión.
Elija el tipo de microplaca y cambie la configuración del portaobjetos en consecuencia. A continuación, cambie la configuración de la minimatriz antes de editar la configuración de la propiedad de punto. Haga clic en la pestaña Descripción general para ver la placa.
Por último, en la pestaña Opciones, seleccione Usar búfer y calcule el tiempo de impresión antes de asignar ubicaciones de archivo para guardar el archivo. Después de guardar la ubicación, presione Iniciar tirada de impresión para continuar con la tirada. Mientras imprime muestras de glicanos extraídas, programe el sistema como antes.
En la pestaña Opciones, haga clic en Uso de microplacas de origen. Por último, guarde el archivo de cuadrícula único generado para la micromatriz impresa para el análisis posterior. También se incluyeron patrones de glicanos definidos en los microarrays impresos como controles positivos.
El perfil de unión de mapas obtenido para los patrones de glicanos seleccionados corresponde a las especificidades de epítopos previamente informadas.
