Comience cortando microarrays impresos idénticos de la membrana de nitrocelulosa y colocándolos en un recipiente adecuado para el sondeo. Para reducir la unión inespecífica, agregue tampón de bloqueo MP-TBST a los microarrays e incube durante una hora en un agitador giratorio. Después de la incubación, reemplace el tampón con MP-TBST fresco.
Incubar las matrices con anticuerpos monoclonales y MP-TBST durante dos horas en un agitador giratorio. Después de la incubación, retire la solución de la sonda molecular. Sumerja las matrices completamente en TBST limpio.
Reemplace inmediatamente el tampón con un volumen nuevo para eliminar la solución de sonda residual. Coloque las matrices en una coctelera giratoria durante cinco minutos. Reemplace el TBST con un volumen de búfer nuevo y coloque las matrices en el agitador durante otros cinco minutos.
A continuación, incube las matrices con anticuerpos conjugados con fosfatasa alcalina durante dos horas en un agitador giratorio. Una vez que se complete la incubación y se hayan lavado los microarrays, cúbralos con tetrazolio azul nitro y solución de desarrollo de color BCIP para detectar cromogénicamente la unión de anticuerpos. Termine la reacción sumergiendo el conjunto en agua limpia del grifo.
A continuación, coloque las matrices para que se sequen entre papel secante durante la noche a temperatura ambiente. La abundancia relativa de 16 epítopos diagnósticos de polisacáridos de la pared celular vegetal no celulósica se detectó mediante la unión de anticuerpos monoclonales dirigidos por glicanos a extractos impresos. La mayoría de los glicanos extraídos se detectaron dentro de la fracción alcalina de hidróxido de sodio.
Se registraron fuertes señales de unión para LM-10 y LM-11 que representan xilano y arabinoxilano dentro de las cáscaras de todas las variedades de mango ensayadas. LM-10 y LM-11 mostraron una unión preferencial al extracto de tejido de raíz de ajo y una unión débil al extracto de tejido foliar. LM-19 que representa un homogalacturonano parcialmente metilesterificado o no esterificado unido fuertemente a algunos extractos de variedades de mango y solo a las fracciones de pulpa de café.
