Comience colocando un ratón anestesiado sobre su lado derecho sobre un soporte quirúrgico calentado para exponer su abdomen izquierdo. Ancla la parte delantera y las extremidades traseras del ratón con cinta de papel, asegurando la visibilidad del bazo. A continuación, desinfecte la piel en el sitio quirúrgico aplicando generosamente un antiséptico.
Confirme que el ratón está completamente anestesiado administrando un pellizco en el dedo del pie. Con ayuda de unas pinzas, levante la piel de la parte superior izquierda del abdomen y realice una incisión circular de 10 milímetros en la capa de piel y músculo con unas tijeras castroviejas. Localice el páncreas unido al bazo para determinar la dirección en la que se debe colocar el punto de cruz.
Use una sutura de seda 5/0 para colocar la primera puntada en la capa muscular en el lugar identificado. Asegure el extremo con tres a cinco nudos. Continúe suturando directamente a través de la incisión.
Luego corta y deja una cola de aproximadamente cinco centímetros. Repite la costura, esta vez perpendicular a la puntada original. A continuación, levante con cuidado y coloque el páncreas sobre el punto de cruz.
Coloca una puntada de cuerda de bolso aproximadamente a un milímetro del agujero, entrelazando la piel y la capa muscular. Coloque el marco de la ventana de modo que los bordes de la incisión circular se encuentren dentro de la ranura de la ventana. Ahora, cierre la ventana implantada atando firmemente la seda 5/0.
Cargue 100 microlitros de adhesivo de cianoacrilato líquido en una jeringa de 10 milímetros. Aplique un chorro delicado de aire comprimido hacia el pañuelo durante unos 10 segundos para secarlo. Con unas pinzas, sujete el marco de la ventana por su borde exterior y levántelo con cuidado para asegurar la separación del páncreas de la base del marco de la ventana.
Dispensar una fina capa de adhesivo de cianoacrilato líquido a lo largo del hueco de la ventana, evitando el tejido del páncreas. A continuación, utilice pastillas de vacío para levantar el cubreobjetos de cinco milímetros. Coloque suavemente el cubreobjetos en el centro del marco de la ventana óptica y mantenga una ligera presión durante aproximadamente 25 segundos para permitir que el adhesivo se asiente.
Con unas pinzas, separe el cubreobjetos de las pastillas de vacío. A continuación, apriete las suturas de punto de cruz para asegurar el páncreas al cubreobjetos y corte los extremos de la sutura. Finalmente, retire la cinta del mouse.
Apague el vaporizador de isoflurano y vuelva a colocar el ratón en una jaula limpia. Se observó un aumento de la estabilidad lateral y axial del tejido pancreático después del período de asentamiento. Las imágenes con el SWIP mostraron niveles más bajos de deriva en comparación con las ventanas de imágenes abdominales y de páncreas.
Se realizaron imágenes seriadas del páncreas murino después del tratamiento con ceruleína. La reubicación de los lóbulos se observó después de dos días consecutivos. El SWIP también se puede utilizar para la obtención de imágenes a largo plazo, lo que permite la visualización y cuantificación de la motilidad de la vacuola.
Por ejemplo, la velocidad promedio de las vacuolas en el páncreas murino aumentó en aproximadamente un 10% después del tratamiento con ceruleína, en relación con el PBS. El tratamiento con ceruleína también aumentó la frecuencia media de giro de las estructuras subcelulares en un 10%Sin embargo, no hubo diferencias significativas en la velocidad neta, la direccionalidad o la distancia acumulada entre los tratamientos. SWIP permite la visualización y captura de la migración de células tumorales.
Se observó la migración colectiva de células tumorales en racimos durante períodos cortos de tiempo. También se observó la migración unicelular de células tumorales y macrófagos.
