Esta metodología se puede utilizar para generar reproductores de tumores de vejiga utilizando el carcinógeno de LA BBN y para obtener imágenes del tamaño y la extensión de la carga del tumor de la vejiga a través de la RMN. Esta técnica utiliza un enfoque de imagen rápida independiente del operador con tiempos de adquisición cortos con una alta calidad de diagnóstico para llevar a cabo ensayos de alto rendimiento de ratones en etapas intermedias del desarrollo tumoral. Para inducir la formación de tumores de cáncer de vejiga, agregue 0.05%BBN a un recipiente de agua potable opaco y proporcione el agua a 6 semanas de edad C57 negro seis ratones ad libitum.
Luego monitoree a los animales dos veces a la semana en busca de signos de angustia asociados con tumores de vejiga de acuerdo con las pautas locales de la CIAIC. 16 a 24 semanas después de la exposición, cargue una jeringa de un mililitro equipada con una aguja de calibre 25 a 27 con 100 a 200 microlitros de solución salina estéril e inyecte la solución salina por vía subcutánea en un animal tratado con BBN. Después de 10 minutos, transfiera el ratón al soporte de imagen de una imagen de resonancia magnética e inserte una sonda de temperatura rectal conectada a la computadora de grabación fisiológica para monitorear la temperatura corporal del animal.
A continuación, coloque una bobina receptora de cuadratura de 4 canales sobre la parte inferior del abdomen del ratón e inicie ajustes automáticos en el software de imágenes integrado para adquirir un conjunto triaxial de imágenes de todo el cuerpo del ratón. A partir de este conjunto de imágenes de referencia, identifique la región de interés y adquiera tres conjuntos de imágenes en rodajas ortogonales a lo largo de los planos axial, coronal y sagital. Usando la verdadera imagen rápida con secuencia de imágenes de progresión de estado estable, establezca el TR en 900 milisegundos, el TE en dos milisegundos y la FA en 70, 14 promedios.
A continuación, seleccione los parámetros geométricos adecuados dentro del software de la plataforma de imágenes para obtener una serie de rebanadas a través de toda la vejiga de 0,5 mililitros de espesor y una resolución en plano de 0,148 milímetros. Una vez obtenidas todas las imágenes, exporte el conjunto de rebanadas que cubren toda la vejiga a un programa de software de análisis de imágenes médicas adecuado y desplácese por las imágenes generadas para localizar una rebanada en el punto medio de la vejiga que permite la visualización de la pared de la vejiga y el lumen para seleccionar la vista axial representativa en el centro de la vejiga para el análisis cuantitativo. A continuación, trace los límites alrededor del borde exterior y el lumen interno de la vejiga para delinear cuidadosamente la región de interés dentro de la vista axial representativa seleccionada y restar el lumen interno del borde exterior para calcular el área de superficie de la pared de la vejiga.
20 semanas después de la exposición a BBN, limpie el área de incisión con 70% de etanol y use fórceps para levantar la piel de la pared abdominal. Haga una incisión de línea media desde la sínfisis púbica hasta el proceso de xifoide y agarre el peritoneo para permitir una incisión aguda de la cavidad peritoneal. Identifique la vejiga en la mitad del abdomen inferior de la línea media, utilizando fórceps para agarrar la cúpula de la vejiga.
Disecciona la vejiga lejos de las estructuras circundantes, incluidas las vesículas seminales, el recto y la grasa. Corte el ligamento umbilical medio que conecta la cúpula de la vejiga con el umbilicus y la pared abdominal. Cortar los uréteres cerca de la vejiga y levantar la vejiga cefalada, cortar la uretra para extraer la vejiga.
Luego enjuague la vejiga extirpada con PBS e inmediatamente pese el tejido en un equilibrio. Aquí, se muestran imágenes rápidas verdaderas representativas con imágenes de resonancia magnética de progresión en estado estacionario de reconstrucciones tridimensionales de la pared de la vejiga e imágenes patológicas de un ratón con un tumor grande y de un ratón de control sin tumor. El grosor de la pared de la vejiga, tal como se deriva de la resonancia magnética, se correlaciona semanalmente con las mediciones de peso de la vejiga obtenidas ex-vivo.
El examen del grosor de la pared de la vejiga derivado de la RMN y los datos de peso de vejiga obtenidos ex-vivo también demuestran una asociación con la etapa tumoral, así como una asociación al estratificar la patología por cáncer de vejiga invasivo no muscular y cáncer de vejiga invasivo muscular. Tenga en cuenta que lo mejor es adquirir las imágenes en ratones cuando tienen la vejiga llena. Después de la rmn de rmenes de los tumores de vejiga, los ratones se pueden dividir en cohortes con características tumorales similares, según corresponda.
Esta técnica permite a los investigadores explorar nuevas inmunoterapias y otros tratamientos para mejorar los resultados para nuestros pacientes. Es importante recordar que el BBN es un carcinógeno y que siempre se debe tomar la precaución adecuada al manipular este compuesto.
