Para comenzar a preparar las rejillas de microscopía electrónica para la criotomografía celular, coloque la rejilla, cargada con una película de soporte de carbono perforada, en un dispositivo de descarga incandescente con el lado de carbono de la rejilla hacia arriba. A continuación, descarga la rejilla a 15 miliamperios, bajo una presión atmosférica de 0,39 milibares durante 45 segundos. Una vez hecho esto, coloque la rejilla en un recipiente limpio, forrado con papel de filtro.
A continuación, transfiera la rejilla junto con la fibronectina, la solución salina tamponada con fosfato o PBS, las placas y las pinzas a un gabinete de bioseguridad. Con una micropipeta, coloque dos puntos de fibronectina bovina de tamaño generoso sobre una superficie estéril como una tapa de placa de seis pocillos. Asegúrese de que los puntos sean lo suficientemente grandes como para envolver toda la cuadrícula.
Luego, obtenga pinzas de cinco por 15 y trate ambos lados de la rejilla con la solución de adherencia de fibronectina. Una vez tratada con fibronectina bovina, la rejilla se volverá pegajosa. Toque suavemente la superficie sin carbono de la rejilla con el fondo de un pocillo vacío en una placa de seis pocillos y suelte las pinzas para unir la rejilla a la nueva superficie.
A continuación, incubar la rejilla durante 30 minutos en la solución de adherencia de fibronectina. Para evitar que las rejillas se sequen, agregue una o dos gotas de solución de adherencia encima de las rejillas, usando una micropipeta cada 15 minutos. Después de la incubación, retire el exceso de solución de adherencia con una micropipeta.
Lave las rejillas añadiendo gotas de PBS directamente sobre las rejillas, utilizando la micropipeta dos o tres veces. Esterilizar las rejillas bajo luz ultravioleta en una cabina de bioseguridad durante una hora. Coloque las rejillas lo más cerca posible de los rayos UV para una esterilización máxima.
Evite que las rejillas se sequen durante la esterilización mediante el micropipeteo de una o dos gotas de PBS en la parte superior de la rejilla cada 10 minutos.
