Preparación de muestras para criotomografía in situ de células de mamíferos

El objetivo de esta investigación es desarrollar una metodología para la preparación de muestras que sea accesible y reproducible de forma fiable. Al lograr esto, el poder de la criotomografía celular directa se puede utilizar para responder a una amplia variedad de preguntas biológicas. Los desafíos de la preparación de la red son extensos.

Las celdas no se adhieren fácilmente a las cuadrículas, y la manipulación puede provocar daños en la capa de carbono, lo que resulta en la pérdida de áreas de cuadrícula que se pueden fotografiar. Además, la prevalencia de protuberancias celulares delgadas se reduce si no se presta atención a las condiciones adecuadas de preparación de la muestra. Los protocolos actuales suelen requerir equipos especializados para resolver los principales cuellos de botella de la siembra, como los micropatrones y los soportes impresos en 3D para la fijación y manipulación de las células, respectivamente.

Este protocolo proporciona soluciones con mayor accesibilidad, al tiempo que mantiene la flexibilidad para que estas herramientas especializadas se utilicen en aplicaciones posteriores.