Para comenzar, incube los huevos de gallina fertilizados en una incubadora humidificada. A continuación, prepare dos salinas CMF con tampón EDTA al 0,25%. A continuación, pela la piel de los embriones de pollo en una solución de HBSS e incubarlos en dos veces la solución de CMF-EDTA en hielo durante 15 a 20 minutos.
Use un par de pinzas de relojero para separar cuidadosamente el epitelio y el mesénquima. A continuación, transfiera el epitelio aislado y el mesénquima a una sola placa limpia que contenga HBSS. Para la recombinación, coloque el mesénquima en una placa de Petri que contenga HBSS, luego coloque el epitelio sobre él, alineándolo a lo largo del eje anterior/posterior del mesénquima.
Alternativamente, gire el epitelio 90 grados desde el eje mesenquimal anterior posterior. A continuación, transfiera las pieles recombinadas a los insertos de cultivo en seis placas de cultivo de pocillos. Elimine cualquier exceso de HBSS que rodee la piel recombinada.
Después de agregar DMEM que contiene un 10% de FBS al pocillo exterior del inserto, pipetee una capa delgada de DMEM en la cámara del inserto, asegurándose de que el explante permanezca semihidratado. Finalmente, coloque los recombinantes de piel en una incubadora a 37 grados en un ambiente de 5% de dióxido de carbono y 95% de aire. Monitorice los cambios fenotípicos en las fases iniciales de desarrollo de la piel mediante fotografía time-lapse, con un microscopio de disección montado.
Las nuevas placodas aparecieron poco después de la recombinación, y se desarrollaron en brotes de plumas cortas dos días después de la recombinación. Los largos brotes de plumas se desarrollaron en cuatro días. Cuando el epitelio se giró 90 grados, la orientación de las nuevas yemas fue determinada por el epitelio.
