Para comenzar, coloque 200 drosophila adultas recién nacidas en una jaula de plástico en forma de cilindro. Selle un lado de la jaula con una malla metálica porosa para la ventilación y el otro con una placa de agar de jugo de frutas y pasta de levadura. El día de la inyección, reemplace la placa de agar de la jaula con una placa de jugo de frutas que contenga un mínimo de pasta de levadura.
Incubar la placa a 25 grados centígrados durante una hora para recolectar embriones. A continuación, retire la placa de la jaula para detener la puesta de huevos e incube a 25 grados centígrados durante dos horas más para obtener embriones de dos a tres horas de edad. Para eliminar la cáscara de huevo de los embriones, introduzca dos mililitros de solución de lejía al 50% en el plato de jugo de frutas.
Con un pincel, desaloje suavemente los embriones de la placa e incube la placa durante dos minutos mientras la gira cada 30 segundos para mejorar la eficiencia de la extracción de la cáscara del huevo. A continuación, vierte la mezcla de embrión y lejía en un colador de células de nailon de 70 micrómetros. Enjuague los embriones exhaustivamente con una botella de agua para eliminar cualquier resto de lejía y pasta de levadura.
Con una cuchilla de afeitar limpia, corte un bloque rectangular de agarosa y colóquelo en un portaobjetos de vidrio. Con un pincel, transfiera los embriones del colador al bloque de gel y distribúyalos uniformemente a lo largo de la línea central del bloque cepillando suavemente. Ahora, prepare una pinza con sus dos patas bien pegadas con cinta adhesiva para formar una sola punta afilada.
Bajo un microscopio de disección, elija embriones individuales con la pinza y alinéelos a lo largo del borde extendido del bloque de gel. Pipetee 10 microlitros de pegamento de heptano en el punto medio de un cubreobjetos de 24 por 50 milímetros. Use una punta de pipeta para esparcir el pegamento en un área rectangular de 0,5 por tres centímetros.
Con una pinza de punta plana, levante el cubreobjetos recubierto de pegamento y manténgalo firmemente por encima de los embriones, asegurándose de que el lado del pegamento mire hacia los embriones a aproximadamente 45 grados. Presione suavemente el cubreobjetos contra el bloque de gel, permitiendo que los embriones toquen el pegamento. Libere rápidamente la presión y eleve el cubreobjetos.
A continuación, dispense 10 microlitros de agua en el centro de un portaobjetos de vidrio nuevo. Coloque el cubreobjetos del embrión sobre él, asegurándose de que el lado del embrión quede hacia arriba. Después, aplica 40 microlitros de aceite de carbono de halo en una extremidad de la tira embrionaria.
Inclina el portaobjetos hasta que el halo de aceite de carbono cubra la superficie del embrión.
