Para comenzar, transfiera 20 mililitros de la muestra de uva fermentada a un tubo estéril de tapa roscada de 50 mililitros. Luego agregue 10 mililitros de agua fría en el tubo y el vórtice para homogeneizar. Centrifugar la muestra a 800 G durante un minuto a cuatro grados centígrados.
Transfiera el sobrenadante a un nuevo tubo de 50 mililitros y centrifugue a 3000 G durante 20 minutos a cuatro grados centígrados. Después de desechar el sobrenadante, vuelva a suspender el gránulo en un mililitro de PBS. Transfiera la suspensión de la celda a un tubo de rosca de dos mililitros y centrifugue a 14.000 G durante dos minutos.
Ahora vuelva a suspender el gránulo en 978 microlitros de tampón de fosfato de sodio de pH 7,4 y 122 microlitros de tampón de ADN. Agite el tubo y colóquelo a cuatro grados centígrados durante 45 minutos a una hora. Transfiera un mililitro de la muestra a una solución de lisis, un tubo y apriete la tapa.
Homogeneizar la muestra tres veces en un molinillo batidor de perlas durante 60 segundos cada una. A continuación, centrifugar el tubo E de la matriz de lisado durante un minuto a 16.800 G. Transfiera el supernannt a un microtubo limpio y añada 250 microlitros de solución de precipitación de proteínas al tubo. Agite el tubo 10 veces para mezclar el contenido.
Centrifugar la muestra durante cinco minutos a 16.800 G y transferir el sobrenadante a un tubo estéril de 15 mililitros. A continuación, añade un mililitro de suspensión de matriz aglutinante al sobrenadante y mezcla invirtiendo los tubos durante dos minutos antes de colocarlos en una rejilla durante tres minutos. Después de retirar un mililitro del sobrenadante, vuelva a suspender la matriz en el sobrenadante restante.
Transfiera 600 microlitros de la mezcla a un tubo de filtro giratorio y a una centrífuga. Luego decantar el flujo y agregar 500 microlitros de solución de lavado en el tubo del filtro de centrifugado. Retire el filtro giratorio y colóquelo en un tubo de captura nuevo durante cinco minutos.
Después del secado, agregue 50 microlitros de agua tibia sin ADNasa en la membrana del filtro y agite suavemente la matriz con la punta de una pipeta. Centrifugar a 14.500 G durante un minuto para eluir el ADN. Cargue la muestra en un gel de agarosa.
Por último, mide la concentración de ADN.
