Protocolo de Seccionamiento de Semillas y Técnica de Deposición de Matriz para el Análisis MALDI-IMS de Semillas de Palma Dura

Para comenzar, sumerja tres semillas de euterpe precatoria y tres semillas de Euterpe edulis en agua desionizada durante 24 horas. Después de 24 horas, encienda el criostato y deje que la temperatura alcance los 20 grados centígrados. Saca las semillas húmedas del agua y córtalas por la mitad con una cuchilla de micrótomo.

Prepara una solución fresca y tibia de gelatina al 10 %. Coloca la mitad de las semillas en un molde y llénalo con la solución de gelatina. Congelar a 20 grados centígrados durante dos horas antes de llevarlo al criostato.

Fije la semilla incrustada al soporte del criostato utilizando un compuesto de temperatura de corte óptima, o OCT, y déjela durante 10 minutos dentro del criostato para el endurecimiento de la OCT. A continuación, agregue cinta adhesiva de cobre de doble cara a un portaobjetos de vidrio recubierto de óxido de indio y estaño o a un portaobjetos ITO. Produzca secciones de 20 micrómetros de espesor de cada especie y colóquelas en la cinta adhesiva adherida al portaobjetos de vidrio ITO.

Para la deposición de la matriz, coloque el portaobjetos que contiene las rodajas en un desecador al vacío hasta que alcance la temperatura ambiente. Haga marcas de enseñanza con un bolígrafo corrector en cada esquina de la diapositiva y escanee la diapositiva con un escáner de mesa. Use una balanza analítica para pesar 30 miligramos de DHB.

A continuación, prepare una solución de un mililitro que contenga partes iguales de metanol y ácido tricloroacético al 0,1%, y disuelva el DHB pesado en la solución preparada. Llene una jeringa de vidrio de un mililitro con la solución de DHB y colóquela en una bomba de jeringa con un caudal de 0,8 mililitros por hora. Usando un tubo de púa, conecte la jeringa a una aguja de ionización química a presión atmosférica o APCI, y luego conecte el nitrógeno a la aguja.

Ajuste el caudal a 12,5 PSI. Fije la aguja APCI a la plataforma de movimiento XY. Asegúrese de que la punta de la aguja APCI esté cuatro centímetros por encima del portaobjetos.

Con el software de dibujo, configure la plataforma de movimiento XY para que siga la plantilla y espere a que la plataforma repita la plantilla 20 veces.