Aislamiento de células estromales a partir de tejido tímico murino para generar conjuntos de datos multiómicos de células individuales de alta calidad

Para comenzar, coloque el ratón sacrificado en una plataforma quirúrgica y abra la cavidad torácica. Con unas tijeras quirúrgicas, haga una incisión transversal por debajo de la caja torácica y corte las costillas a cada lado del ratón hasta la clavícula. A continuación, corte el diafragma para liberar la pared torácica y levante las costillas con pinzas para exponer la cavidad torácica.

Sostenga el timo con pinzas y corte suavemente el tejido conectivo que sostiene el timo en su lugar. Para realizar la disociación enzimática del tejido tímico murino, coloque el timo limpio en una tapa de tubo de 15 mililitros y use tijeras quirúrgicas estériles para picar finamente el tejido. Agregue dos mililitros de cóctel de disociación murina al tubo.

Coloque la tapa que contiene las piezas de timo e invierta el tubo cinco veces para volver a suspender el tejido. Envuelva la tapa del tubo en una película de parafina. Después de la incubación, coloque el tubo en una rejilla y deje que el tejido se asiente.

Retire el sobrenadante y páselo por un colador de células de 70 micrómetros en un tubo helado de 50 mililitros. A continuación, añade 20 mililitros de M1 99 con medio FBS al 2%FBS a la suspensión de la celda. Centrifugar el tubo a 500 g durante cinco minutos a cuatro grados centígrados.

Después de desechar el sobrenadante, vuelva a suspender el pellet en medio M1 99 y 2%FBS.