Para comenzar, coloque el Biochips Modelo BC002 en una placa de Petri de vidrio y enjuague todas las cavidades con etanol estéril al 70% durante 45 minutos. A continuación, enjuague las cavidades dos veces con agua estéril de doble destilación. Con una pipeta de 1.000 microlitros con puntas azules, cubra la membrana del biochip de la cavidad superior con una solución estéril de colágeno IV.
Incubar el chip durante 30 minutos a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono. Después de la incubación, enjuague las cámaras inferior y superior dos veces con PBS estéril que contenga magnesio y calcio. Llene la cámara superior de cada cavidad con 250 microlitros de célula endotelial o medio EC que contenga penicilina estreptomicina, y la cámara inferior con 150 microlitros.
Lavar el cultivo de células endoteliales de la vena umbilical humana confluente en un matraz T25 con cinco mililitros de DPBS sin PBS de magnesio y calcio. Añadir un mililitro de tripsina 0,25 y un milimolar de EDTA en PBS. E incubar durante tres minutos a 37 grados centígrados.
Después de la incubación, agregue cinco mililitros de PBS y 5% de FCS para detener la actividad de la tripsina. En un tubo cónico de 50 mililitros, centrifugar la suspensión a 350 g durante cinco minutos. Y vuelva a suspender el pellet en un mililitro de medio EC.
Agregue 10 microlitros de suspensión celular diluida de uno a 10 a un tubo de microcentrífuga que contenga 10 microlitros de tinción azul de tripano. Cuente las celdas manualmente con una cámara de Neubauer. Después de contar, reemplace el medio de células endoteliales en la cámara superior del biochip con 200 microlitros de medio EC que contenga 0,4 veces 10 a la potencia de seis cultivos de células endoteliales de vena umbilical humana.
Coloque la placa de Petri de vidrio con los biochips a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono. Realice un intercambio diario de medio con 300 microlitros de medio EC para la cámara superior y 200 microlitros de RPMI+medio para la cámara inferior. Después de lavar los monocitos con un mililitro de PBS, incubarlos en PBS precalentado que contenga lidocaína y EDTA a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono durante siete minutos.
Recoja y centrifugue las células a 350 g durante siete minutos. Después de volver a suspender en un mililitro de RPMI + contar las células como se demostró anteriormente. Semilla 0,1 por 10 elevado a la potencia de seis monocitos suspendidos en 200 microlitros de RPMI+en la cámara inferior.
Coloque los puertos del biochip hacia abajo para que las células se adhieran a la membrana.
