Obtención de imágenes de organoides derivados del cáncer colorrectal inmunoteñidos en hidrogel de péptidos para evaluar los efectos de los péptidos autoensamblables en la adhesión celular

Para comenzar, obtenga imágenes de las muestras de organoides derivadas de SW1222 teñidas con un microscopio de epifluorescencia a 10x. Utilice únicamente los canales Rhod y DAPI. Inicie el software ImageJ y haga clic en el complemento, seguido de macros.

A continuación, ejecute para ejecutar el convertidor de ROI de ImageJ. py del sitio de GitHub de Cell Pose. Cuando aparezca una ventana, seleccione el primer archivo de la carpeta de organoides de colon y haga clic en abrir.

A continuación, elija el seg. npy correspondiente al primer archivo, y haga clic en abrir. A continuación, presione seleccionar todo en la ventana del administrador de ROI y presione medir.

Ahora, haga clic en archivo, seguido de guardar como en la ventana de resultados para guardar los resultados. Repita la conversión de imagen para la misma imagen en la carpeta para el lumen del organoide del colon. Luego, cargue el software Origin Pro, haga clic en datos, seguido de importar archivo para ubicar el asistente de importación.

Seleccione los archivos CSV correspondientes al organoide y a las propiedades en forma de lúmenes para la misma imagen. Copie las propiedades en forma de lúmenes en la columna de resultados de la colonia para emparejar cada medición de lúmenes con su colonia correspondiente. En una nueva columna, divida las áreas del lumen y la colonia para obtener el área relativa del lumen de su colonia correspondiente.

Seleccione la columna correspondiente a la circularidad de cada colonia y el área de lúmenes. A continuación, haga clic secuencialmente en plot, 2D básico y disperse. Haga clic con el botón derecho en la ventana de la gráfica y elija los detalles de la trama.

Haga clic en la pestaña centroide pro y seleccione las opciones que dicen mostrar punto de centroide para subconjunto, conectar a puntos de datos y mostrar elipse. Las células cultivadas en 2D tenían una variación muy alta en la circularidad de la colonia. Las células cultivadas en Matrigel tenían una distribución más extensa para el tamaño relativo del lumen.