Para comenzar a teñir los organoides retinianos fijos, o RO, para la microscopía electrónica de transmisión, use una pipeta para eliminar el ácido de osmio agregado previamente a los organoides en el tubo de microcentrífuga durante la posfijación. A continuación, lavar las ósmosis inversa con PBS 0,01 molar a pH 7,4 tres veces durante 10 minutos cada una, seguidas de un lavado con agua desionizada tres veces durante 10 minutos cada una. Retire el último lavado con agua desionizada, reemplácelo con unos 150 microlitros de acetato de uranio y manche durante una o dos horas a temperatura ambiente.
A continuación, en una campana extractora, retire el acetato de uranio y sustitúyalo por un mililitro de acetona al 50% para deshidratar las muestras durante 10 minutos. Luego, realice la deshidratación en gradiente usando 70%80%90% y dos veces 100%acetona sucesivamente, cada una durante 10 minutos. Después de la deshidratación en gradiente, deseche la acetona residual y agregue aproximadamente 150 microlitros de una mezcla de acetona y resina Epon-812.
Coloque el tubo en un horno a 37 grados centígrados durante una hora. Después de eliminar la mezcla anterior de acetona y resina, reemplácela con una composición diferente de acetona y mezcla de resina Epon-812. Esta vez, incuba el tubo a 37 grados centígrados durante la noche.
Finalmente, transfiera los organoides de la retina a un nuevo tubo que contenga aproximadamente 500 microlitros de resina epoxi pura, con cuidado. E incubar a 45 grados centígrados durante una hora antes de proceder con la inclusión de organoides.
