Para comenzar, coloque un bloque pulmonar de corazón de rata recién extirpado en una capa de gasa sobre hielo. Disecciona el exceso de grasa alrededor de la aorta. A continuación, recorte la aorta, dejando entre tres y cinco milímetros para la canulación.
Haga una incisión de uno a dos milímetros de largo en la arteria pulmonar. Coloque el bloque cardíaco-pulmonar recortado sobre hielo directamente debajo de las cánulas. A continuación, utilice una pinza de tubo de control de flujo para ajustar el flujo desde el lado de Langendorff para la canulación de la aorta.
Cánula cuidadosamente la aorta en la cánula izquierda. Sujétalo con una pinza negra y átalo con una sutura de seda 2/0. Abra completamente la abrazadera del tubo de control de flujo para aumentar el flujo de la perfusión de Langendorff.
A continuación, abra la abrazadera de poscarga. Comience a monitorear la actividad cardíaca con software. Ajuste el bloqueo cardíaco-pulmonar de manera que la superficie anterior de los pulmones quede orientada hacia el operador.
Ate el lóbulo pulmonar izquierdo con una sutura de seda 2/0. Ate los lóbulos pulmonares restantes en un solo barrido con una sutura de seda 2/0. A continuación, gire el corazón de modo que los pulmones atados queden hacia atrás.
Con un par de tijeras vannas pequeñas. Recorta una sección de dos a tres milímetros del apéndice auricular izquierdo para crear una pequeña abertura en las aurículas. Cánula cuidadosamente del apéndice auricular izquierdo a la cánula izquierda.
Sujétalo con una pinza negra y átalo con una sutura de seda 2/0. Ajuste la camisa de agua de la cámara cardíaca de modo que el corazón quede dentro del centro de la cámara. Ahora abra el transductor de presión al aire.
Seleccione la presión aórtica en el software. Luego haga clic en puente amperaje, seguido de cero y OK para poner a cero el transductor de presión. Perfundir el corazón en modo Langendorff durante 10 minutos.
A continuación, transfiera la piedra difusora del depósito amortiguador de Langendorff Krebs-Henseleit al depósito de almacenamiento intermedio de Krebs-Henseleit en funcionamiento. Abra el grifo de tres vías que sale de la perfusión de trabajo. Cierre la pinza grande que conduce a la cánula aórtica y abra el flujo que conduce al apéndice auricular izquierdo para cambiar al modo de trabajo.
Perfundir el corazón en modo de funcionamiento durante 15 minutos. Llene una cámara de cardioplejia con 50 mililitros de la solución de preservación cardíaca designada. Baje la camisa de agua y cierre el grifo de tres vías en el lado del modo de trabajo.
Cierre la pinza para detener el flujo hacia la cánula auricular izquierda. A continuación, abra el flujo a la cánula aórtica. Ahora cierre la abrazadera desde el lado de Langendorff y en la poscarga.
Abra la pinza desde la línea de cardioplejia. Enjuague 15 mililitros de la solución para cardioplejia de la línea de presión. Lavar el corazón con cardioplejia a través de la cánula aórtica y recoger el efluente coronario.
Después de tres minutos, cierre la pinza para cardioplejia y la pequeña pinza azul que conduce a la cánula aórtica. Coloque una pinza de bulldog en la cánula aórtica y otra pinza de bulldog en la cánula izquierda. Desconecte el bloque de cánula cardíaca del circuito y colóquelo en un vaso de precipitados que contenga cardioplejia en una caja de hielo.
Para reperfundir el corazón después del almacenamiento estático en frío, asegure cuidadosamente el bloqueo cardíaco-pulmonar después del almacenamiento en frío en el circuito de perfusión. Use una jeringa de calibre 18 de extremo romo llena de tampón Krebs-Henseleit para eliminar el aire de la cánula. Conecte primero la cánula aórtica.
A continuación, abra la abrazadera de tubo en el lado de Langendorff. Vuelva a conectar la cánula izquierda y asegúrese de que se haya eliminado el aire de la cánula antes de conectarla al circuito de perfusión. Mantenga la abrazadera del lado de trabajo cerrada hasta que sea el momento de cambiar del modo de trabajo de Langendorff.
Un flujo aórtico de 14 a 22 mililitros por minuto resultó en un buen flujo de Langendorff. Cuando se cambió al modo de trabajo, un flujo aórtico de al menos 30 mililitros por minuto facilitó el almacenamiento del corazón. A pesar de los buenos rastros basales, algunos corazones no produjeron una buena recuperación después de un almacenamiento estático prolongado en frío.
