Para comenzar, descongele el frasco que contiene un mililitro de células T-ALL de pez cebra congeladas marcadas con GFP en un baño de agua a 37 grados Celsius con agitación suave. Pipetee lentamente el contenido del vial en un tubo cónico de 15 mililitros, que contiene cuatro mililitros de medio de pescado en hielo. Gire las celdas a 2.500 g durante cinco minutos a cuatro grados centígrados y deseche el supernado antes de volver a suspender el pellet en 0,5 mililitros de medio de pescado.
Agregue 10 microlitros de suspensión celular en el tubo de microcentrífuga que contiene 10 microlitros de tinte azul de tripán. Mezcle bien y transfiera 10 microlitros a un hemocitómetro y cuente las células bajo el microscopio. A continuación, sostenga el pez cebra CG1 adulto anestesiado con el lado ventral hacia arriba.
Con una microjeringa Hamilton, inyecte de cinco a seis microlitros de suspensión celular en el espacio intraperitoneal. Aproximadamente 21 a 28 días después del trasplante, evalúe el porcentaje de células leucémicas marcadas con GFP del pez cebra anestesiado. Para recolectar células de leucemia, mueva el pez cebra sacrificado a una nueva placa de Petri y agregue un mililitro de medio de pescado para que sirva como amortiguador para las células.
Con una cuchilla de afeitar, primero decapita al pez cebra y luego macera el tejido. Pipetea hacia arriba y hacia abajo para desalojar grandes grupos de células. Pase la suspensión celular a través de un filtro celular de 40 micras a un tubo cónico de 50 mililitros para disociarse en una suspensión de una sola celda.
