Microscopía de fluorescencia ex vivo de secciones de tejido cerebral murino

Para comenzar, saque el cerebro congelado rápidamente almacenado en un compuesto de temperatura de corte óptima de 80 grados Celsius de almacenamiento y colóquelo dentro de la cámara de criostato. Deje que las muestras se calienten a la temperatura de la cámara. Con una navaja de afeitar de un solo filo, corte el cerebro coronalmente en el lugar de la inyección.

Monte la muestra en el disco de muestra utilizando una pequeña cantidad de temperatura de corte óptima. Aplique suficiente presión con un peso enfriado dentro de la cámara para un montaje estable de la muestra. Mueva la muestra montada y el disco de muestra a la cabeza de la muestra.

Recorta el tejido a la profundidad deseada tomando secciones de 20 micrómetros. Una vez que se alcanza la profundidad deseada, ajuste el criostato para tomar secciones de cinco a siete micrómetros de la muestra. A continuación, monte las secciones en el portaobjetos de vidrio preetiquetado.

Fije las secciones en el 4% de paraformaldehído durante 15 minutos. Después de la fijación, enjuague este portaobjetos tres veces con DPBS. Agregue una gota de 40 microlitros de medio de montaje que contenga DAPI en el portaobjetos.

Coloque con cuidado un engobe de cubierta de vidrio encima del medio. Bajo microscopía de fluorescencia, visualice el tejido usando DAPI y Cy5.5. En microscopía de fluorescencia ex vivo de tejidos tumorales, la señal fluorescente CY 5.5 observada confirmó la entrega de nanopartículas magnéticas.