Para empezar, prepare los nanocompuestos de óxido de grafeno/cobre. El primer día, inocule una colonia de las bacterias de la placa de agar en 10 mililitros de caldo con un asa. Incubar el caldo a 37 grados centígrados utilizando una incubadora agitadora a 200 RPM durante 24 horas.
El segundo día, diluya la mezcla de nanocompuestos usando DPBS para obtener tres concentraciones diferentes y prepare las soluciones de control para el experimento. A continuación, dispense 100 microlitros de las soluciones de suspensión y control de nanocompuestos en placas de 96 pocillos. Sobre la base de las UFC, diluya la suspensión bacteriana a una vez 10 a la potencia de seis UFC por mililitro en el caldo de soja tríptico.
Inocular 100 microlitros de la suspensión bacteriana diluida en los pocillos de muestra en la placa de 96 pocillos e incubar la placa a 37 grados centígrados en una incubadora de agitación a 200 RPM durante 24 horas. En el tercer día, mezcle vigorosamente la muestra y las suspensiones bacterianas con una micropipeta de 200 microlitros antes de diluir en serie la mezcla de bacterias de la muestra diez veces con agua destilada estéril. A continuación, esparcir 100 microlitros de la suspensión bacteriana diluida en una placa de agar con un esparcidor e incubar la placa a 37 grados centígrados durante 24 horas.
En el cuarto día, cuente las colonias bacterianas y determine los valores de UFC para confirmar la actividad antibacteriana de los nanocompuestos utilizando la ecuación. Los nanocompuestos demostraron una eficacia antibacteriana significativa contra Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa resistentes a la meticilina, erradicando el 99,8% y el 84,7% de esas bacterias respectivamente a una concentración de 500 microgramos por mililitro.
