Aislamiento de células epiteliales de superficie ovárica primaria humana para la obtención de organoides para estudios de tejidos in vitro

Para empezar, transporta los ovarios humanos al laboratorio en cloruro de sodio al 0,9% o en una solución salina estéril similar con hielo. Enjuague los ovarios con una solución salina fresca y fría en una placa de Petri. Transfiera cada ovario a un tubo cónico de 50 mililitros y agregue de dos a tres mililitros de medio digestivo para cubrir el ovario.

Coloque el tubo en un baño de perlas, templado a 37 grados centígrados durante 30 minutos. Luego, transfiera con cuidado el ovario a una placa de Petri de 60 milímetros que contenga 10 mililitros de medio de recolección. Con un raspador de células, raspe suavemente la superficie ovárica que contiene las células epiteliales de la superficie ovárica humana.

Lave el raspador en el medio antes de raspar al menos dos veces más. Transfiera las células epiteliales de la superficie ovárica humana en el medio de recolección a un tubo de 15 mililitros. Gira las celdas a 240 G durante cinco minutos.

Si el pellet muestra un color rojo indicativo de contaminación con glóbulos rojos, vuelva a suspender el pellet en un mililitro de tampón de lisis de glóbulos rojos. A continuación, añade cuatro mililitros de PBS con calcio y magnesio, y centrifuga a 240 g durante cinco minutos. Criopreservar la célula epitelial de la superficie ovárica humana para su uso futuro en cultivo.