El proyecto descrito fue apoyada por números Premio HL064761 R01, R25 HL059868, 1SC1 HL099139 y P20 MD000175 forma Institutos Nacionales de Salud. El contenido es responsabilidad exclusiva de sus autores y no representa necesariamente las opiniones oficiales de los Institutos Nacionales de Salud.

1. El aislamiento de rata pequeña arteria mesentérica <ol><li> Anestesiar a los animales con isoflurano en una cámara cerrada y limpie el abdomen con el alcohol. </li><li> Realizar una laparotomía de la línea media para exponer cama mesentérica. </li><li> Con la tijera, quitar unos 85 cm de intestino con la alimentación de vasos con la arteria mesentérica superior. Corte el extremo proximal de la sección intestinal cerca del píloro y el extremo distal cerca de la unión ileo-coecal. Segmentos del intestino están aislados de ratas que están profundamente anestesiados con isoflurano y sacrificados por tórax abierto punción cardíaca. </li><li> Colocado sección extirpada en un plato de Petri que contiene recubierto PSS y llevar a cabo la disección de la arteria mesentérica a temperatura ambiente. </li><li> Precisar el extremo proximal del intestino en el lado derecho y el pin a cabo el resto de la intestineina las agujas del reloj (al final ieproximal sobre la vasculatura de alimentación a la izquierda en el extremo del intestino). </li><li> Diseccionar la rama II y III segmentos con un pedazo del segmento proximal. </li><li> Diseccionar la vena y aislar la arteria (con punto de ramificación en forma de V) y limpiar, eliminando el tejido adiposo y tejido conectivo. Evite el contacto directo con la arteria tirando suavemente con las pinzas y el corte a través de la membrana del tejido conectivo. </li></ol> 2. De montaje de la embarcación <ol><li> Corta dos segmentos cortos (≈ 4 cm) de una de tungsteno libre 40 m de alambre de acero inoxidable y con unas pinzas finas, inserte una en la luz de cada arteria teniendo cuidado de no dañar el endotelio. Use la punta del alambre para abrir la luz si es necesario. La sangre que salían de la nave es una buena señal de la luz se abre. </li><li> Llenar la cámara miografía con solución salina fisiológica (PSS; mM: 115 NaCl, 4,7 KCl, 1,4 MgSO 4 .7 H 2 O, 5 de NaHCO3, 1,2 K 2 HPO 4, 1,1 Na 2 HPO 4, 1,0 CaCl 2, 20 y HEPES 5 de glucosa, pH 7.4) con ácido ascórbico (100 M) a 37 ° C y el uso de fórceps transferir cuidadosamente el segmento del vaso roscado de la placa de Petri en la cámara a temperatura ambiente y la transferencia del segmento extirpado vaso proximal a la cámara de miografía y tire de la finales a lo largo del cable para alimentar el buque. Evitar el estiramiento del buque. </li><li> Asegure el extremo cercano del cable en sentido contrario en el tornillo de fijación cerca de la mandíbula derecha, conectado con el micrómetro. Coger el extremo libre del alambre con pinzas y seguro que las agujas del reloj en el tornillo de fijación hasta en la mandíbula derecha. Asegúrese de que el segmento de la flota a lo largo del cable se encuentra en la brecha entre las mandíbulas sin hacer contacto con la propia mandíbula. </li><li> Tornillo de las fauces de distancia, y alinear el segundo alambre en paralelo con el buque y la inserta en el extremo más alejado de la luz. Suavemente alimentar el alambre a través del lumen del segmento del vaso en un movimiento con el cable ya está montado como una guía. Mantenga el cable alrededor de 1 cm del recipiente para evitar que se extiende durante la maniobra, y evite tocar el endotelio. </li><li> Tornillo de la mandíbula juntos y asegurar que el segundo montaje se mueve por debajo de alambre de la primera protegido en la mandíbula derecha. </li><li> Asegure el extremo más cercano del segundo cable en el sentido de las agujas del reloj en el tornillo de fijación cerca de la mandíbula izquierda conectado al transductor. </li><li> Asegure el otro extremo del cable en el tornillo de fijación en la mandíbula izquierda y apretar para estirar el alambre. </li><li> Una vez que el montaje está completo, reiniciar el motor en el menú &quot;montaje&quot; y comenzar la normalización de la embarcación. </li></ol> 3. Normalización El miografía Auto de alambre doble sistema-510A tiene una función de normalización automatizado, el cual se evalúa a partir de la &quot;normalización&quot; del menú y permite que el buque que se alarga en una circunferencia interna normalizado por un procedimiento normalizado de acuerdo con el protocolo del fabricante después de equilibrar durante 30 minutos a 37 ° C. Una curva exponencial se ajusta entonces a los datos de la presión interna de la circunferencia. El procedimiento se define el diámetro de la luz (d 100) que la arteria se han tenido en vivo cuando está relajado y bajo una presión transmural de 100 mmHg 1 Los parámetros de normalización de la arteria mesentérica de rata son los siguientes.: <ol><li> Objetivo de presión transmural = 13,3 kPa (100 mm Hg). </li><li> Tiempo = 60 segundos, la duración de cada uno de los pasos de normalización. </li><li> IC 1 / 100 IC = 0,9 (IC = 1 circunferencia normalizado interna, IC 100 = circunferencia interna que corresponde a la presión deseada. </li><li> Calibración ocular 2 * Δ (mm / ocular división), 2 delta es por razones de programación. </li></ol> Medir la longitud de la arteria mesentérica montado usando el microscopio ocular lecturas cuando el nacimiento del pelo más de los extremos y cerca de la segm instalado en el buqueent. En pocas palabras, la longitud del segmento instalado en el buque se mide con un aumento máximo con un ocular calibrado ocular en el microscopio de disección. La lectura ocular con el pelo-line en el otro extremo del segmento (a 1) y el extremo más cercano del segmento (a 2) en las divisiones ocular se miden y registran. Estos valores, con las lecturas del micrómetro, antes y después de estirar el buque se registran y se entró en los menús para el programa para calcular la curva ajustada y el diámetro interior correspondiente a la presión transmural un objetivo de 100 mm Hg En nuestros estudios, las arterias se establece en el diámetro de la luz del d 1 = 0,9 xd 100, en el desarrollo de la fuerza activa es máximo. Desarrollo de la fuerza activa de ≥ 10 mN en las arterias mesentéricas de rata se considera óptimo para los experimentos de proceder. Los tejidos con menor fuerza activa se descartaron. 4. Medición de las respuestas Después de la normalización, las propiedades mecánicas y funcionales de los vasos se vuelven a activarse mediante la realización de un &quot;nuevo comienzo estándar&quot;, que afecta a vasos de un reto con la aplicación repetida (normalmente 2 ó 3) de fenilefrina M 5 (PE) para obtener las contracciones reproducibles. Un típico &quot;inicio normal&quot; en nuestro laboratorio consta de una serie de estímulos y periodos de limpieza de la siguiente manera: <ol><li> Vuelva a colocar la cámara y empezar a cubrir miografía de aireación con un 95% de aire y 5% de CO 2. </li><li> Llene la cámara con PSS fresco (que contiene ácido ascórbico 100 M) </li><li> Contrato recipiente con M PE 5 durante 5 minutos y lavar 4 veces con tampón de PSS. </li><li> Después del último lavado, cámara de recambio con PSS y esperar 3 minutos antes de repetir los pasos (ii) y (iii). </li></ol> Después de la salida estándar, la arteria está listo para el experimento. Relajaciones de los buques contratados son evaluados por adición acumulativa de aumento de las concentraciones de CaCl 2 (0,5 - 4 mm). Buques, cuando se usan inhibidores se pre-incubaron con los compuestos en la cámara de miografía durante 20 minutos y presente durante los ensayos. 5. Análisis de Datos La &quot;normalización&quot; de datos para los buques y los trazados de la fuerza, convierte directamente a los datos de texto, fueron analizados con el programa SigmaPlot 11,0 gráficos (Systat Software, Point Richmond, CA) y se representa como se muestra en la Figura 1. Respuesta a la concentración de datos, calculado a partir de los trazados, se analizaron mediante la determinación de la CE 50 valores a partir de datos experimentales instalados en una función logística de cuatro parámetros en el menú de Farmacología del programa. Las comparaciones entre grupos y dentro de los grupos se realizaron mediante análisis de varianza (ANOVA) y las diferencias con p &lt;0,05 se consideró significativo. 6. Los resultados representativos: <table border="1"><tbody><tr><th> Parámetros </th><th> Wistar </th><th> Dahl sensibles a la sal </th><th> Dahl resistentes a la sal </th></tr><tr><td> L 100 (m) </td><td> 83,26 ± 2,33 </td><td> 91,52 ± 4,67 </td><td> 117.45 ± 8.43 * </td></tr><tr><td> X 1 </td><td> 604,21 ± 41,97 </td><td> 752,24 ± 85,25 </td><td> 745,84 ± 110,09 </td></tr><tr><td> r 2 </td><td> 0,99 ± 0,003 </td><td> 0,97 ± 0,008 </td><td> 0,97 ± 0,007 </td></tr></tbody></table> * La diferencia entre los valores de L 100 Wistar y la República Dominicana son estadísticamente significativas. Shapiro-Wilk test de normalidad pasado (p = 0,588), análisis de varianza de Igualdad aprobada (p = 0,237). L 100 = Diámetro interior del segmento de montaje correspondiente a la presión transmural de destino. X 1 = El valor de posición micro requerida para estirar el instalado en el buque a su circunferencia normalizado interna (es decir, el valor de la lectura del micrómetro en el que los experimentos se llevaron a cabo). r 2 = coeficiente de regresión para el ajuste de (X i, Y i) a una curva exponencial. Nota: El procedimiento detallado se describe en el manual del sistema 510A miografía 6. Tabla 1. Ejemplo de lectura de los parámetros de normalización para los segmentos de la arteria mesentérica de Wistar, DS y DR de programa básico se muestra en el menú &quot;normalización&quot;. Los valores son medias (± SEM) de 5 animales. * Las diferencias entre los valores de L 100 Wistar y DS son estadísticamente significativas (p &lt;0,05). <table border="1"><tbody><tr><th> Wistar </th><th> DS </th><th> DR </th></tr><tr><td> 14,2 ± 0,6 </td><td><strong&gt; 25,8 ± 2,7 * </td><td> 20,9 ± 1,3 * </td></tr></tbody></table> Tabla 2. Tensiones adelantados (MN) en las arterias mesentéricas aisladas de Wistar, DS y ratas DR, después de las aplicaciones de 5 M PE a cada uno. Los valores informados son medias (± SEM) de 6-8 animales. * Significativamente diferente de los controles Wistar (p &lt;0,05). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig1.jpg" /> Figura 1. Ca 2 + e inducida por la relajación de la arteria mesentérica PE-contratados a partir de una rata Wistar montado en un cable miografía en solución salina fisiológica que contiene 1 mM Ca 2 +. La arteria se equilibró durante 30 min a 37 º C con aireación constante y las respuestas a Ca 2 + e determinado. Un grupo de representantes de seguimiento en la adición de 5 M PE seguido por la adición acumulativa de Ca 2 + se muestra. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig2.jpg" /> Figura 2. Ca 2 + e inducida por la relajación de la arteria mesentérica PE-contratados a partir de una rata DS montado en un cable miografía en solución salina fisiológica que contiene 1 mM Ca 2 +. La arteria se equilibró durante 30 min a 37 º C con aireación constante y las respuestas a Ca 2 + e determinado. Un grupo de representantes de seguimiento en la adición de 5 M PE seguido por la adición acumulativa de Ca 2 + se muestra. Ca 2 + de relajación se vio gravemente comprometida en este tejido en comparación con los de ratas Wistar y la República Dominicana. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig3.jpg" /> Figura 3. Ca 2 + e inducida por la relajación de la arteria mesentérica PE-contratados a partir de una rata DR montado en un cable miografía en solución salina fisiológica que contiene 1 mM Ca 2 +. La arteria se equilibró durante 30 min a 37 º C con aireación constante y las respuestas a Ca 2 + e determined.A fuerza representativa de seguimiento en la adición de 5 M PE seguido por la adición acumulativa de Ca 2 + se muestra. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig4.jpg" /> Figura 4. A. [Ca 2 +] e-respuesta de las curvas. Diagrama de barras que muestra B. CE 50 valores para la relajación determinada por ajuste de los datos a una expresión curve.C.CaR cuatro parámetros logísticos en las máquinas recreativas mesentéricos aislados de ratas DR y DS.

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	<li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260, 617-619 (1976).</li><li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro.">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents Actions. 2, 257-260 (1972).</li><li>Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Procedures+for+investigating+of+small+vessels+using+small+vessel+myograph.">Procedures for investigating of small vessels using small vessel myograph.</a> DMT Danish Myo Technology. , (2004).</li><li>Angus, J. A., Wright, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+to+study+the+pharmacodynamics+of+isolated+large+and+small+blood+vessels.">Techniques to study the pharmacodynamics of isolated large and small blood vessels.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 44, 395-407 (2000).</li><li>Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+smooth+muscle+cells+in+the+walls+of+arterial+resistance+vessels.">Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels.</a> J. Physiol. 275, 85-101 (1978).</li><li>Lindhorst, J., Alexander, N., Blignaut, J., Rayner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+hypertension+between+blacks+and+whites:+an+overview.">Differences in hypertension between blacks and whites: an overview.</a> Cardiovasc. J. Afr. 18, 241-247 (2007).</li><li>Eley, S. L., Allen, C. M., Williams, C. L., Bukosi, R. D., Pointer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+of+thiazide+on+renal+interstitial+calcium.">Action of thiazide on renal interstitial calcium.</a> Am. J. Hypertens. 21, 814-819 (2008).</li><li>Palmer, C. E., Rudd, M. A., Bujoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+interstitial+Ca2++during+sodium+loading+of+normotensive+and+Dal-salt+hypertensive+rats.">Renal interstitial Ca2+ during sodium loading of normotensive and Dal-salt hypertensive rats.</a> Am. J. Hypertens. 16, 771-776 (2003).</li><li>Hurwitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homeostatic+control+of+plasma+calcium+concentration.">Homeostatic control of plasma calcium concentration.</a> Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 31, 41-100 (1996).</li><li>Brown, E. M., MacLeod, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+sensing+and+extracellular+calcium+signaling.">Extracellular sensing and extracellular calcium signaling.</a> Physiol. Rev. 81, 239-297 (2001).</li><li>Breitwieser, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+calcium+as+an+integrator+of+tissue+function.">Extracellular calcium as an integrator of tissue function.</a> Int. J. Biochem. Cell Biol. 40, 1467-1480 (2008).</li><li>Mupanomunda, M. M., Wang, Y., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+chronic+sensory+denervation+on+Ca2+-induced+relaxation+of+isolated+mesenteric+resistance+arteries.">Effect of chronic sensory denervation on Ca2+-induced relaxation of isolated mesenteric resistance arteries.</a> Am. J. Physiol. 274, 1655-1661 (1998).</li><li>Mupanomunda, M. M., Ishioka, N., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interstitial+Ca2++undergoes+dynamic+changes+sufficient+to+stimulate+nerve-dependent+Ca2+-induced+relaxation.">Interstitial Ca2+ undergoes dynamic changes sufficient to stimulate nerve-dependent Ca2+-induced relaxation.</a> Am. J. Physiol. 276, 1035-1042 (1999).</li><li>Mupanomunda, M. M., Tian, B., Ishioka, N., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+interstitial+Ca2+.">Renal interstitial Ca2+.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 278, F644-F649 (2000).</li><li>Awumey, E. M., Hill, S. K., Diz, D. I., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytochrome+P-450+metabolites+of+2-arachidonoylglycerol+play+a+role+in+Ca2+-induced+relaxation+of+rat+mesenteric+arteries.">Cytochrome P-450 metabolites of 2-arachidonoylglycerol play a role in Ca2+-induced relaxation of rat mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2363-2370 (2008).</li><li>Chen, W., Bergsman, J. B., Wang, X., Gilkey, G., Pierpoint, C. R., Daniel, E. A., Awumey, E. M., Dauban, P., Dodd, R. H., Ruat, M., Smith, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+external+calcium+signaling+involves+the+calcium-sensing+receptor+in+neocortical+nerve+terminals.">Presynaptic external calcium signaling involves the calcium-sensing receptor in neocortical nerve terminals.</a> PloS One. 5, e8563-e8563 (2010).</li><li>Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+perivascular+sensory+nerve+Ca2++receptor+and+blood+pressure+regulation:+a+hypothesis.">The perivascular sensory nerve Ca2+ receptor and blood pressure regulation: a hypothesis.</a> Am. J. Hypertens. 11, 1117-1123 (1998).</li><li>Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+Ca2++and+blood+pressure:+evidence+that+Ca2+-sensing+receptor+activated+sensory+nerve+dilator+activity+couples+changes+in+interstitial+Ca2++with+vascular.">Dietary Ca2+ and blood pressure: evidence that Ca2+-sensing receptor activated sensory nerve dilator activity couples changes in interstitial Ca2+ with vascular.</a> 16, 218-221 (2001).</li></ol>

No hay conflictos de interés declarado.

La hipertensión es una causa importante de morbilidad cardiovascular, cerebral y renal / mortalidad. La aparición de la hipertensión arterial es alta en la población y la hipertensión sensible a sal es particularmente alta en el envejecimiento de la población, y más frecuente en los negros que los blancos. Se cree que esto se debe a la tendencia de los negros a retener sodio en los riñones 9. Sensibilidad a la sal es un factor importante que contribuye a la enfermedad renal y se asocia con la disfunci...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre de equipo / reactivo </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentarios (opcional) </th></tr><tr><td> Miografía Auto de alambre doble sistema-510A-DMT EE.UU., Inc. </td><td> Atlanta, GA. </td><td> 100151 </td><td></td></tr><tr><td> Sistema de Adquisición de Datos PowerLab/4SP </td><td> ADInstruments, Colorado Springs, CO </td><td> ML750 </td><td> Nuevos modelos con 16.4 canales de entrada están disponibles. </td></tr><tr><td> Dell Dimension XPS Gen 4 Ordenador </td><td> Dell </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Stemi SV II (Apo) microscopio de disección con Ocular </td><td> Carl Zeiss International. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Wistar, Dahl sensibles a la sal, Dahl resistentes a la sal ratas </td><td> Harlan Sprague Dawley, Indianapolis, IN. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Roedores chow </td><td> Harland Tekland, Madison, WI. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fenilefrina </td><td> Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Otros productos químicos </td><td></td><td></td><td> Todos los productos químicos utilizados fueron de los grados más puros disponibles en el mercado. </td></tr></tbody></table>

mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography

Vasos proximales de resistencia, como las arterias mesentéricas, contribuyen sustancialmente a la resistencia periférica. Estas pequeñas embarcaciones de entre 100 a 400 micras de diámetro, en función principalmente de dirigir el flujo de sangre a varios órganos de acuerdo a los requisitos generales del cuerpo. La arteria mesentérica de rata tiene un diámetro superior a 100 micras. La técnica miografía, describió por primera vez por Mulvay y Halpern 1, se basó en el método propuesto por Bevan y Osher 2. La técnica proporciona información sobre las embarcaciones pequeñas en condiciones isométricas, donde se evita el acortamiento sustancial de la preparación muscular. Dado que la producción de fuerza y ​​sensibilidad de los buques a diferentes agonistas depende de la magnitud de estiramiento, de acuerdo a la tensión activa de larga duración respecto, es esencial para llevar a cabo estudios de contracción isométrica en condiciones de evitar el cumplimiento de los cables de montaje. Alambres de acero inoxidable son preferibles a los cables de tungsteno debido a la oxidación de este último, que afecta a las respuestas registradas 3. La técnica permite la comparación de las contracciones inducidas por el agonista de los vasos montado en la obtención de pruebas para la función normal de los receptores del músculo liso vascular de la célula. Hemos demostrado en varios estudios que las arterias mesentéricas aisladas que tienen un contrato con phenylyephrine relajarse con la adición de concentraciones acumuladas de calcio extracelular (Ca 2 + e). Los resultados nos llevaron a concluir que los nervios sensoriales perivasculares, que expresan la proteína G-acoplada Ca 2 +-receptor sensible (CAR), mediar esta respuesta vasodilatación. El uso de un método de transferencia bancaria miografía automatizado, se muestra aquí que las arterias mesentéricas de Wistar, Dahl sensibles a la sal (DS) y Dahl resistentes a la sal (DR) las ratas responden de manera diferente a Ca 2 + e. Los tejidos de ratas Wistar mostraron mayor Ca 2 +-sensibilidad en comparación con los de DR y DS. Reducción de la expresión de coches en las arterias mesentéricas de ratas DS se correlaciona con una reducción de Ca 2 + e inducida por la relajación de los aislados, pre-contratados arterias. Los datos sugieren que el coche es necesario para la relajación de las arterias mesentéricas en tono adrenérgico aumentado, como ocurre en la hipertensión, e indicar un defecto inherente en la vía de señalización del CaR en animales de Dahl, que es mucho más grave en el DS. El método es útil para determinar in vivo la reactividad vascular ex en arterias de resistencia mesentéricas y similares los pequeños vasos sanguíneos y las comparaciones entre los distintos agonistas y / o antagonistas pueden ser fácil y constantemente evaluado de lado a lado 6,7,8.

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Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Un método automatizado para miografía las medidas de fuerza en las arterias mesentéricas aisladas se describe. Se emplea un miografía Auto Mulvany-Halpern alambre doble 510A para determinar las respuestas a la fenilefrina y el calcio extracelular. El método permite la determinación constante de respuestas a los agonistas isométricos en los pequeños vasos de diámetros de 60 a 300 micras, de forma independiente.

Contracción de la arteria mesentérica y Estudios de relajación con miografía cable automático

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

mesenteric-artery-contraction-relaxation-studies-using-automated-wire

Research

JoVE Journal

Medicine

28.4K vistas.  North Carolina Central University, Durham. Un método automatizado para miografía las medidas de fuerza en las arterias mesentéricas aisladas se describe. Se emplea un miografía Auto Mulvany-Halpern alambre doble 510A para determinar las respuestas a la fenilefrina y el calcio extracelular. El método permite la determinación constante de respuestas a los agonistas isométricos en los pequeños vasos de diámetros de 60 a 300 micras, de forma independiente.

Video: Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

Evaluar Miogénica Respuesta y Vasoactividad En arterias mesentéricas Resistencia Usando Miografía Presión

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Investigación

Medicina

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that system. Changes in blood flow to the small intestine can result in effects on the absorptive functions of the organ. Particular interest in toxins liberated from feedstuffs through fermentative and digestive processes has developed in ruminants as an area where productive efficiencies could be improved. The video associated with this article describes an in vitro bioassay developed to screen compounds for vasoactivity in isolated cross-sections of bovine mesenteric artery and vein using a multimyograph. Once the blood vessels are mounted and equilibrated in the myograph, the bioassay itself can be used: as a screening tool to evaluate the contractile response or vasoactivity of compounds of interest; determine the presence of receptor types by pharmacologically targeting receptors with specific agonists; determine the role of a receptor with the presence of one or more antagonists; or determine potential interactions of compounds of interest with antagonists. Through all of this, data are collected real-time, tissue collected from a single animal can be exposed to a large number of different experimental treatments (an in vitro advantage), and represents vasculature on either side of the capillary bed to provide an accurate picture of what could be happening in the afferent and efferent blood supply supporting the small intestine.

The small intestine is frequently exposed to toxins that can influence blood flow and negatively impact nutrient absorption. Using a multimyograph and mesenteric artery and vein isolates, compounds or toxins of interest can be screened for vasoactivity.

El aislamiento y uso de las Secciones de bovino mesentérica arteria y la vena como un bioensayo para la Prueba de Vasoactividad en el intestino delgado

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. While these therapies lead to the rapid restoration of blood flow, these technologies remain limited by restenosis in the case of bare metal stents and angioplasty, or reduced healing and possibly enhanced risk of thrombosis in the case of drug eluting stents. A key pathophysiological mechanism in the formation of restenosis is intimal hyperplasia caused by the activation of vascular smooth muscle cells and inflammation due to arterial stretch and injury. Surgeries that induce arterial injury in genetically modified mice are useful for the mechanistic study of the vascular response to injury but are often technically challenging to perform in mouse models due to the their small size and lack of appropriate sized devices. We describe two approaches for a surgical technique that induces endothelial denudation and arterial stretch in the femoral artery of mice to produce robust neointimal hyperplasia. The first approach creates an arteriotomy in the muscular branch of the femoral artery to obtain vascular access. Following wire injury this arterial branch is ligated to close the arteriotomy. A second approach creates an arteriotomy in the main femoral artery that is later closed through localized cautery. This method allows for vascular access through a larger vessel and, consequently, provides a less technically demanding procedure that can be used in smaller mice. Following either method of arterial injury, a degradable drug delivery patch can be placed over or around the injured artery to deliver therapeutic agents.

We describe a surgical technique that produces wire injury in the femoral artery of mice to induce neointimal hyperplasia to serve as a model testing system for the perivascular delivery of therapeutic compounds for the inhibition of restenosis.

Modelo murino de la arteria femoral Lesiones Alambre con implantación de un perivascular Drug Delivery Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

A Murine Model of Arterial Restenosis: Technical Aspects of Femoral Wire Injury

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to atherosclerotic plaque development or the rupturing of established plaques, interrupts normal blood flow leading to various morbidities such as myocardial infarction and stroke. In the clinic endovascular procedures such as angioplasty are commonly performed to reopen the lumen. However, these treatments inevitably damage the vessel wall as well as the vascular endothelium, triggering an excessive healing response and the development of a neointimal plaque that extends into the lumen causing vessel restenosis (re-narrowing). Restenosis remains a major cause of failure of endovascular treatments for atherosclerosis. Thus, preclinical animal models of restenosis are vitally important for investigating the pathophysiological mechanisms as well as translational approaches to vascular interventions. Among several murine experimental models, femoral artery wire injury is widely accepted as the most suitable for studies of post-angioplasty restenosis because it closely resembles the angioplasty procedure that injures both endothelium and vessel wall. However, many researchers have difficulty utilizing this model due to its high degree of technical difficulty. This is primarily because a metal wire needs to be inserted into the femoral artery, which is approximately three times thinner than the wire, to generate sufficient injury to induce prominent neointima. Here, we describe the essential surgical details to effectively overcome the major technical difficulties of this model. By following the presented procedures, performing the mouse femoral artery wire injury becomes easier. Once familiarized, the whole procedure can be completed within 20 min.

The mouse femoral artery wire injury model of restenosis is technically challenging. In this protocol we show the key technical details essential for successfully performing wire injury to induce consistent&#160;neointima for studies of restenosis.

Un modelo murino de restenosis arterial: Aspectos Técnicos del femoral Lesiones alambre

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Inducción de la Aterosclerosis Acelerada en Ratones: El Modelo de "Lesiones por Alambre"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Medición de la contractilidad isométrica de la arteria mesentérica de ratón con cable miografía

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Model of Ischemic Heart Disease and Video-Based Comparison of Cardiomyocyte Contraction Using hiPSC-Derived Cardiomyocytes

Ischemic heart disease is a significant cause of death worldwide. It has therefore been the subject of a tremendous amount of research, often with small-animal models such as rodents. However, the physiology of the human heart differs significantly from that of the rodent heart, underscoring the need for clinically relevant models to study heart disease. Here, we present a protocol to model ischemic heart disease using cardiomyocytes differentiated from human induced pluripotent stem cells (hiPS-CMs) and to quantify the damage and functional impairment of the ischemic cardiomyocytes. Exposure to 2% oxygen without glucose and serum increases the percentage of injured cells, which is indicated by staining of the nucleus with propidium iodide, and decreases cellular viability. These conditions also decrease the contractility of hiPS-CMs as confirmed by displacement vector field analysis of microscopic video images. This protocol may furthermore provide a convenient method for personalized drug screening by facilitating the use of hiPS cells from individual patients. Therefore, this model of ischemic heart disease, based on iPS-CMs of human origin, can provide a useful platform for drug screening and further research on ischemic heart disease.

We present a model of ischemic heart disease using cardiomyocytes derived from human induced pluripotent stem cells, together with a method for quantitative evaluation of tissue damage caused by ischemia. This model can provide a useful platform for drug screening and further research on ischemic heart disease.

Modelo de cardiopatía isquémica y comparación basada en vídeo de la contracción de cardiomiocitos utilizando cardiomiocitos derivados de hiPSC

Ischemic heart disease is a significant cause of death worldwide. It has therefore been the subject of a tremendous amount of research, often with ...

Mechanical Control of Relaxation Using Intact Cardiac Trabeculae

Diastolic dysfunction is a common phenotype across cardiovascular disease presentations. In addition to elevated cardiac stiffness (elevated left ventricular end-diastolic pressure), impaired cardiac relaxation is a key diagnostic indicator of diastolic dysfunction. While relaxation requires the removal of cytosolic calcium and deactivation of sarcomeric thin filaments, targeting such mechanisms has yet to provide effective treatments. Mechanical mechanisms, such as blood pressure (i.e., afterload), have been theorized to modify relaxation. Recently, we showed that modifying the strain rate of a stretch, not afterload, was both necessary and sufficient to modify the subsequent relaxation rate of myocardial tissue. The strain rate dependence of relaxation, called the mechanical control of relaxation (MCR), can be assessed using intact cardiac trabeculae. This protocol describes the preparation of a small animal model, experimental system and chamber, isolation of the heart and subsequent isolation of a trabecula, preparation of the experimental chamber, and experimental and analysis protocols. Evidence for lengthening strains in the intact heart suggests that MCR might provide new arenas for better characterization of pharmacological treatments, along with a method to assess myofilament kinetics in intact muscles. Therefore, studying the MCR may elucidate a path to novel approaches and new frontiers in the treatment of heart failure.

Rapid myocardial and cardiac relaxation is essential for normal physiology. Mechanical relaxation mechanisms are now known to be dependent on strain rate. This protocol provides an overview of the acquisition and analysis of experiments to further study the mechanical control of relaxation.

Control mecánico de la relajación con trabéculas cardíacas intactas

Diastolic dysfunction is a common phenotype across cardiovascular disease presentations. In addition to elevated cardiac stiffness (elevated left ...

Multimodality Diagnosis of Mesenteric Ischemia

Early diagnosis of mesenteric ischemia remains challenging because mesenteric ischemia presents with no key symptoms or physical findings, and no laboratory data specifically indicates intestinal tissue ischemic status before necrosis develops. While computed tomography is the standard for diagnostic imaging, there are several limitations: (1) repeated assessments are associated with increased radiation exposure and risk of renal damage; (2) the computed tomography findings can be misleading because necrosis occasionally occurs despite opacified mesenteric arteries; and (3) computed tomography is not necessarily available within the golden time of salvaging the intestines for those patients in the operating room or at a place far from the hospital. This article describes a challenge to overcome such limitations using ultrasonography and near-infrared light, including clinical studies. The former is capable of providing not only morphologic and kinetic information of the intestines but also perfusion of the mesenteric vessels in real-time without transferring the patient or exposing them to radiation. Transesophageal echocardiography enables precise assessment of mesenteric perfusion in the OR, ER, or ICU. Representative findings of mesenteric ischemia in seven aortic dissection cases are presented. Near-infrared imaging with indocyanine green helps visualize the perfusion of vessels and intestinal tissues although this application requires laparotomy. Findings in two cases (aortic aneurysm) are shown. Near-infrared spectroscopy demonstrates oxygen debt in the intestinal tissue as digital data and can be a candidate for early detection of mesenteric ischemia without laparotomy. The accuracy of these assessments has been confirmed by intraoperative inspections and postoperative course (prognosis).

This article presents a multimodal approach that aims to overcome the limitations of traditional methods in detecting mesenteric ischemia and preventing bowel necrosis. The presented technique offers a promising solution by combining state-of-the-art ultrasonography with cutting-edge near-infrared light technologies.

Diagnóstico multimodal de la isquemia mesentérica

Early diagnosis of mesenteric ischemia remains challenging because mesenteric ischemia presents with no key symptoms or physical findings, and no ...

Rodent Model of Intestinal Ischemia-Reperfusion Injury via Occlusion of the Superior Mesenteric Artery

Intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) is associated with a myriad of conditions in both veterinary and human medicine. Intestinal IRI conditions, such as gastric dilatation volvulus (GDV), mesenteric torsion, and colic, are observed in animals such as dogs and horses. An initial interruption of blood flow causes tissues to become ischemic. Although necessary to salvage viable tissue, subsequent reperfusion can induce further injury. The main mechanism responsible for IRI is free radical formation upon reperfusion and reintroduction of oxygen into damaged tissue, but there are many other components involved. The resulting local and systemic effects often impart a poor prognosis. 
Intestinal IRI has been the subject of extensive research over the past 50 years. An in vivo rodent model in which the base of the superior mesenteric artery (SMA) is temporarily ligated is currently the most common method used to study intestinal IRI. Here, we describe a model of intestinal IRI utilizing isoflurane anesthesia in 21% O2 medical air that yields reproducible injury, as demonstrated by consistent histopathology of the small intestines. Tissue injury was also assessed in the colon, liver, and kidneys.

We describe how to generate a widely used surgical model of intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) in rodents. The procedure involves occlusion of the superior mesenteric artery followed by the restoration of blood flow. This model is useful for studies investigating occlusive causes of intestinal IRI in both veterinary and human medicine.

Modelo en roedor de lesión por isquemia-reperfusión intestinal por oclusión de la arteria mesentérica superior

Intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) is associated with a myriad of conditions in both veterinary and human medicine. Intestinal IRI conditions, ...