Fuentes de financiación: este trabajo como apoyo de los Institutos Nacionales de Salud subvenciones HL067177 y HL096845 y P01AI084853 al Departamento de Bienestar Social

1. Donante de Procedimiento <ol><li> Todos los procedimientos quirúrgicos se realizaron utilizando una técnica estéril. No se administran antibióticos para el donante y los ratones receptores. </li><li> La inducción de la anestesia del ratón donante se inicia con isoflurano 5%. </li><li> El ratón está intubado orotraqueal con un catéter intravenoso de calibre 20 y luego colocado en un respirador de roedores, utilizando oxígeno al 100% a una tasa de 125 respiraciones por minuto y aproximadamente 0,5 ml de volumen corriente (2% de su peso corporal). </li><li> La anestesia se mantuvo con inhalado 1-2% de isoflurano. </li><li> El ratón donante se coloca en una posición supina, preparado con 70% de alcohol. </li><li> Laparosternotomy se realiza como una línea media combinada y la incisión transversal. </li><li> La heparina a 100 U / kg se inyecta en la vena cava inferior (VCI), desde justo por debajo del hígado. </li><li> El diafragma se corta a lo largo del enganche ventral costera hacia la columna vertebral, y la cavidad torácica, se expone mediante la reducción de ambos lados del pechopared para el cuello. </li><li> Después de una incisión en la vena cava inferior a nivel del diafragma, el apéndice auricular derecho está cortado y lavado de los pulmones con 2 ml de refrigeración (4 ° C) de lactato de Ringer inyección y 0,1 ml de heparina a través de una incisión transversal en la raíz de la arteria pulmonar ( PA) del tronco. </li><li> Detención de ventilación en los dos tercios de final de la espiración la inflación, el bloque corazón-pulmón se extirpa y se almacena en hielo (4 ° C). </li><li> El pulmón izquierdo del donante se prepara para el destinatario por la unión de los puños. El ligamento pulmonar se realiza una incisión hasta la vena pulmonar (VP). El hilo se lleva a cabo mediante la eliminación de esófago y la aorta. </li><li> Identificar la AP, que se encuentra en el aspecto más craneal del hilo, así como los bronquios adjuntos principales (Br). Diseccionar cuidadosamente la Autoridad Palestina de los bronquios. </li><li> Manguito PA está hecha de un calibre 24-intravenosa (IV) del catéter y se corta a 0,5 mm de longitud con una extensión de 0,7 mm. </li><li> Toda la superficie del manguito es entonces abrasión para facilitar anastomosismosis. </li><li> El manguito de los bronquios se deriva de un catéter de calibre 20-IV, y cortar en longitud de 1,0 mm con una extensión de 0,7 mm. </li><li> Utilizando los mismos materiales, el manguito PV varía con el peso del ratón donante. En concreto, para los ratones 24-27 gramos el tamaño del manguito es de calibre 22, 0,7 mm de longitud con una extensión de 0,7 mm. Para ratones pesan 27-32 gramos, los estudios utilizaron un catéter de calibre 20 que es de 0,7 mm de longitud con una extensión de 0,7 mm. </li><li> Los puños se insertan en los extremos distales de la AP, VP y Br y asegurado con una sutura 9-0. </li><li> El pulmón donante se vacía y se lavó con solución salina estéril con heparina estéril antes de su almacenamiento. El pulmón donante se envuelve con una gasa estéril empapada en solución salina estéril en hielo (4 ° C), que mantiene el pulmón muy limpio y estéril. </li><li> Una abrazadera de los microvasos se coloca en el bronquio para evitar la entrada de lactato de Ringer en las vías respiratorias. </li></ol> 2. Receptor Procedimiento <ol><li> La inducción de la anestesiaanestesia y la ventilación mecánica son los mismos como se ha descrito anteriormente para el donante. </li><li> La pared izquierda del pecho se afeita y prepara con el 70% de alcohol y el campo quirúrgico se cubrió. </li><li> Una toracotomía se hace en el espacio intercostal izquierdo tercero, extendiendo la incisión dorsalmente cerca de la columna vertebral, y una abrazadera microvasos colocado en los vasos pulmonares izquierdas y bronquios adyacentes al corazón. Usted puede ver PA en el aspecto del cráneo, la energía fotovoltaica en el extremo caudal del hilo y el hermano entre ellos. </li><li> Utilizando una tracción suave en la pinza hemostática para causar una tensión leve en el PA, el hermano y la fotovoltaica, el pulmón izquierdo se saca de la cavidad torácica, dejando las estructuras hiliares centrales sujeta. </li><li> El PA, PV y el hermano están aislados mediante disección roma seguido por la colocación de una sutura de 9-0 coloca libremente alrededor de la PA, PV y el hermano. </li><li> Después de la disección de la Autoridad Palestina por completo de su vaina adventicia, de una pequeña incisión transversal de aproximadamente un cuarto de la circunferencia de la nave eshecha en la pared anterior, dejando la continuación de la parte dorsal de la arteria intacta. </li><li> El pulmón donante, envuelto en una gasa fría, lactato de Ringer algodón empapada y preparado como se ha descrito anteriormente, se coloca entonces en la cavidad torácica, y puños insertado en el receptor PA, PV y Br y asegurado con 9-0 sutura. </li><li> El pinzamiento hiliar se elimina lo que permite la reperfusión y la ventilación. </li><li> Después de colocar el pulmón trasplantado de nuevo en el tórax receptor, la toracotomía se cierra con una sutura de 5-0. </li><li> El ratón se le permite recuperarse de la anestesia. La buprenorfina (0.05-0.15 mg / kg) se administra inmediatamente después de la cirugía, y por cada 8 horas durante 2-3 días después de la cirugía. </li></ol> 3. Los resultados representativos Nuestra experiencia nos ha enseñado que se requiere de varios meses de práctica repetida para alcanzar la competencia en el modelo murino de trasplante de pulmón. Después de aptitud se logra, que unLOGRADOS una tasa de 96% (96/100 cirugías consecutivas) la supervivencia perioperatoria con las muertes que ocurren dentro de siete días después de la operación. Dos muertes se debieron a hemorragias, que comenzó durante la operación, y pneumothraces fueron la causa de muerte en los otros dos ratones. Para todos los procedimientos, el tiempo de isquemia caliente fue de 14,32 ± 3,14 minutos, y el tiempo de isquemia fría fue de 58,51 ± 18,06 minutos. Tres grupos ortotópico de trasplante de pulmón fueron estudiadas: isoinjerto: C57BL / 6 → C57BL / 6, aloinjerto: C57BL/10 → C57BL / 6 y C57BL / 6 → C57BL/10. Se utilizó sólo los ratones machos pero nuestra técnica puede ser también aplicado a ratones hembra, porque no hay diferencia significativa anatómica entre los sexos. La clasificación de rechazo de la patología se realizó en forma ciega la utilización de criterios uniformes para el trasplante pulmonar clínica 7 (Tabla 1). Mientras que se observó el rechazo leve o no en el isoinjerto (C57BL / 6 → C57BL / 6), las dos combinaciones de aloinjertos desarrolló compañíasel rechazo comparable aguda o crónica (Figura 1). Por el contrario, OB fue significativamente más frecuente en el C57BL/10 → C57BL / 6 que C57BL / 6 → C57BL/10 grupo por day28 (Tabla 1). <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> C57BL / 6 → C57BL / 6 </td><td> C57BL/10 → C57BL / 6 </td><td> C57BL / 6 → C57BL/10 </td><td> P-valor </td></tr><tr><td> Rechazo de Patología &quot;A&quot; Resultados en el día 28 </td><td> 0,67 ± 0,89 </td><td> * 3,33 ± 0,82 </td><td> * 3,29 ± 0,76 </td><td> * P&gt; 0,05 </td></tr><tr><td> Ratones ob / totales en 21 y 28 días </td><td> 0/24 (0%) </td><td> ** 14/34 (42,1%) </td><td> ** 2/16 (12,5%) </td><td> ** P &lt;0,05 </td></tr></tbody></table> Tabla 1. Resultados histológicos de rechazo agudo del trasplante y la prevalencia de la bronquiolitis obliterante mensaje. Puntuación de rechazo agudo (&quot;A&quot; Resultados) por la norma crisisrios como se describe en los resultados representativos. Los datos representan la media ± desviación estándar de &quot;A&quot; Resultados en el trasplante de 28 días después. Los datos representan la cantidad y el porcentaje de ratones en cada grupo que se desarrollaron en el OB 21 y 28 días después del transplante. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3947/3947fig1.jpg" /> Figura 1. Los hallazgos macroscópicos y la histopatología en 28 días después de trasplante de pulmón. Grupo 1A representan hallazgos macroscópicos y H &amp; E de pulmón y de pulmón isoinjerto manchada ingenuo derecha. Grupo 1B y 1C representa H &amp; E y tricrómico de Masson manchada BL/10 injerto de pulmón trasplantado en receptor del ratón BL / 6, que se desarrolló OB OB y ​​no, respectivamente. La flecha blanca en 1B identifica las lesiones de OB. Grupo 1D muestra aloinjerto BL / 6 de pulmón trasplantado en receptor del ratón BL/10. Averías principal durante el procedimiento fueron como sigue. <ol><li> Desorden de la sangre de flujo: de pulmón de donantes descarga hastael color se vuelve de color blanco. El uso de una presión excesiva podría inducir edema pulmonar. Sin embargo, no empujar demasiado para evitar el edema después del trasplante. </li><li> La dificultad de inserción del manguito en el donante: Cerciorarse de que la vasculatura es de una longitud suficiente y libre de grasa y los tejidos adjuntos conectivo. </li><li> Sangrado en el sitio de la anastomosis: Utilice Q consejos para aplicar presión a la zona afectada durante unos 5 minutos. </li><li> Receptor de la sangre PA obstrucción del flujo: Principalmente causado por una torsión de la banda durante la inserción. Si el aire se observa dentro de la Autoridad Palestina a continuación, volver a hacer de la anastomosis es necesario. </li><li> Difícil anastomosis PV: Membrana de la energía fotovoltaica es muy delgada y las lágrimas con facilidad. Seleccione el tamaño del manguito adecuado e insertar directamente al PV del receptor con mucha suavidad. </li><li> Receptor de la sangre PV obstrucción del flujo: Asegúrese de que la posición y dirección de la banda. Soltar la compresión del manguito bronquial. </li><li> Neumotórax: Esto puede ser causado por cualquiera de perforación bronquial debido a la manipulation de la vía aérea, o la perforación de la superficie del pulmón debido a un trauma asociado con el procedimiento de trasplante. El primero se trata con el cierre quirúrgico del agujero en la pared las vías respiratorias, y este último es tratado por sobrecosido la fuga en la superficie del pulmón utilizando 10-0 sutura de nylon. </li></ol>

<ol>
	<li>Asimacopoulos, P. J., Molokhia, F. A., Pegg, C. A., Norman, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+transplantation+in+the+rat.">Lung transplantation in the rat.</a> Transplant Proc. 3, 583-585 (1971).</li><li>Yoshida, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+technique+of+experimental+lung+transplantation+in+rabbits.">Surgical technique of experimental lung transplantation in rabbits.</a> Ann. Thorac. Cardiovasc. Surg. 11, 7-11 (2005).</li><li>McDyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+and+murine+obliterative+bronchiolitis+in+transplant.">Human and murine obliterative bronchiolitis in transplant.</a> Proc. Am. Thorac. Soc. 4, 37-43 (2007).</li><li>Sato, M., Keshavjee, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+research:+animal+models+of+obliterative+bronchiolitis+after+lung+transplantation.">Translational research: animal models of obliterative bronchiolitis after lung transplantation.</a> Am. J. Transplant. 9, 1981-1987 (2009).</li><li>Okazaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+orthotopic+vascularized+aerated+lung+transplantation.">A mouse model of orthotopic vascularized aerated lung transplantation.</a> Am. J. Transplant. 7, 1672-1679 (2007).</li><li>Fan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralizing+IL-17+Prevents+Obliterative+Bronchiolitis+in+Murine+Orthotopic+Lung+Transplantation.">Neutralizing IL-17 Prevents Obliterative Bronchiolitis in Murine Orthotopic Lung Transplantation.</a> Am. J. Transplant. 11, 911-922 (2011).</li><li>Stewart, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revision+of+the+1996+working+formulation+for+the+standardization+of+nomenclature+in+the+diagnosis+of+lung+rejection.">Revision of the 1996 working formulation for the standardization of nomenclature in the diagnosis of lung rejection.</a> J. Heart Lung Transplant. 26, 1229-1242 (2007).</li><li>Mizuta, T., Kawaguchi, A., Nakahara, K., Kawashima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+using+a+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation using a cuff technique.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 97, 578-581 (1989).</li><li>Jungraithmayr, W. M., Korom, S., Hillinger, S., Weder, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+orthotopic,+single-lung+transplantation.">A mouse model of orthotopic, single-lung transplantation.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 137, 486-491 (2009).</li><li>Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+vascularized+right+lung+transplantation+in+the+mouse.">Orthotopic vascularized right lung transplantation in the mouse.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. , (2010).</li></ol>

No hay conflictos de interés declarado.

El trasplante de pulmón ortotópico en ratones es un reto debido a las demandas de microcirugía y la extrema fragilidad de los tejidos. La introducción de la técnica del manguito ha permitido el uso generalizado del trasplante de pulmón en ratas ortotópico 8. Esto se convirtió en la base para el desarrollo del modelo ortotópico de trasplante de pulmón en ratones en el laboratorio. En ratones y ratas, a diferencia de los seres humanos, el pulmón izquierdo contiene sólo un lóbulo y representa sólo 25% de la masa total del pulmón. Esto hace izquierdo único trasplante de pulmón factible en el modelo murino sin la necesidad de un sistema de apoyo circulatorio. Nuestros cirugías preliminares reveló que la ventilación y la perfusión del pulmón trasplantado era altamente dependiente del tamaño de PV anastomosis. Específica PV tamaño del manguito anastomótica se utilizaron para que coincida con los donantes y los receptores como se informó 9. Inapropiado del manguito de tamaño dado lugar a la atelectasia del pulmón trasplantado o dehiscencia de la Anast PVomosis. Okazaki et al informaron de la utilización de ligadura de los vasos combinado y el recorte del bronquio 5. En el presente estudio se utiliza un clip de aneurisma de todas las estructuras hiliares, lo que le sugerimos puede acortar el tiempo de isquemia caliente. Una limitación del trasplante de pulmón ortotópico izquierdo en el modelo murino es que los animales receptores puede sobrevivir después de aloinmune mediada por la necrosis de los aloinjertos 5. Por lo tanto, los estudios de supervivencia no son viables y la evaluación del injerto depende de un examen histológico del pulmón trasplantado 10. Usando esta técnica, hemos desarrollado un modelo preclínico de bronquiolitis obliterante en los ratones. Específicamente, el ratón donante es C57BL/10 y el destinatario es C57BL / 6. Esto sugiere el papel de menor importancia, y no los antígenos de histocompatibilidad más importantes, en la patogenia de la bronquiolitis obliterante 6. Además, nos han informado de la neutralización de IL-17 previene la bronquiolitis obliterante en el modelo murino. Este modol representa una nueva herramienta de investigación para el examen de un trasplante de pulmón y el progreso de los trasplantes de pulmón clínicos.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del equipo </td><td> Empresa </td><td> Catálogo número </td></tr><tr><td> Zeiss OPMI 6SFC-1880 </td><td> Prescott Inc </td><td> PMZ014 </td></tr><tr><td> Ventilador de Harvard de roedores </td><td> Aparato de Harvard </td><td> 55-7058 </td></tr><tr><td> 20-IV calibre catéter </td><td> Terumo Medical Corporation </td><td> 100510D </td></tr><tr><td> 22-IV calibre catéter </td><td> Terumo Medical Corporation </td><td> 081015S </td></tr><tr><td> 24-IV calibre catéter </td><td> Terumo Medical Corporation </td><td> 100522A </td></tr><tr><td> 9/0 Meth Virgin Blue Silk </td><td> Ashaway de línea y Cordeles Mfg CO </td><td> MBVS-90 </td></tr><tr><td> 10-0 Alcon sutura quirúrgica </td><td> Alcon Laboratories, Inc. </td><td> 8065-192101 </td></tr><tr><td> Black 5-0/18inches seda trenzada </td><td> Henry Schein </td><td> M652630 </td></tr><tr><td> Heparina sódica 1000 unidades / ml </td><td> APP Pharmaceuticals </td><td> 407156 </td></tr><tr><td> Betadine Solución </td><td> Purdue producto </td><td> 67618-150 </td></tr><tr><td> La inyección de Ringer lactato </td><td> Hospira </td><td> NDC 0409-7953-03 </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> Cepa de los ratones </td><td> Vendedor </td><td> La edad, el peso </td><td> Género, Comentarios </td></tr><tr><td> C57BL/10 </td><td> Harlan Sprague-Dawley </td><td> 8-12 semanas, 25-30g </td><td> Donante masculino, </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> Harlan Sprague-Dawley </td><td> 8-12 semanas, 25-30g </td><td> Hombre, donante o del receptor </td></tr></tbody></table> Tabla 2. Tabla de los ratones, específiIC reactivos y equipos.

development of obliterative bronchiolitis in a murine model of orthotopic lung transplantation

El trasplante de pulmón ortotópico en ratas fue reportada primero por Asimacopoulos y colegas en 1971 1. Actualmente, este método es bien aceptado y normalizado no sólo para el estudio de alo-rechazo, sino también entre cepas singénicos para examinar los mecanismos de lesión por isquemia-reperfusión después de un trasplante de pulmón. Aunque la aplicación de la rata y el otro modelo animal de gran tamaño 2 contribuido de manera significativa al esclarecimiento de estos estudios, el alcance de las investigaciones está limitado por la escasez de octavos de final y las ratas transgénicas. Dado que no hay terapias efectivas para la bronquiolitis obliterante, la principal causa de muerte en pacientes de trasplante de pulmón, se ha producido una intensa búsqueda de modelos pre-clínicos que reproducen la bronquiolitis obliterante. El modelo de aloinjerto traqueal es el más ampliamente utilizado y puede reproducir algunas de las características histopatológicas de la bronquiolitis obliterante 3. Sin embargo, la falta de un vasculat intactoUre sin conexión con vías de conducción del destinatario, e incompleto características patológicas de la bronquiolitis obliterante limita la utilidad de este modelo de 4. A diferencia del trasplante de otros órganos sólidos, los trasplantes de pulmón de ratón vascularizados sólo recientemente han sido reportados por Okazaki y sus colegas, por primera vez en 2007 5. La aplicación de los principios básicos del trasplante de pulmón de rata, nuestro laboratorio inició el modelo de bronquiolitis obliterante con menores histoincompatibles antígeno murino ortotópico de una sola izquierda trasplantes de pulmón que permite el estudio adicional de inmunopatogénesis bronquiolitis obliterante 6.

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Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Bronquiolitis obliterante es el principal obstáculo para la supervivencia a largo plazo de los receptores de trasplante de pulmón y la falta de un modelo preclínico robusta impide el examen de inmunopatogénesis bronquiolitis obliterante. A diferencia de otros trasplantes de órganos sólidos, el trasplante de pulmón de ratón vascularizado sólo recientemente ha sido desarrollado. Aquí mostramos nuestro modelo desarrollado de manera independiente después de la bronquiolitis obliterante murino ortotópico de un solo trasplante de pulmón.

El desarrollo de bronquiolitis obliterante en un modelo murino de trasplante de pulmón ortotópico

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

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Medicine

20.2K vistas.  Indiana University School of Medicine. Bronquiolitis obliterante es el principal obstáculo para la supervivencia a largo plazo de los receptores de trasplante de pulmón y la falta de un modelo preclínico robusta impide el examen de inmunopatogénesis bronquiolitis obliterante. A diferencia de otros trasplantes de órganos sólidos, el trasplante de pulmón de ratón vascularizado sólo recientemente ha sido desarrollado. Aquí mostramos nuestro modelo desarrollado de manera independiente después de la bron...

Video: Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Trasplante ortotópico aórtica: un modelo de rata para estudiar el desarrollo de la enfermedad vascular crónica

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Investigación

Medicina

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

Un modelo ortotópico de cáncer de vejiga murino

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

Small bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with short gut syndrome and failure of parenteral nutrition (irreversible intestinal failure). In specialized centers improved operative and managing strategies have led to excellent short- and intermediate term patient and graft survival while providing high quality of life 1,3. Unlike in the more common transplantation of other solid organs (i.e. heart, liver) many underlying mechanisms of graft function and immunologic alterations induced by intestinal transplantation are not entirely known6,7. Episodes of acute rejection, sepsis and chronic graft failure are the main obstacles still contributing to less favorable long term outcome and hindering a more widespread employment of the procedure despite a growing number of patients on home parenteral nutrition who would potentially benefit from such a transplant. The small intestine contains a large number of passenger leucocytes commonly referred to as part of the gut associated lymphoid system (GALT) this being part of the reason for the high immunogenity of the intestinal graft. The presence and close proximity of many commensals and pathogens in the gut explains the severity of sepsis episodes once graft mucosal integrity is compromised (for example by rejection). To advance the field of intestinal- and multiorgan transplantation more data generated from reliable and feasible animal models is needed. The model provided herein combines both reliability and feasibility once established in a standardized manner and can provide valuable insight in the underlying complex molecular, cellular and functional mechanisms that are triggered by intestinal transplantation. We have successfully used and refined the described procedure over more than 5 years in our laboratory 8-11. The JoVE video-based format is especially useful to demonstrate the complex procedure and avoid initial pitfalls for groups planning to establish an orthotopic rodent model investigating intestinal transplantation.

Small bowel transplantation has become an accepted treatment option for patients with irreversible intestinal failure. Our experimental model of orthotopic small bowel transplantation in rats serves as a reliable tool to address underlying immunologic and inflammatory processes that complicate intestinal transplantation.

El trasplante ortotópico de intestino delgado en ratas

Small  bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with  short gut syndrome and failure of parenteral nutrition ...

Orthotopic Liver Transplantation in Rats

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat liver transplantation in 1979 by Kamada et al.3, this model has remained the gold standard despite various proposed alternative techniques4. Nevertheless, its broader use is limited by its steep learning curve5.
In this video paper, we show a simple and easy-to-establish revision of Kamada's two-cuff technique. The suprahepatic vena cava anastomosis is performed manually with a running suture, and the vena porta and infrahepatic vena cava anastomoses are performed utilizing a quick-linker cuff system6. Manufacturing the quick-linker kit is shown in a separate video paper.

We present an easy-to-establish revision of the classical two-cuff technique for orthotopic liver transplantation in rat.

Trasplante ortotópico de hígado en ratas

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat ...

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as studies on graft preservation and ischemia-reperfusion injury 1,2, immunological responses 3,4, hemodynamics 5,6, and small-for-size syndrome 7. The rat OLT is among the most difficult animal models in experimental surgery and demands advanced microsurgical skills that take a long time to learn. Consequently, the use of this model has been limited. Since the reliability and reproducibility of results are key components of the experiments in which such complex animal models are used, it is essential for surgeons who are involved in rat OLT to be trained in well-standardized and sophisticated procedures for this model.
While various techniques and modifications of OLT in rats have been reported 8 since the first model was described by Lee et al. 9 in 1973, the elimination of the hepatic arterial reconstruction 10 and the introduction of the cuff anastomosis technique by Kamada et al. 11 were a major advancement in this model, because they simplified the reconstruction procedures to a great degree. In the model by Kamada et al., the hepatic rearterialization was also eliminated. Since rats could survive without hepatic arterial flow after liver transplantation, there was considerable controversy over the value of hepatic arterialization. However, the physiological superiority of the arterialized model has been increasingly acknowledged, especially in terms of preserving the bile duct system 8,12 and the liver integrity 8,13,14.
In this article, we present detailed surgical procedures for a rat model of OLT with hepatic arterial reconstruction using a 50% partial graft after ex vivo liver resection. The reconstruction procedures for each vessel and the bile duct are performed by the following methods: a 7-0 polypropylene continuous suture for the supra- and infrahepatic vena cava; a cuff technique for the portal vein; and a stent technique for the hepatic artery and the bile duct.

Orthotopic liver transplantation in rats is an indispensable experimental model for biomedical research. Here we present our surgical procedures for orthotopic rat liver transplantation with hepatic arterial reconstruction using a 50% partial graft.

Procedimientos Quirúrgicos para un modelo de rata de trasplante hepático ortotópico parcial con reconstrucción arterial hepática

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as ...

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each year. While several animal models exist for this procedure and mice are the species that is most commonly used. The reasons for using mice are the relative cost of using this species, the existence of many genetically defined strains that allow for the study of immune responses, and the existence of an extensive array of reagents that can be used to further define responses in this species. This model has been used to define factors in the cornea that are responsible for the relative immune privilege status of this tissue that enables corneal allografts to survive acute rejection in the absence of immunosuppressive therapy. It has also been used to define those factors that are most important in rejection of such allografts. Consequently, much of what we know concerning mechanisms of both corneal allograft acceptance and rejection are due to studies using a murine model of corneal transplantation. In addition to describing a model for acute corneal allograft rejection, we also present for the first time a model of late-term corneal allograft rejection.

Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

Murino Trasplante corneal: un modelo para estudiar la forma más común de trasplante de órganos sólidos

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

Método de aislados<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Perfusión pulmonar en un modelo de rata: Lecciones Aprendidas de Desarrollo de un Programa EVLP Rata

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

Preclínica modelo murino ortotópico de cáncer de próstata humano

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute respiratory distress syndrome (ARDS), characterized by neutrophilic alveolitis, and injury to both alveolar epithelium and vascular endothelium. Clinically, ARDS is defined by acute onset of hypoxemia, bilateral patchy pulmonary infiltrates and non-cardiogenic pulmonary edema. Human studies have provided us with valuable information about the physiological and inflammatory changes in the lung caused by ARDS, which has led to various hypotheses about the underling mechanisms. Unfortunately, difficulties determining the etiology of ARDS, as well as a wide range of pathophysiology have resulted in a lack of critical information that could be useful in developing therapeutic strategies.
Translational animal models are valuable when their pathogenesis and pathophysiology accurately reproduce a concept proven in both in vitro and clinical settings. Although large animal models (e.g., sheep) share characteristics of the anatomy of human trachea-bronchial tree, murine models provide a host of other advantages including: low cost; short reproductive cycle lending itself to greater data acquisition; a well understood immunologic system; and a well characterized genome leading to the availability of a variety of gene deletion and transgenic strains. A robust model of low pH induced ARDS requires a murine ALI that targets mainly the alveolar epithelium, secondarily the vascular endothelium, as well as the small airways leading to the alveoli. Furthermore, a reproducible injury with wide differences between different injurious and non-injurious insults is important.
The murine gastric acid aspiration model presented here using hydrochloric acid employs an open tracheostomy and recreates a pathogenic scenario that reproduces the low pH pneumonitis injury in humans. Additionally, this model can be used to examine interaction of a low pH insult with other pulmonary injurious entities (e.g., food particles, pathogenic bacteria).

This protocol induces acute lung injury in a mouse that has close fidelity to the pathogenesis of acid pneumonitis observed in humans. We generate a maximal acute nonlethal low pH lung injury and account for differences in rodent-human anatomic respiratory structure using an open tracheostomy coupled with circumferential pressure release.

La traqueostomía abierta ácido gástrico aspiración modelo murino de lesión pulmonar aguda Resultados en máxima no letal aguda lesión pulmonar

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart failure. Multiple small-animal models of heart transplantation have been used to study the acute and long-term effects of novel therapies. However, few are tested and demonstrated success in clinical trials. It is of critical importance to evaluate new therapies in a clinically relevant large-animal model for efficient and reliable translation of basic studies&#39;&#160;findings. Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and previously used to investigate novel cardioprotective strategies. This procedure focuses on acute ischemia-reperfusion injury and is a reliable method to investigate novel interventions which have been tested and validated in smaller experimental models, such as the murine model. We demonstrate its usefulness in assessing cardiac performance during the early post-transplantation period and other potential possibilities enabled by the model.

Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and utilized to investigate novel cardioprotective strategies.

Un modelo preclínico porcino de trasplante ortotópico de corazón

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...