Fontes de financiamento: Este trabalho apoiado pelo Instituto Nacional de Saúde subsídios HL067177 e HL096845 e P01AI084853 a DSW

1. Procedimento de Doadores <ol><li> Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados utilizando técnica estéril. Sem antibióticos são dadas para o dador eo ratos receptores. </li><li> A indução da anestesia do rato dador é iniciado com 5% de isoflurano. </li><li> O rato é orotraquealmente entubados com um cateter de calibre 20 intravenosa e, em seguida, colocado num ventilador de roedor, utilizando 100% de oxigénio, a uma taxa de 125 respirações / minuto e cerca de 0,5 ml de volume corrente (2% do seu peso corporal). </li><li> A anestesia é mantida com inalado 1-2% de isoflurano. </li><li> O rato doador é colocado em decúbito dorsal, preparado com álcool 70%. </li><li> Laparosternotomy é realizado como uma linha média combinado e incisão transversal. </li><li> A heparina a 100 U / kg é injectado na veia cava inferior (IVC), a partir de apenas abaixo do fígado. </li><li> O diafragma é cortada ao longo da ligação ventral costal para a coluna, e da cavidade torácica é exposta através do corte ambos os lados do peitoparede para o pescoço. </li><li> Após uma incisão na veia cava inferior ao nível do diafragma, a aurícula direita é cortado e os pulmões lavada com 2 ml de solução arrefecida (4 ° C) de injecção de Lactato de Ringer e 0,1 ml de heparina por meio de uma incisão transversal na raiz da artéria pulmonar ( PA tronco). </li><li> Prendendo a ventilação, dois terços de final de corrente de inflação, o bloco de coração-pulmão é excisada e armazenadas em gelo (4 ° C). </li><li> O pulmão esquerdo do doador está preparado para o destinatário mediante a anexação de algemas. O ligamento pulmonar é incisada até a veia pulmonar (PV). O hilo é trazido para fora através da remoção de esôfago e aorta. </li><li> Identificar o PA, localizado no aspecto mais cranial do hilo, bem como os brônquios principais anexas (Br). Dissecar cuidadosamente a PA do brônquio. </li><li> Manguito PA é feita a partir de uma 24-bitola intravenosa cateter (IV) e cortar a 0,5 mm de comprimento com uma extensão de 0,7 mm. </li><li> A totalidade da superfície da braçadeira é então raspada para facilitar anastomoseMOSIS. </li><li> A braçadeira para o brônquio é derivado de um cateter IV de calibre 20, e cortado em comprimento de 1,0 mm com uma extensão de 0,7 mm. </li><li> Usando os mesmos materiais, a braçadeira PV varia de acordo com o peso do rato dador. Especificamente, para ratinhos 24-27 gramas o tamanho da braçadeira é de 22 gauge, 0,7 mm de comprimento com uma extensão de 0,7 mm. Para ratinhos pesando 27-32 gramas, os estudos utilizou um cateter de calibre 20 que é de 0,7 mm de comprimento com uma extensão de 0,7 mm. </li><li> As bainhas são inseridos nas extremidades distais dos, PA PV e Br e fixado com uma sutura 9-0. </li><li> O pulmão dador é lavada e lavada com solução salina estéril com heparina estéril antes da armazenagem. O pulmão doador é então enrolado com uma gaze estéril embebida em soro fisiológico estéril em gelo (4 ° C), que mantém o pulmão muito limpo e estéril. </li><li> Uma braçadeira de microvasos é colocada sobre os brônquios para impedir a entrada de Lactato de Ringer para a via aérea. </li></ol> 2. Procedimento destinatário <ol><li> A indução de anestesiaral e ventilação mecânica são os mesmos conforme descrito acima para o doador. </li><li> A parede torácica esquerda é raspada e preparada com álcool 70% e do campo cirúrgico é coberto. </li><li> Uma incisão é feita toracotomia no terceiro espaço intercostal esquerdo, estendendo-se a incisão dorsalmente perto da coluna vertebral, e uma pinça de microvasos colocado sobre os vasos pulmonares esquerdas e brônquios adjacentes ao coração. Você pode ver PA, no aspecto cranial, PV no final do caudal do hilo e Br entre eles. </li><li> Usando a tração suave na pinça hemostática para causar tensão leve no, PA Br e PV, o pulmão esquerdo é puxado para fora da cavidade torácica, deixando as estruturas hilares centrais preso. </li><li> O PA, PV e Br são isolados por dissecção romba, seguido pela colocação de uma sutura 9-0 posicionado frouxamente ao redor do, PA e PV Br. </li><li> Após dissecção do PA completamente a partir da sua bainha adventícia, de uma pequena incisão transversal de cerca de um quarto da circunferência do navio éfeita na parede anterior, deixando a continuação da parte dorsal da artéria intacta. </li><li> O pulmão doador, enrolado em frio gaze de algodão, de Lactato de Ringer-embebida e preparada como descrito acima, é então posicionado na cavidade torácica, e punhos inserido no receptor PA, PV e Br e fixado com 9-0 sutura. </li><li> A braçadeira cruzada hilar é removido permitindo a reperfusão e ventilação. </li><li> Depois de posicionar o pulmão transplantadas de volta para o tórax do destinatário, a incisão é fechada toracotomia usando uma sutura 5-0. </li><li> O mouse é permitido recuperar da anestesia. A buprenorfina (0,05-0,15 mg / kg) é administrado imediatamente após a cirurgia, e para cada 8 horas durante 2-3 dias pós-cirurgia. </li></ol> 3. Os resultados representativos Nossa experiência nos ensinou que requer vários meses de prática repetida para se tornar proficientes no modelo de transplante de pulmão do rato. Depois de proficiência é obtido, temos umchieved uma taxa de sobrevivência de 96% (96/100 cirurgias consecutivas) perioperatório com mortes ocorrendo dentro de sete dias pós operatório. Duas mortes foram devido ao sangramento que começou no intra-operatório, e pneumothraces foram a causa de morte nos outros dois camundongos. Para todos os procedimentos, o tempo de isquemia quente foi de 14,32 ± 3,14 minutos, e tempo de isquemia fria foi de 58,51 ± 18.06 minutos. Três grupos de transplante ortotópico de pulmão foram estudados: isoenxerto: C57BL / 6 → C57BL / 6, aloenxerto: C57BL/10 → C57BL / 6 e C57BL / 6 → C57BL/10. Utilizou-se apenas ratinhos macho mas a nossa técnica pode ser também aplicado a ratinhos fêmea, porque não há diferença significativa entre os sexos anatómica. A classificação da rejeição patologia foi conduzido de forma cega, utilizando critérios padronizados para transplante de pulmão clínica 7 (Tabela 1). Considerando observamos rejeição leve ou nenhuma isoenxerto (C57BL / 6 → C57BL / 6), ambas as combinações aloenxerto desenvolvido comparejeição aguda ou crónica comparável (Figura 1). Em contraste, OB foi significativamente mais freqüente no C57BL/10 → C57BL / 6 do que C57BL / 6 → grupo C57BL/10 por day28 (Tabela 1). <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> C57BL / 6 → C57BL / 6 </td><td> C57BL/10 → C57BL / 6 </td><td> C57BL / 6 → C57BL/10 </td><td> P-valor </td></tr><tr><td> Rejeição de Patologia &quot;A&quot; Scores no dia 28 </td><td> 0,67 ± 0,89 </td><td> * 3,33 ± 0,82 </td><td> * 3,29 ± 0,76 </td><td> * P&gt; 0,05 </td></tr><tr><td> OB / mice total no dia 21 e 28 </td><td> 0/24 (0%) </td><td> ** 14/34 (42,1%) </td><td> ** 2/16 (12,5%) </td><td> ** P &lt;0,05 </td></tr></tbody></table> Tabela 1. Escores histológicos de rejeição aguda e prevalência de bronquiolite obliterante pós transplante. A pontuação de rejeição aguda (&quot;A&quot; Scores) por padrão critérios como descrito nos resultados representativos. Os dados representam a média ± SD de &quot;a&quot; Scores nos dias pós-transplante 28. Os dados representam a quantidade ea percentagem de ratinhos em cada grupo que desenvolveu OB no dia 21 e 28 após a transplantação. <img alt="A Figura 1" src="/files/ftp_upload/3947/3947fig1.jpg" /> Figura 1. Achados macroscópicos e histopatológicos em 28 dias após o transplante de pulmão. Painel 1A representam achados macroscópicos e H &amp; E pulmão isoenxerto manchado e pulmão direito ingênuo. Painel 1B e 1C representa H &amp; E e enxerto de Masson pulmão Trichrome manchado BL/10 transplantadas para BL / 6 destinatário mouse, que desenvolveu OB OB e não, respectivamente. A seta branca 1B identifica lesões de OB. 1D Painel mostra BL / 6 enxerto de pulmão transplantado para BL/10 destinatário mouse. Resolução de problemas durante o processo principal foram os seguintes. <ol><li> Distúrbio do fluxo sanguíneo: pulmão doador de embutir, atéa cor torna-se na cor branca. A utilização de excesso de pressão poderia induzir edema pulmonar. Mas não empurrar demais para evitar o edema após o transplante. </li><li> Dificuldade de inserção braçadeira para o doador: Determinar que a vasculatura é de comprimento suficiente e livre de gordura e tecidos anexas conjuntivo. </li><li> Hemorragia no local da anastomose: Use Q dicas para aplicar pressão no local afetado para aproximadamente 5 minutos. </li><li> Destinatário PA obstrução do fluxo sangüíneo: Principalmente causada pela torção do punho durante a inserção. Se o ar é observada dentro do PA, em seguida, voltar a fazer da anastomose é necessário. </li><li> Anastomose PV difícil: Membrana de PV é muito fina e facilmente lágrimas. Selecione o tamanho do manguito adequado e insira direto para o PV do destinatário muito delicadamente. </li><li> Destinatário PV obstrução do fluxo sangüíneo: Certifique-se a posição ea direção do manguito. Solte a compressão do manguito brônquica. </li><li> Pneumotórax: Isto pode ser causado por uma perfuração brônquica, devido à manipulation da via aérea, ou perfuração da superfície pulmonar devido a trauma associado com o procedimento do transplante. O anterior é tratado com o fechamento cirúrgico do buraco dentro da parede das vias aéreas, e este último é tratado por luva o vazamento sobre a superfície pulmonar, utilizando 10-0 sutura de nylon. </li></ol>

<ol>
	<li>Asimacopoulos, P. J., Molokhia, F. A., Pegg, C. A., Norman, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+transplantation+in+the+rat.">Lung transplantation in the rat.</a> Transplant Proc. 3, 583-585 (1971).</li><li>Yoshida, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+technique+of+experimental+lung+transplantation+in+rabbits.">Surgical technique of experimental lung transplantation in rabbits.</a> Ann. Thorac. Cardiovasc. Surg. 11, 7-11 (2005).</li><li>McDyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+and+murine+obliterative+bronchiolitis+in+transplant.">Human and murine obliterative bronchiolitis in transplant.</a> Proc. Am. Thorac. Soc. 4, 37-43 (2007).</li><li>Sato, M., Keshavjee, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+research:+animal+models+of+obliterative+bronchiolitis+after+lung+transplantation.">Translational research: animal models of obliterative bronchiolitis after lung transplantation.</a> Am. J. Transplant. 9, 1981-1987 (2009).</li><li>Okazaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+orthotopic+vascularized+aerated+lung+transplantation.">A mouse model of orthotopic vascularized aerated lung transplantation.</a> Am. J. Transplant. 7, 1672-1679 (2007).</li><li>Fan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralizing+IL-17+Prevents+Obliterative+Bronchiolitis+in+Murine+Orthotopic+Lung+Transplantation.">Neutralizing IL-17 Prevents Obliterative Bronchiolitis in Murine Orthotopic Lung Transplantation.</a> Am. J. Transplant. 11, 911-922 (2011).</li><li>Stewart, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revision+of+the+1996+working+formulation+for+the+standardization+of+nomenclature+in+the+diagnosis+of+lung+rejection.">Revision of the 1996 working formulation for the standardization of nomenclature in the diagnosis of lung rejection.</a> J. Heart Lung Transplant. 26, 1229-1242 (2007).</li><li>Mizuta, T., Kawaguchi, A., Nakahara, K., Kawashima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+using+a+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation using a cuff technique.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 97, 578-581 (1989).</li><li>Jungraithmayr, W. M., Korom, S., Hillinger, S., Weder, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+orthotopic,+single-lung+transplantation.">A mouse model of orthotopic, single-lung transplantation.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 137, 486-491 (2009).</li><li>Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+vascularized+right+lung+transplantation+in+the+mouse.">Orthotopic vascularized right lung transplantation in the mouse.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. , (2010).</li></ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Transplante de pulmão em camundongos ortotópico é um desafio devido às exigências de microcirurgia e extrema fragilidade dos tecidos. Introdução da técnica de manguito tem permitido o uso generalizado do transplante pulmonar ortotópico em ratos 8. Isto tornou-se a base para o desenvolvimento do modelo ortotópico de pulmão transplante em ratinhos no nosso laboratório. Em ratinhos e ratos, ao contrário dos humanos, o pulmão esquerdo contém apenas um lobo e faz-se apenas 25% da massa total do pulmão. Isto faz com que a esquerda de um único transplante de pulmão viável no modelo murino sem a necessidade de um sistema de suporte circulatório. Nossas cirurgias preliminares revelaram que a ventilação e perfusão do pulmão transplantado era altamente dependente do tamanho do PV anastomose. Específico PV tamanho do manguito anastomose foram utilizados para combinar com doadores e destinatários conforme relatado 9. Inadequado do manguito dimensionamento resultou em qualquer atelectasia do pulmão transplantado ou deiscência da anast PVomosis. Okazaki et al relataram o uso da ligadura dos vasos combinado e recorte o 5 brônquio. No estudo atual, usamos um clipe de aneurisma para todas as estruturas hilares, que sugerimos pode encurtar o tempo de isquemia quente. Uma limitação do transplante ortotópico de pulmão esquerdo no modelo murino é que os animais receptores podem sobreviver após aloimune mediada necrose dos seus aloenxertos 5. Portanto, estudos de sobrevivência não são viáveis ​​e avaliação do enxerto depende de exame histológico do pulmão transplantado 10. Usando esta técnica, temos desenvolvido um modelo pré-clínico bronquiolite obliterante em camundongos. Especificamente, o rato dador é C57BL/10 eo receptor é C57BL / 6. Isto sugere que o papel de menor, e não principais antigénios, de histocompatibilidade na patogénese bronquiolite obliterante 6. Além disso, têm relatado neutralização da IL-17 impede bronquiolite obliterante no modelo murino. Este modol representa uma ferramenta de pesquisa inovadora para o exame do transplante de pulmão e do avanço de transplantes clínicos.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do equipamento </td><td> Companhia </td><td> Catálogo número </td></tr><tr><td> Zeiss OPMI 6SFC-1880 </td><td> Inc Prescott </td><td> PMZ014 </td></tr><tr><td> Harvard Rodent ventilador </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 55-7058 </td></tr><tr><td> 20-gauge cateter IV </td><td> Terumo Medical Corporation </td><td> 100510D </td></tr><tr><td> 22 gauge cateter IV </td><td> Terumo Medical Corporation </td><td> 081015S </td></tr><tr><td> 24 gauge cateter IV </td><td> Terumo Medical Corporation </td><td> 100522A </td></tr><tr><td> 9/0 Meth Virgin Blue Silk </td><td> Ashaway Linha e Barbante Mfg CO </td><td> MBVS-90 </td></tr><tr><td> 10-0 Sutura Alcon Surgical </td><td> Alcon Laboratories, Inc </td><td> 8065-192101 </td></tr><tr><td> Black trançados 5-0/18inches Seda </td><td> Henry Schein </td><td> M652630 </td></tr><tr><td> Heparina sódica 1000 unidades / ml </td><td> APP Pharmaceuticals </td><td> 407156 </td></tr><tr><td> Solução Betadine </td><td> Purdue produto </td><td> 67618-150 </td></tr><tr><td> Injeção de Ringer com lactato </td><td> Hospira </td><td> NDC 0409-7953-03 </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> A estirpe de ratos </td><td> Vendedor </td><td> Idade, peso </td><td> Sexo, Comentários </td></tr><tr><td> C57BL/10 </td><td> Harlan Sprague-Dawley </td><td> 8-12 semanas, 25-30g </td><td> Doador, do sexo masculino </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> Harlan Sprague-Dawley </td><td> 8-12 semanas, 25-30g </td><td> Doadores do sexo masculino, ou o destinatário </td></tr></tbody></table> Tabela 2. Tabela de camundongos, especiic reagentes e equipamento.

development of obliterative bronchiolitis in a murine model of orthotopic lung transplantation

Transplante de pulmão ortotópico em ratos foi primeiramente relatada por Asimacopoulos e colegas em 1971 1. Actualmente, este método é bem aceite e padronizada não só para o estudo de alo-rejeição, mas também entre as estirpes singeneicos para o exame de mecanismos de isquemia-reperfusão após o transplante de pulmão. Embora a aplicação do rato e modelo animal outra grande 2 contribui significativamente para a elucidação destes estudos, o âmbito de aplicação destas investigações é limitada pela escassez de knockout e ratos transgénicos. Devido a não terapias eficazes para bronquiolite obliterante, a principal causa de morte em pacientes de transplante de pulmão, tem havido uma intensa busca por modelos pré-clínicos que reproduzem bronquiolite obliterante. O modelo do enxerto traqueal é o mais usado e pode reproduzir algumas das características histopatológicas de bronquiolite obliterante 3. No entanto, a falta de um vasculat intactaure sem conexão com vias aéreas de condução do destinatário, e incompletos características patológicas da bronquiolite obliterante limitar a utilidade do modelo 4. Ao contrário de outros transplante de órgãos sólidos, transplantes de pulmão de rato vascularizados só recentemente foram relatados por Okazaki e colaboradores, pela primeira vez em 2007 5. Aplicando os princípios básicos do transplante de pulmão de rato, o nosso laboratório iniciou o modelo de bronquiolite obliterante com menores histoincompatible antígenos murinos ortotópicos transplantes único pulmão esquerdo que permite o estudo mais aprofundado da imunopatogenia bronquiolite obliterante 6.

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Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Bronquiolite obliterante é o impedimento-chave para a sobrevivência a longo prazo de transplantados de pulmão e à falta de um modelo robusto pré-clínica impede examinar imunopatogênese bronquiolite obliterante. Ao contrário de outros transplantes de órgãos sólidos, o transplante de pulmão vascularizado do mouse tem apenas recentemente foram desenvolvidos. Aqui nós mostramos o nosso modelo de bronquiolite obliterante desenvolvida de forma independente após murino de transplante de pulmão único-ortotópico.

Desenvolvimento de bronquiolite obliterante em um modelo murino de transplante de pulmão ortotópico

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

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Research

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Medicine

20.1K visualizações.  Indiana University School of Medicine. Bronquiolite obliterante é o impedimento-chave para a sobrevivência a longo prazo de transplantados de pulmão e à falta de um modelo robusto pré-clínica impede examinar imunopatogênese bronquiolite obliterante. Ao contrário de outros transplantes de órgãos sólidos, o transplante de pulmão vascularizado do mouse tem apenas recentemente foram desenvolvidos. Aqui nós mostramos o nosso modelo de bronquiolite obliterante desenvolvida de forma independente após mu...

Vídeo: Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Transplante ortotópico de aorta: um modelo de rato para estudar o desenvolvimento de vasculopatia crônica

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Medicina

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

Um modelo ortotópico de câncer de bexiga murino

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

Small bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with short gut syndrome and failure of parenteral nutrition (irreversible intestinal failure). In specialized centers improved operative and managing strategies have led to excellent short- and intermediate term patient and graft survival while providing high quality of life 1,3. Unlike in the more common transplantation of other solid organs (i.e. heart, liver) many underlying mechanisms of graft function and immunologic alterations induced by intestinal transplantation are not entirely known6,7. Episodes of acute rejection, sepsis and chronic graft failure are the main obstacles still contributing to less favorable long term outcome and hindering a more widespread employment of the procedure despite a growing number of patients on home parenteral nutrition who would potentially benefit from such a transplant. The small intestine contains a large number of passenger leucocytes commonly referred to as part of the gut associated lymphoid system (GALT) this being part of the reason for the high immunogenity of the intestinal graft. The presence and close proximity of many commensals and pathogens in the gut explains the severity of sepsis episodes once graft mucosal integrity is compromised (for example by rejection). To advance the field of intestinal- and multiorgan transplantation more data generated from reliable and feasible animal models is needed. The model provided herein combines both reliability and feasibility once established in a standardized manner and can provide valuable insight in the underlying complex molecular, cellular and functional mechanisms that are triggered by intestinal transplantation. We have successfully used and refined the described procedure over more than 5 years in our laboratory 8-11. The JoVE video-based format is especially useful to demonstrate the complex procedure and avoid initial pitfalls for groups planning to establish an orthotopic rodent model investigating intestinal transplantation.

Small bowel transplantation has become an accepted treatment option for patients with irreversible intestinal failure. Our experimental model of orthotopic small bowel transplantation in rats serves as a reliable tool to address underlying immunologic and inflammatory processes that complicate intestinal transplantation.

Transplante de intestino delgado de ratos ortotópico

Small  bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with  short gut syndrome and failure of parenteral nutrition ...

Orthotopic Liver Transplantation in Rats

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat liver transplantation in 1979 by Kamada et al.3, this model has remained the gold standard despite various proposed alternative techniques4. Nevertheless, its broader use is limited by its steep learning curve5.
In this video paper, we show a simple and easy-to-establish revision of Kamada's two-cuff technique. The suprahepatic vena cava anastomosis is performed manually with a running suture, and the vena porta and infrahepatic vena cava anastomoses are performed utilizing a quick-linker cuff system6. Manufacturing the quick-linker kit is shown in a separate video paper.

We present an easy-to-establish revision of the classical two-cuff technique for orthotopic liver transplantation in rat.

Transplante hepático ortotópico experimental em ratos

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat ...

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each year. While several animal models exist for this procedure and mice are the species that is most commonly used. The reasons for using mice are the relative cost of using this species, the existence of many genetically defined strains that allow for the study of immune responses, and the existence of an extensive array of reagents that can be used to further define responses in this species. This model has been used to define factors in the cornea that are responsible for the relative immune privilege status of this tissue that enables corneal allografts to survive acute rejection in the absence of immunosuppressive therapy. It has also been used to define those factors that are most important in rejection of such allografts. Consequently, much of what we know concerning mechanisms of both corneal allograft acceptance and rejection are due to studies using a murine model of corneal transplantation. In addition to describing a model for acute corneal allograft rejection, we also present for the first time a model of late-term corneal allograft rejection.

Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

Murino transplante de córnea: Um modelo para estudar a forma mais comum de Transplante de Órgãos Sólidos

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

Método de Isolado<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Perfusão pulmonar em um modelo de rato: Lições aprendidas com o desenvolvimento de um Programa PPEV Rat

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

Pré-clínica Ortotópico Modelo murino de cancro da próstata humano

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute respiratory distress syndrome (ARDS), characterized by neutrophilic alveolitis, and injury to both alveolar epithelium and vascular endothelium. Clinically, ARDS is defined by acute onset of hypoxemia, bilateral patchy pulmonary infiltrates and non-cardiogenic pulmonary edema. Human studies have provided us with valuable information about the physiological and inflammatory changes in the lung caused by ARDS, which has led to various hypotheses about the underling mechanisms. Unfortunately, difficulties determining the etiology of ARDS, as well as a wide range of pathophysiology have resulted in a lack of critical information that could be useful in developing therapeutic strategies.
Translational animal models are valuable when their pathogenesis and pathophysiology accurately reproduce a concept proven in both in vitro and clinical settings. Although large animal models (e.g., sheep) share characteristics of the anatomy of human trachea-bronchial tree, murine models provide a host of other advantages including: low cost; short reproductive cycle lending itself to greater data acquisition; a well understood immunologic system; and a well characterized genome leading to the availability of a variety of gene deletion and transgenic strains. A robust model of low pH induced ARDS requires a murine ALI that targets mainly the alveolar epithelium, secondarily the vascular endothelium, as well as the small airways leading to the alveoli. Furthermore, a reproducible injury with wide differences between different injurious and non-injurious insults is important.
The murine gastric acid aspiration model presented here using hydrochloric acid employs an open tracheostomy and recreates a pathogenic scenario that reproduces the low pH pneumonitis injury in humans. Additionally, this model can be used to examine interaction of a low pH insult with other pulmonary injurious entities (e.g., food particles, pathogenic bacteria).

This protocol induces acute lung injury in a mouse that has close fidelity to the pathogenesis of acid pneumonitis observed in humans. We generate a maximal acute nonlethal low pH lung injury and account for differences in rodent-human anatomic respiratory structure using an open tracheostomy coupled with circumferential pressure release.

Abrir traqueostomia ácido gástrico aspiração Modelo murino de lesão pulmonar aguda Resultados em Maximal aguda não-letal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart failure. Multiple small-animal models of heart transplantation have been used to study the acute and long-term effects of novel therapies. However, few are tested and demonstrated success in clinical trials. It is of critical importance to evaluate new therapies in a clinically relevant large-animal model for efficient and reliable translation of basic studies&#39;&#160;findings. Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and previously used to investigate novel cardioprotective strategies. This procedure focuses on acute ischemia-reperfusion injury and is a reliable method to investigate novel interventions which have been tested and validated in smaller experimental models, such as the murine model. We demonstrate its usefulness in assessing cardiac performance during the early post-transplantation period and other potential possibilities enabled by the model.

Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and utilized to investigate novel cardioprotective strategies.

Um modelo pré-clínico porcino de transplante cardíaco ortotópico

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation of human liver transplantation due to the absence of arterial reconnection. Described here is a modified transplantation procedure that includes the incorporation of hepatic artery (HA) reconnection, leading to a marked improvement in transplant outcomes. With a mean anhepatic time of 12 min and 14 s, HA reconnection results in improved perfusion of the transplanted liver and an increase in long-term recipient survival from 37.5% to 88.2%. This protocol includes the use of 3D-printed cuffs and holders to connect the portal vein and infrahepatic inferior vena cava. It can be implemented for studying multiple aspects of liver transplantation, from immune response and infection to technical aspects of the procedure. By incorporating a simple and practical method for arterial reconnection using a microvascular technique, this modified rat OLT protocol closely mimics aspects of human liver transplantation and will serve as a valuable and clinically relevant research model.

The goal of this study is to modify the rat orthotopic liver transplant model to better represent human liver transplantation and improve recipient survival. The presented method reestablishes hepatic arterial inflow by connecting the donor liver&#39;s common hepatic artery to the recipient liver&#39;s proper hepatic artery.

Complicações reduzidas após reconexão arterial em um modelo de rato de transplante de fígado ortotópico

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...