Los autores agradecen a Dr. F. Cordeiro del CCI para las discusiones útiles sobre tratamiento estadístico de los datos. Laboratorios especializados en el análisis de la NIC en matrices biológicas que proporcionaron resultados para ser utilizado como asignaron valor en PTs y son reconocidos laboratorios que participaron en el estudio PTs.

Nota: todo el material utilizado debe ser descontaminados con el 10% (m/v) HNO 3 y enjuagar al menos dos veces con agua desionizada.
 1. hidrólisis <ol><li>pesar con precisión aprox. 0.5 a 1 g de muestra liofilizada (o la cantidad equivalente de muestra homogeneizada recién por ejemplo 1 a 4 g) en un tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL con tornillo cap.</li>
	<li>Agregar 4,1 mL de agua desionizada.</li>
	<li>Agitación con un agitador mecánico por unos 5 min hasta que la muestra esté completamente húmeda.</li>
	<li>Añadir 18.4 mL de ácido clorhídrico concentrado (HCl), no menos que el 37% m / v.</li>
	<li>Agitación con un agitador mecánico durante 15 min.</li>
	<li>Dejar reposar durante 12-15 h (por ejemplo durante la noche).</li>
</ol> 2. Extracción <ol><li>añadir 2 mL de ácido bromhídrico (HBr) no menos que 48% m/v y 1 mL de sulfato de hidracina (N 2 H 6 SO 4) solución (15 mg/mL) a la muestra hidrolizada.</li>
	<li>Agitar durante 30 s con un agitador mecánico.</li>
	<li>Añadir 10 mL de cloroformo (CHCl 3).</li>
	<li>Agitar durante 5 min con un agitador mecánico.</li>
	<li>Centrifugar durante 5 minutos a 800 x g.</li>
	<li>Pipetear la fase de cloroformo (fase inferior) en otro tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL.</li>
	<li>Añadir otra vez 10 mL de cloroformo a la restante fase ácida y repetir la extracción. Al final unos 20 mL de cloroformo deben han sido recogido. Tenga cuidado de evitar la contaminación cruzada de la fase ácida.</li>
</ol> 3. Limpiar de la fase de cloroformo <ol><li>centrífuga de las fases de cloroformo agrupado durante 5 minutos a 800 x g. El tiempo de centrifugación o velocidad puede aumentarse si es necesario para lograr una clara separación de las dos fases.</li>
	<li>Elimine los residuos de ácido de la fase restante en el cloroformo con una pipeta de 1 mL. Este paso es crucial. Los residuos de ácido de la fase restante en la fase de cloroformo dará lugar a resultados de iAs sobrestimada porque todas las especies de arsénico en la muestra están presentes en la fase ácida.</li>
	<li>Filtro a través de una membrana PTFE hidrofóbica (25 mm de diámetro) para eliminar los residuos restantes de la fase sólida o ácido presentes en la fase de cloroformo y recoger la fase de cloroformo en un tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL.</li>
</ol> 4. Extracción de la parte posterior <ol><li>añadir 10 mL de 1 M de HCl para extraer nuevamente iAs de la fase de cloroformo recogidos después del paso de filtración.</li>
	<li>Agitar durante 5 min con un agitador mecánico.</li>
	<li>Centrifugar durante 5 minutos a 800 x g.</li>
	<li>Pipetear el ácido fase (fase superior) y vierta en un vaso de cristal 250 mL (por ejemplo Pyrex) por mineralización.</li>
	<li>Repetir la extracción de la parte posterior y combinar las fases recogidas de HCl.</li>
</ol> 5. Mineralización de la muestra Nota: este paso permite la eliminación de interferencias y de la concentración en muestras de que la fracción de masa de iAs está cerca o por debajo del límite de cuantificación, y se omite con frecuencia por los laboratorios que utilizan este protocolo con ICP-MS para la determinación final en vez de HG-AAS.
<ol><li>Suspender 20 g de nitrato de magnesio hexahidratado [Mg (NO 3) 2 6 H 2 O] y 2 g de óxido de magnesio (MgO) en 100 mL de agua desionizada. Añadir 2,5 mL de esta suspensión en el vaso de vidrio. Agitar la suspensión añadiendo para evitar precipitación.</li>
	<li>Añadir 10 mL de concentrado HNO 3 de al menos 65% m/v y evaporar a sequedad en un baño de arena (o una placa térmica), evitando cualquier proyecciones. Para verificar que las muestras estén totalmente secas, coloque un vidrio de reloj sobre el vaso de vidrio y compruebe que no hay condensación se forma.</li>
	<li>Cubrir los vasos con los vidrios de reloj y coloque en un horno mufla a una temperatura inicial no superior a 150 º c y aumentar progresivamente la temperatura de 425 ± 25 ° C a una velocidad de 50 ° C/h. mantener a 425 ° C por 12 h. Este paso es vital. Para evitar cualquier proyecciones la tasa de aumento de temperatura debe ser aplicada estrictamente.</li>
	<li>Permitir que las cenizas se enfríe a temperatura ambiente.</li>
	<li>Añadir 0,5 mL de agua desionizada mojar la ceniza y luego añadir 5 mL de HCL de 6 M. Tenga cuidado de recuperar las cenizas de las paredes del vaso de vidrio. Disolver las cenizas completamente, temblando si es necesario.</li>
	<li>Añadir 5 mL de la reducción de agente, que se prepara disolviendo 5 g de yoduro de potasio (KI) y 5 g de ácido ascórbico en 100 mL de agua desionizada, y esperar 30 minutos para lograr una reducción cuantitativa de iAs de as (III).</li>
	<li>La solución a través de un papel de Whatman número 1 o equivalente del filtro y recoger en un tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL. Enjuagar el vaso de cristal dos veces con 6 M HCl. recoger los líquidos de enjuague de 25 mL del tubo y hacen hasta un volumen final con 6 M de HCl Nota: cuando la concentración de NIC en una muestra se espera que sea cerca o por debajo del límite de cuantificación del método (0,010 mg/kg) , o por el contrario, alta, los pasos de mineralización 5.5-5.7 deben modificarse utilizando los volúmenes dados en la tabla 1, que proporcionaría un límite inferior de cuantificación. Nuevamente disueltas y reducidas previamente muestras son estables durante 24 h a 4 ° C. Por lo menos dos espacios en blanco de reactivo deben ser usados para el proceso analítico general.</li>
</ol> 6. Calibración Nota: para propósitos de cuantificación utilizan una curva de calibración externa de as (III) en el rango 0.5 - 10 μg/L. Use un as (v) disponibles en el mercado certificada solución estándar de 1000 mg/L para la construcción de la calibración curva aplicando diluciones subsecuentes.
<ol><li>Preparar un 10 mg/L de solución estándar de as (v) Pipetear 1 mL de la solución estándar de 1000 mg/L en un matraz aforado de 100 mL y enrasar con 6 M de HCl.</li>
	<li>Preparar un 0,1 mg/L solución estándar de as (v) Pipetear 1 mL de la solución estándar de as (v) en un matraz aforado de 100 mL 10 mg/L y llenar hasta la marca con 6 M de HCl.</li>
	<li>Preparar un 25 μg/L as (v) solución Pipetear 25 mL de la solución estándar de as (v) en un matraz aforado de 100 mL 0,1 mg/L y llenar hasta la marca con 6 M de HCl.</li>
	<li>Preparar la curva de calibración de as (III) como sigue: pipetear de 25 μg/L solución estándar de as (v) los volúmenes dados en la tabla 2 en matraz aforado de 50 mL, añadir 10 mL de la solución de la reducción en cada Fiola, esperar 30 min, luego llenar hasta la marca con 6 M de HCl. Otros volúmenes son convenientes siempre que mantienen las proporciones descritas.</li>
	<li>Preparar una blanco de calibración como sigue: Pipetear 10 mL 6 M de HCl y 10 mL previamente reducir la solución en un matraz aforado de 50 mL. Espere 30 minutos y llene a la marca con 6 M.</li>
	<li>Utilizar los estándares marcados como QC1 y QC2 en la tabla 2 como control de calidad: QC1 asegura que la cuantificación a nivel de baja concentración es correcta y QC2, asegura que la respuesta es estable en altas concentraciones, con ninguna deriva significativa en tiempo.</li>
</ol> 7. Determinación espectrómetro de absorción de <ol><li>uso una atómica equipado con un muestreador automático, un sistema de generación de hidruro de inyección de flujo y una célula electro-térmica de calefacción de cuarzo para fines de detección y cuantificación, siguiendo el instrumental condiciones para la cuantificación de iAs FI-HG-AAS que se enumeran en la tabla 3.</li>
</ol> 8. Cuantificación <ol><li>calcular el iAs fracción de masa en las muestras analizadas (expresada en mg/kg), utilizando la siguiente ecuación: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/55953/55953eq1.jpg" /> donde: C x: concentración en el extracto (μg/L), calculada a partir de la curva de calibración C BI: concentración en la muestra en blanco de reactivo (μg/L), extrapolada de la curva de calibración V: volumen Final de la etapa de mineralización de muestra (5.7), generalmente V = 25 mL w: peso de muestra ( en gramos)</li></ol>

<ol>
	<li>European Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Commission Regulation (EC) 1881/2006 setting maximum levels for certain contaminants in foodstuffs. , (2006).</li><li>EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scientific+Opinion+on+Arsenic+in+Food.">Scientific Opinion on Arsenic in Food.</a> EFSA J. 7 (10), 1351 (2009).</li><li>European Food Safety Authority. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+exposure+to+inorganic+arsenic+in+the+European+population.">Dietary exposure to inorganic arsenic in the European population.</a> EFSA J. 12 (3), 3597 (2014).</li><li>de la Calle, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+the+determination+of+inorganic+arsenic+in+rice+depend+on+the+method?.">Does the determination of inorganic arsenic in rice depend on the method?.</a> TrAC. 30 (4), 641-651 (2011).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GB/T5009.11-2003.">GB/T5009.11-2003.</a> Determination of total arsenic and abio-arsenic in foods. , (2003).</li><li>European Committee for Standardisation. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> EN 15517:2008 "Determination of trace elements-Determination of inorganic As in seaweed by hydride generation atomic absorption spectrometry (HG-AAS) after digestion". , (2008).</li><li>de la Calle, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+it+possible+to+agree+on+a+value+for+inorganic+arsenic+in+food?+The+outcome+of+IMEP-112.">Is it possible to agree on a value for inorganic arsenic in food? The outcome of IMEP-112.</a> Anal Bioanal Chem. 404 (8), 2475-2488 (2012).</li><li>Schmeisser, E., Goessler, W., Kienzl, N., Francesconi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Volatile+analytes+formed+from+arsenosugars:+determination+by+HPLC-HG-ICPMS+and+implications+for+arsenic+speciation+analyses.">Volatile analytes formed from arsenosugars: determination by HPLC-HG-ICPMS and implications for arsenic speciation analyses.</a> Anal. Chem. 76 (2), 418-423 (2004).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> EN 16802:2016. Foodstuffs. Determination elements and their chemical species. Determination of inorganic arsenic in foodstuffs of marine and plant origin by anion-exchange HPLC-ICP-MS. , (2016).</li><li>European Committee for Standardisation. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Animal feeding stuffs &#8211; Determination of inorganic arsenic by hydride generation atomic absorption spectrometry (HG-AAS) after microwave extraction and separation by solid phase extraction (SPE). , (2012).</li><li>Rasmussen, R. R., Qian, Y., Sloth, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SPE+HG-AAS+method+for+the+determination+of+inorganic+arsenic+in+rice.+Results+from+method+validation+studies+an+a+survey+on+rice+products.">SPE HG-AAS method for the determination of inorganic arsenic in rice. Results from method validation studies an a survey on rice products.</a> Anal Bioanal Chem. 405 (24), 7851-7857 (2013).</li><li>Rasmussen, R. R., Hedegaard, R. V., Larsen, E. H., Sloth, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+method+for+the+determination+of+inorganic+arsenic+in+rice.+Results+from+method+validation+studies+and+a+survey+on+rice+products.">Development and validation of a method for the determination of inorganic arsenic in rice. Results from method validation studies and a survey on rice products.</a> Anal Bioanal Chem. 403, 2825-2834 (2012).</li><li>Fiamegkos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+of+a+method+based+on+atomic+absorption+spectrometry+to+determine+inorganic+arsenic+in+food:+Outcome+of+the+collaborative+trial+IMEP-41.">Accuracy of a method based on atomic absorption spectrometry to determine inorganic arsenic in food: Outcome of the collaborative trial IMEP-41.</a> Food Chem. 213, 169-179 (2016).</li><li>Llorente-Mirandes, T., Barbero, M., Rubio, R., L&#243;pez-S&#225;nchez, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence+of+inorganic+arsenic+in+edible+Shiitake+(Lentinula+edodes)+Products.">Occurrence of inorganic arsenic in edible Shiitake (Lentinula edodes) Products.</a> Food Chem. 158, 207-215 (2014).</li><li>de la Calle, M. B., Linsinger, T., Emteborg, H., Charoud-Got, J., Verbist, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Report+of+the+seventh+interlaboratory+comparison+organised+by+the+European+Union-Reference+Laboratory+for+Heavy+Metals+in+Feed+and+Food.">Report of the seventh interlaboratory comparison organised by the European Union-Reference Laboratory for Heavy Metals in Feed and Food.</a> IMEP-107: Total and inorganic As in rice. , (2010).</li><li>Cordeiro, F., Cizek-Stroh, A., de la Calle, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+total+and+inorganic+arsenic+in+rice.">Determination of total and inorganic arsenic in rice.</a> IRMM-PT-43 Proficiency Test Report. , (2016).</li><li>de la Calle, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IMEP-112: Total and inorganic arsenic in wheat, vegetable food and algae. , (2011).</li><li>Fiamegkos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+total+As,+Cd,+Pb,+Hg+and+inorganic+arsenic+in+chocolate.">Determination of total As, Cd, Pb, Hg and inorganic arsenic in chocolate.</a> EURL-HM-20 Proficiency test Report. , (2015).</li><li>ISO-Geneva (CH), International Organization for Standardization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ISO 17043: Conformity assessment - General requirements for proficiency testing. , (2010).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Un paso crítico en el protocolo descrito es el limpiar de la fase de cloroformo (paso 3.2) porque cualquier fase ácida residuos restantes en la fase de cloroformo conducirá a resultados de iAs sobrestimada puesto que todas las especies de arsénico en la muestra están presentes en el ácido fase. Esto es de particular relevancia cuando se analizan muestras marinas debido a la presencia de una gran cantidad de especies orgánicas, que podrían explicar la mayor parte de la fracción de masa de arsénico presente en la muestra. El uso de una membrana hidrofóbica de PTFE (3.3) es de suma importancia. Si una emulsión se forma durante la extracción de iAs en cloroformo, puede aumentarse la velocidad de centrifugación (3.1). También pueden aplicarse otros métodos tradicionales para eliminar las emulsiones. Otro paso fundamental es la mineralización (paso 5.3). La tasa de aumento de temperatura debe ser aplicada estrictamente para evitar cualquier proyecciones que reducirían la recuperación de iAs conduce a un sesgo negativo sin control y podrían ser peligroso para el analista.
Como se mencionó anteriormente algunos laboratorios han utilizado el método evaluado utilizando ICP-MS en lugar de FI-HG-AAS. En tal caso no es necesario el paso de digestión seca (paso 5 en el protocolo) y la fase de HCl de 1 M puede introducirse en el ICP-MS. En el caso de HG-AAS, debido a su mayor límite de detección, es necesario un paso de la concentración que también elimina posibles interferencias.
El porcentaje de resultados satisfactorios obtenidos con el método descrito en este papel, con y sin los resultados registrados de las algas, es comparable a la de HPLC-ICP-MS y mayor que la del HG-AAS. La última técnica (HG-AAS) está extensamente disponible pero propenso a interferencias de especies arsenicales orgánicas, especialmente en alimentos básicos con un patrón de distribución de las especies de arsénico complejos. El menor porcentaje de resultados satisfactorios caracteriza a los obtenidos con "Otros métodos", pero debe tenerse en cuenta que abarca diversos enfoques analíticos, cada uno de ellos representado por una pequeña cantidad de los resultados, figura 1. El método presentado en este trabajo es una alternativa al más sofisticado/costoso HPLC-ICP-MS, todavía se caracteriza por un rendimiento similar en matrices complejas. Con frecuencia el uso de técnicas de guión, como HPLC-ICP-MS, requiere operadores altamente calificados e infraestructuras costosas. El método presentado en este trabajo se puede implementar por cualquier Analista de capacitación en química analítica básica.
Existen algunos inconvenientes principales asociados al método. Es tiempo ya que se deben seguir varios pasos para separar iAs de otras especies de arsénico y a iAs pre-concentrado a niveles incluso sub-ppm. Implica el uso de cloroformo. Hay una tendencia a evitar el uso de compuestos clorados en los laboratorios, debido a los efectos negativos que podría tener. Sin embargo, si se mantienen buenas prácticas de laboratorio y las muestras se manejan en campanas, podrían evitarse los efectos negativos. MMA interfieren en la determinación de NIC. Esto se debe tener en cuenta al analizar las muestras en que MMA podría estar presente, como las algas, pescados y otros mariscos. Sin embargo, MMA es normalmente presente en pequeñas cantidades que serían cubiertas por la incertidumbre asociada a los resultados obtenidos para NIC.

Desde enero de 2016 máximos de arsénico inorgánico (iAs) en varios productos de arroz han sido incluidos en Comisión Reglamento (CE) 1881/2006 Ajuste niveles máximos para determinados contaminantes en los productos alimenticios1 0,10 μg/l para arroz destinado a la producción de alimentos para lactantes y niños pequeños, 0.20 μg/L para no-molido arroz vaporizado (arroz blanco o pulido), 0.25 μg/L para el arroz descascarillado y arroz precocido y 0.30 μg/L para waffles de arroz, obleas, galletas de arroz y pasteles de arroz de arroz. Esta actualización de la legislación europea de contaminantes en los alimentos la opinión científica sobre arsénico en alimentos de la autoridad europea de seguridad alimentaria (EFSA)2 en que se estima que la exposición a través de la dieta a las NIC para los consumidores de medias y altas en Europa es tal que puede suponer un riesgo para algunos consumidores, teniendo en cuenta que la exposición crónica a iAs causa cáncer de pulmón, piel y vejiga y las lesiones de piel. En el informe científico de EFSA sobre exposición al arsénico inorgánico en la población europea3, publicado en el año 2014, se concluye que los principales contribuyentes al NIC en la dieta de los consumidores de todas las edades son productos procesados hechos de cereales que arroz y también el arroz, leche, productos lácteos y agua potable contribuyen significativamente a la ingesta de iAs, con leche y productos lácteos siendo los principales contribuyentes para niños pequeños y bebés.
En 2010 el laboratorio de referencia de la Unión Europea para los metales pesados en piensos y alimentos, EURL-HM, funcionó un competencia de prueba, IMEP-107, para la determinación de IA en arroz, demostrando que era posible determinar iAs en el arroz con suficiente exactitud, independientemente de la método analítico había utilizado4.
Varios métodos analíticos han sido validados para la determinación de IA en los productos alimenticios. China fue el primer país para introducir en su legislación un nivel máximo de iAs en el arroz. Para hacer posible la aplicación de la legislación un método estándar se publicó en 2003 para la determinación de lo que en el estándar se llama "abio-arsénico"5. El Comité Europeo de normalización (CEN), publicó en 2008 un método estandarizado, EN 15517:2008, para la determinación de IA en el alga marina6. Los dos métodos se basan en el uso de condiciones optimizadas para generar arsina solamente de NIC. En que no es necesaria la separación de manera de iAs de otras especies de arsénico también pueden generar hidruro de arsénico. La determinación final se realiza por fluorescencia atómica5 o por espectrometría de absorción atómica de generación de hidruro, HG-AAS6. Sin embargo, es difícil establecer las condiciones exactas para generar el hidruro de arsénico sin sufrir de interferencia de otros compuestos de arsénico y todas las iAs fracciones masa en algas en IMEP-112 (PT organizado por el EURL-HM) obtienen con los dos métodos , se calificaron como insuficiente7. Organoarsenic especies, como el ácido monomethylarsonic (MMA), ácido dimethylarsinic (DMA) y arsenosugars presentes en las muestras de algas, pueden generar también hidruros volátiles y podrían interferir en la determinación de Ia hacia un sesgo positivo en los resultados8 .
CEN había publicado recientemente, un nuevo método estándar, EN 16802:2016, para la determinación de IA en los alimentos de origen marino y vegetal utilizando HPLC-ICP-MS9. No todos los laboratorios están equipados con este tipo de instrumentación y se necesitan métodos no caro, directa, en particular en los países con menos infraestructuras de laboratorio desarrollado.
En 2012 CEN estandarizado un método para la determinación de IA en animales alimenticios HG-AAS después de la extracción de microondas y off-line separación de IA por extracción en fase sólida (SPE), EN 16278:201210. Este método que demostró estar en forma para el análisis de la NIC en la alimentación podría carecer de la sensibilidad necesaria para determinar iAs en alimentos de origen no marino, que según EFSA parece ser los principales responsables dietéticos en Europa3. Sin embargo, el mismo grupo que había desarrollado y había validado EN 16278:2012 probado con éxito aplicado y validado el método para determinar iAs en pescados y mariscos y el arroz en un ensayo colaborativo11,12.
Un método alternativo para la determinación de IA en matrices de alimentos después de la extracción selectiva de iAs en cloroformo y cuantificación más HG-AAS, recientemente fue validado por el centro común de investigación (CCI) en un ensayo colaborativo13. La selectividad del método es mejor que la de HG-AAS directas y fácil de implementar que no requieren el uso de instrumentación sofisticada como HPLC-ICP-MS. En este manuscrito, la viabilidad de utilizar este método para determinar iAs en una amplia gama de matrices de alimentos: verduras, cereales, setas y alimentos de origen marino, ha sido evaluado. Además, se describe el funcionamiento de los laboratorios que utilizan el método de pruebas de competencia organizadas por el EURL-HM y el CCI cubriendo varias matrices.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Deionised water</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">18.2 M&#937; cm</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">Concentrated hydrochloric acid (HCl).&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Not less than 37 % m/v, 
			c(HCl) = 12 mol/L, with a 
			density of 
			approx. &#961; (HCl) 1.15 g/L</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">Concentrated nitric acid (HNO3)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Not less that 65 % m/v, 
			c(HNO3) = 14 mol/L, with a 
			densitiy of approx. 
			&#961; 1.38 g/L</td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:216px;">Chloroform&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Harmful by inhalation and if swallowed. Irritating to skin. 
			Wear suitable protective clothing and gloves.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Hydrogen bromide (HBr)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Not less than 48 % m/v</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Hydrazine sulphate (N2H6SO4)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Harmful if swallowed. 
			Causes burns. 
			May cause cancer.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Magnesium nitrate hexahydrate [Mg(NO3)6H2O]</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Magnesium oxide (MgO)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Potassium iodide (KI)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ascorbic acid (C6H8O6)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sodium borohydride (NaBH4)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Arsenic (V) standard solution</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">1000 mg/L 
			Use certified standard 
			solutions commercially available</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Mechanical shaker</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sand bath</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Muffle furnace</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Polypropylene centrifuge (PC) tubes</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>50 mL with screw cap</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Syringe filters with hydrophobic PTFE membrane</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>25 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Pyrex glass beaker&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Tall form 250 mL, 
			capable of withstanding 500 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Watch glasses</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Volumetric flasks</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">10, 25, 100 or 200, 
			Class A.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Plastic funnels</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Whatman n&#176; 1 paper or equivalent</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Atomic absorption spectrometer equipped with a flow injection system (FI-AAS)</td>
			<td style="width:71px;">Any available</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

determination of inorganic arsenic in a wide range of food matrices using hydride generation - atomic absorption spectrometry.

La autoridad de seguridad alimentaria europea (EFSA) de subrayó en su opinión científica sobre arsénico en alimentos que para apoyar una evaluación de la exposición sonora a arsénico inorgánico a través de la dieta, información sobre la distribución de las especies de arsénico en varios tipos de alimentos debe ser generados. Un método, previamente validado en un ensayo de colaboración, se ha aplicado para determinar arsénico inorgánico en una amplia variedad de matrices de alimentos, que abarcan cereales, setas y alimentos de origen marino (31 muestras en total). El método se basa en la detección por espectrometría de absorción atómica-generación de hidruro de inyección flujo de iAs selectivamente extraído en cloroformo después de la digestión de las proteínas con ácido clorhídrico concentrado. El método se caracteriza por un límite de cuantificación de 10 μg/kg de peso en seco que permite cuantificación de arsénico inorgánico en una gran cantidad de matrices de alimentos. La información está siempre sobre puntuaciones de rendimiento dados a los resultados obtenidos con este método y que fueron divulgados por diferentes laboratorios en varias pruebas de aptitud. El porcentaje de resultados satisfactorios obtenidos con el método discutido es mayor que la de los resultados obtenidos con otros métodos analíticos.

El método fue aplicado para determinar la fracción de masa de iAs en varios alimentos básicos adquiridos de distintos mercados españoles. Los resultados obtenidos con este método una serie de matrices diferentes se clasifican en la tabla 4 después de las categorías utilizadas por EFSA3 en un informe en que se evalúa la exposición al arsénico inorgánico en la población europea en el base de datos reportados por los laboratorios de Control oficial (OCL). Los resultados en la tabla 4 representan la media de tres repeticiones ± la desviación estándar de reproducibilidad (SR) para las categorías de alimentos diferentes, calculadas durante el ensayo colaborativo en el que el presente método fue validado13. Los resultados que se muestran en la tabla 4 están en acuerdo con otros previamente publicados en similares matrices11,12,14.
De particular relevancia son los resultados obtenidos para IA en diferentes tipos de arroz debido a límites máximos están incluidos para ellos en la legislación europea de contaminantes en alimentos1. Los valores más altos obtenidos por arroz integral y la más baja de arroz blanco, de acuerdo con los resultados de la OCLs3. Los niveles más altos se encontraron la hierba de mar Hizikia fusiforme, cuyo consumo ha sido desalentado por varias autoridades como se indica en el informe de la EFSA.
El funcionamiento de los laboratorios que participaron en el PTs organizado por el EURL-HM y el CCI y que utiliza este método para la determinación de iAs, se ha comparado el rendimiento de los laboratorios usando otros métodos. La mayoría de los otros métodos se basa en HPLC-ICP-MS (alrededor del 50% de los resultados evaluados) y el HG-AAS sin separación previa de la NIC de otras especies de arsénico (25% del total), figura 1. Otros enfoques utilizan (alrededor del 15% de los resultados evaluados), se basaron en atomización electrotérmica (ETAAS), detección de fluorescencia y ICP acoplada a espectroscopia de emisión atómica (ICP-AES), con y sin generación de hidruros y se evalúan conjuntamente bajo el nombre de "Otros métodos" porque los números individuales sería muy pocos de cualquier significación estadística.
Algunos de los laboratorios que han utilizado el método evaluado introdujo algunas variaciones en el protocolo original y utilizan ICP-MS en lugar de FI-HG-AAS. Con frecuencia los laboratorios no se aplica el paso de digestión seca (paso 5 en el protocolo) y acaba de introducir la etapa de ácido clorhídrico de 1 M en el ICP-MS. El PTs evaluado cubierto diversas matrices:15,16arroz, trigo, espinacas, algas17 chocolate18.
El funcionamiento de los laboratorios fue expresado como puntaje z: 
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/55953/55953eq2.jpg"> Donde: xlab es el resultado de la medición por un participante en un PT Xref es el valor asignado (usado para los laboratorios de referencia). En todos los PTs tratados en este documento el valor asignado fue establecido por un grupo de laboratorios especializados en el campo del análisis de iAs diferentes métodos analíticos. Σ es la desviación estándar para la evaluación de competencia, fijada por el proveedor de PT teniendo en cuenta el estado del arte en una determinada área de análisis. En los puntos considerados en este trabajo σ era el 15% del valor asignado de arroz y trigo, 22% en las algas y el 25% de espinacas y chocolate.
La interpretación de la puntuación z se realiza según ISO 17043: 201019: | puntuación de | ≤ 2 satisfactorio (S) rendimiento 2 &#60; | puntuación | &#60; 3 cuestionable desempeño de (Q) | puntuación de | ≥ 3 desempeño insatisfactorio (U)
Setenta y cinco por ciento de los resultados obtenidos con el método descrito anteriormente, tiene un z-score satisfactorio. La determinación de la fracción de masa de iAs en las algas resultó ser un reto como era de esperar, teniendo en cuenta la compleja distribución de las especies de arsénico en matrices de origen marino. Dos de los tres valores registrados en IMEP-112 para IA en las algas, utilizando este método, consiguieron una puntuación z insatisfactoria. La misma dificultad se observó entre los resultados obtenidos con otros métodos. Excluyendo los resultados registrados de iAs en las algas, el 85% de los resultados obtenidos con el método evaluado fueron satisfactorio.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55953/55953fig1.jpg"> 
Figura 1: Comparación de actuaciones (expresado en puntajes z) de laboratorios tomando parte en PTs (IMEP-107, 112 IMEP, EURL-HM-20 e IMMR-PT-43) con el método descrito en este artículo y con otros métodos comúnmente aplicados. S:, p: cuestionable y U: insatisfactoria. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55953/55953fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Fracción de masa esperada NIC inferior a 0,010 mg/kg</td>
			<td>Fracción de masa esperada NIC superior a lo que está cubierto por la curva de calibración</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>volumen de ácido clorhídrico 6 mol L-1 utilizada para volver a disolver las cenizas (mL)</td>
			<td>2</td>
			<td>10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>La reducción de volumen (mL) de agente</td>
			<td>2</td>
			<td>10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volumen final (mL)</td>
			<td>10</td>
			<td>50</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 1: modificaciones del protocolo cuando se esperan analizar muestras muy baja o muy alta iAs concentraciones.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Concentración en el curva de calibración (μg/L)</td>
			<td>Alícuota (mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>2 (QC1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5</td>
			<td>5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>10 (QC2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7.5</td>
			<td>15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10</td>
			<td>20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2">Todas as (III) las soluciones estándar de calibración serán elaboradas recién antes de cada calibración.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 2: Alícuotas a tomar de los 25 μg/L de solución estándar de as (v) construir la curva de calibración de as (III) en un volumen final de 50 mL.
<table border="1" border="1"></table border="1" >FO:Keep-together.within-página = "1" fo:keep-con-next.within-página de "siempre" = &gt;<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="4">Inyección de flujo Generación de hidruros</td>
			<td>·         Ejemplo de bucle: 0,5 mL (para ser adaptado cuando el volumen de reconstitución de la solución final de la reducción es diferente de 25 mL).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>·         Agente reductor: 0,2% (p/v) de NaBH4 0.05% (p/v) de NaOH; 5 mL/min de caudal.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>·         Disolución de HCl 10% (v/v), 10 mL/min de caudal.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>·         Gas portador: argón, 100 mL/min de caudal.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="5">Absorción atómica Espectrómetro de</td>
			<td>·         Longitud de onda: 193.7 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>·         Paso de banda espectral: 0.7 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>·         Lámpara de descarga sin electrodos sistema 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>·         Ajuste actual de la lámpara: 400 mA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>·         Temperatura de la célula: 900 ° C</td>
		</tr>
	</tbody>

Tabla 3: Condiciones instrumentales utilizados para Ia cuantificación HG-AAS.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="2">Alimentos</td>
			<td>yo-como (μg/kg peso fresco)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cereales y productos a base de grano</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arroz</td>
			<td>Blanco</td>
			<td>± 113 18</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>73 ± 12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>56 ± 9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Marrón</td>
			<td>197 ± 32</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>125 ± 20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>275 ± 44</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Vaporizado</td>
			<td>134 ± 21</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>159 ± 25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Obleas</td>
			<td>162 ± 26</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>127 ± 20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Productos vegetales y verduras</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Setas deshidratadas</td>
			<td>Boletus edulis</td>
			<td>174 ± 10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Galocybe gambosa</td>
			<td>74 ± 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Marasmius oreades</td>
			<td>104 ± 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Cantharellus lutescens</td>
			<td>16 ± 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Lentinula edodes</td>
			<td>96 ± 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Algas marinas</td>
			<td>Hizikia fusiforme</td>
			<td>97000 ± 14550</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>44943 ± 6742</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Fucus vesiculosus</td>
			<td>288 ± 43</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>433 ± 65</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pescados y otros mariscos</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carne de pescado</td>
			<td>Pardete</td>
			<td>53 ± 12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>21 ± 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Anguila europea</td>
			<td>72 ± 16</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>42 ± 9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Cangrejos de río</td>
			<td>33 ± 7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>20 ± 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Atún</td>
			<td>11 ± 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>5 ± 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moluscos</td>
			<td>Almeja</td>
			<td>243 ± 54</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>133 ± 29</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Mejillones</td>
			<td>± 32 32</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>139 ± 31</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 4: Resultados obtenidos para una gama de diferentes Matrices aplicando el método descrito.

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Determination of Inorganic Arsenic in a Wide Range of Food Matrices using Hydride Generation - Atomic Absorption Spectrometry.

Se demuestra la utilidad de un método analítico para determinar arsénico inorgánico en una amplia gama de matrices de alimentos. El método consiste en la extracción selectiva de arsénico inorgánico en cloroformo con una determinación final por espectrometría de absorción atómica-generación de hidruros.

Determinación de arsénico inorgánico en una amplia gama de alimentos Matrices mediante generación de hidruros - espectrometría de absorción atómica.

The European Food Safety Authority (EFSA) underlined in its Scientific Opinion on Arsenic in Food that in order to support a sound exposure assessment to ...

determination-inorganic-arsenic-wide-range-food-matrices-using

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14.5K vistas.  Joint Research Centre. Se demuestra la utilidad de un método analítico para determinar arsénico inorgánico en una amplia gama de matrices de alimentos. El método consiste en la extracción selectiva de arsénico inorgánico en cloroformo con una determinación final por espectrometría de absorción atómica-generación de hidruros.

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A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters (Homarus americanus)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American lobsters. Recent work in exploited crustacean populations (crabs and lobsters) suggests that there are circumstances where mature females are unable to achieve their full reproductive potential due to sperm limitation. To examine this possibility in different regions of the American lobster fishery, a reliable and noninvasive method was developed for sampling large numbers of female lobsters at sea. This method involves inserting a blunt-tipped needle into the female&#39;s seminal receptacle to determine the presence or absence of a sperm plug and to withdraw a sample that can be examined for the presence of sperm. A series of control studies were conducted at the dock and in the laboratory to test the reliability of this technique. These efforts entailed sampling 294 female lobsters to confirm that the presence of a sperm plug was a reliable indicator of sperm within the receptacle and thus, mating. This paper details the methodology and the results obtained from a subset of the total females sampled. Of the 230 female lobsters sampled from George&#39;s Bank and Cape Ann, MA (size range = 71-145 mm in carapace length), 90.3% were positive for sperm. Potential explanations for the absence of sperm in some females include: immaturity (lack of physiological maturity), breakdown of the sperm plug after being used to fertilize a clutch of eggs, and lack of mating activity. The surveys indicate that this technique for examining the mating success of female lobsters is a reliable proxy that can be used in the field to document reproductive activity in natural populations.

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters Homarus americanus

Fishery-induced changes to exploited crustacean fisheries, such as the American lobster fishery, could potentially influence their reproductive dynamics, leading to a reduction in mating success. This study&#39;s goal was to develop a noninvasive method for ascertaining the mating success of female lobsters that may be physiologically or functionally mature.

Un método no invasivo para<em&gt; In situ</em&gt; Determinación de Éxito de apareamiento en americano femenino Langostas (<em&gt; Homarus americanus</em&gt;)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American ...

Investigación

Medio ambiente

Tracking Microbial Contamination in Retail Environments Using Fluorescent Powder - A Retail Delicatessen Environment Example

Cross contamination of foodborne pathogens in the retail environment is a significant public health issue contributing to an increased risk for foodborne illness. Ready-to-eat (RTE) processed foods such as deli meats, cheese, and in some cases fresh produce, have been involved in foodborne disease outbreaks due to contamination with pathogens such as Listeria monocytogenes. With respect to L. monocytogenes, deli slicers are often the main source of cross contamination. The goal of this study was to use a fluorescent compound to simulate bacterial contamination and track this contamination in a retail setting. A mock deli kitchen was designed to simulate the retail environment. Deli meat was inoculated with the fluorescent compound and volunteers were recruited to complete a set of tasks similar to those expected of a food retail employee. The volunteers were instructed to slice, package, and store the meat in a deli refrigerator. The potential cross contamination was tracked in the mock retail environment by swabbing specific areas and measuring the optical density of the swabbed area with a spectrophotometer. The results indicated that the refrigerator (i.e. deli case) grip and various areas on the slicer had the highest risk for cross contamination. The results of this study may be used to develop more focused training material for retail employees. In addition, similar methodologies could also be used to track microbial contamination in food production environments (e.g.&#160;small farms), hospitals, nursing homes, cruise ships, and hotels.

The overall goal of this study was to demonstrate the potential cross contamination mechanism of foodborne pathogen Listeria monocytogenes in a retail deli setting. This methodology may be applied to a variety of different environments to track pathogen contamination. &#160;

El seguimiento de la contaminación microbiana en los entornos comerciales Usando fluorescente Polvo - Un menor Charcutería Ambiente Ejemplo

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Quantification of Heavy Metals and Other Inorganic Contaminants on the Productivity of Microalgae

Increasing demand for renewable fuels has researchers investigating the feasibility of alternative feedstocks, such as microalgae. Inherent advantages include high potential yield, use of non-arable land and integration with waste streams. The nutrient requirements of a large-scale microalgae production system will require the coupling of cultivation systems with industrial waste resources, such as carbon dioxide from flue gas and nutrients from wastewater. Inorganic contaminants present in these wastes can potentially lead to bioaccumulation in microalgal biomass negatively impact productivity and limiting end use. This study focuses on the experimental evaluation of the impact and the fate of 14 inorganic contaminants (As, Cd, Co, Cr, Cu, Hg, Mn, Ni, Pb, Sb, Se, Sn, V and Zn) on Nannochloropsis salina growth. Microalgae were cultivated in photobioreactors illuminated at 984 &#181;mol m-2 sec-1 and maintained at pH 7 in a growth media polluted with inorganic contaminants at levels expected based on the composition found in commercial coal flue gas systems. Contaminants present in the biomass and the medium at the end of a 7 day growth period were analytically quantified through cold vapor atomic absorption spectrometry for Hg and through inductively coupled plasma mass spectrometry for As, Cd, Co, Cr, Cu, Mn, Ni, Pb, Sb, Se, Sn, V and Zn. Results show N. salina is a sensitive strain to the multi-metal environment with a statistical decrease in biomass yieldwith the introduction of these contaminants. The techniques presented here are adequate for quantifying algal growth and determining the fate of inorganic contaminants.

Integration of microalgal cultivation with industrial flue gas will ultimately introduce heavy metals and other inorganic compounds into the growth media. This study presents a procedure used to determine the end fate and impact of heavy metals and inorganic contaminants on the growth of Nannochloropsis salina grown in photobioreactors.

La cuantificación de los metales pesados ​​y otros contaminantes inorgánicos en la productividad de microalgas

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Measuring Stolons and Rhizomes of Turfgrasses Using a Digital Image Analysis System

Length and diameter of stolons or rhizomes are usually measured using simple rulers and calipers. This procedure is slow and laborious, so it is often used on a limited number of stolons or rhizomes. For this reason, these traits are limited in their use for morphological characterization of plants. The use of digital image analysis software technology may overcome measurement errors due to human mistakes, which tend to increase as the number and size of samples also increase. The protocol can be used for any kind of crop but is particularly suitable for forage or grasses, where plants are small and numerous. Turf samples consist of aboveground biomass and an upper soil layer to the depth of maximum rhizome development, depending on the species of interest. In studies, samples are washed from the soil, and stolons/rhizomes are cleaned by hand before analysis by digital image analysis software. The samples are further dried in a laboratory heating oven to measure dry weight; therefore, for each sample, the resultant data are total length, total dry weight, and average diameter. Scanned images can be corrected before analysis by excluding visible extraneous parts, such as remaining roots or leaves not removed with the cleaning process. Indeed, these fragments normally have much smaller diameters than stolons or rhizomes, so they can be easily excluded from analysis by fixing the minimum diameter below which objects are not considered. Stolon or rhizome density per unit area can then be calculated based on sample size. The advantage of this method is quick and efficient measurement of the length and average diameter of large sample numbers of stolons or rhizomes.

A software-based image analysis system provides an alternative method to study the morphology of stoloniferous and rhizomatous species. This protocol permits measurement of the length and diameter of stolons and rhizomes and can be applied to samples with a large amount of biomass and to a wide variety of species.

Medición de estolones y rizomas de céspedes mediante un sistema de análisis de imagen Digital

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In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration

Understanding the physiologic mechanisms of wound healing has been the focus of ongoing research for many years. This research directly translates into changes in clinical standards used for treating wounds and decreasing morbidity and mortality for patients. Wound healing is a complex process that requires strategic cell and tissue interaction and function. One of the many critically important functions of wound healing is individual and collective cellular migration. Upon injury, various cells from the blood, surrounding connective, and epithelial tissues rapidly migrate to the wound site by way of chemical and/or physical stimuli. This migration response can largely dictate the outcomes and success of a healing wound. Understanding this specific cellular function is important for translational medicine that can lead to improved wound healing outcomes. Here, we describe a protocol used to better understand cellular migration as it pertains to wound healing, and how changes to the cellular environment can significantly alter this process. In this example study, dermal fibroblasts were grown in media supplemented with fetal bovine serum (FBS) as monolayer cultures in tissue culture flasks. Cells were aseptically transferred into tissue culture treated 12-well plates and grown to 100% confluence. Upon reaching confluence, the cells in the monolayer were vertically scratched using a p200 pipet tip. Arsenic diluted in culture media supplemented with FBS was added to individual wells at environmentally relevant doses ranging 0.1-10 &#956;M. Images were captured every 4 hours (h) over a 24 h period using an inverted light microscope to observe cellular migration (wound closure). Images were individually analyzed using image analysis software, and percent wound closure was calculated. Results demonstrate that arsenic slows down wound healing. This technique provides a rapid and inexpensive first screen for evaluation of the effects of contaminants on wound healing.

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This study focuses on an in vitro model of wound healing (scratch assay) as a mechanism for determining how environmental contaminants such as arsenic influence cellular migration. The results demonstrate that this in vitro assay provides rapid and early indications of changes to cellular migration prior to in vivo experimentation.

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Removal of Arsenic Using a Cationic Polymer Gel Impregnated with Iron Hydroxide

In this work, we prepared an adsorbent composed of a cationic polymer gel containing iron hydroxide in its structure designed to adsorb arsenic from groundwater. The gel we selected was the N,N-dimethylamino propylacrylamide methyl chloride quaternary (DMAPAAQ) gel. The objective of our preparation method was to ensure the maximum content of iron hydroxide in the structure of the gel. This design approach enabled simultaneous adsorption by both the polymer structure of the gel and the iron hydroxide component, thus, enhancing the adsorption capacity of the material. To examine the performance of the gel, we measured reaction kinetics, carried out pH sensitivity and selectivity analyses, monitored arsenic adsorption performance, and conducted regeneration experiments. We determined that the gel undergoes a chemisorption process and reaches equilibrium at 10 h. Moreover, the gel adsorbed arsenic effectively at neutral pH levels and selectively in complex ion environments, achieving a maximum adsorption volume of 1.63 mM/g. The gel could be regenerated with 87.6% efficiency and NaCl could be used for desorption instead of harmful NaOH. Taken together, the presented gel-based design method is an effective approach for constructing high-performance arsenic adsorbents.

In this work, we prepared an adsorbent composed of the cationic N,N-dimethylamino propylacrylamide methyl chloride quaternary (DMAPAAQ) polymer gel and iron hydroxide for adsorbing arsenic from groundwater. The gel was prepared via a novel method designed to ensure the maximum content of iron particles in its structure.

Eliminación del arsénico utilizando un gel de polímero catiónico impregnado con hidróxido de hierro

In this work, we prepared an adsorbent composed of a cationic polymer gel containing iron hydroxide in its structure designed to adsorb arsenic from ...

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

Clostridium perfringens (C. perfringens) is a prolific toxin producer and causes a wide range of diseases in various hosts. C. perfringens is categorized into five different toxinotypes, A through E, based on the carriage of four major toxin genes. The prevalence and distribution of these various toxinotypes is understudied, especially their pervasiveness in American retail food. Of particular interest to us are the type B and D strains, which produce epsilon toxin, an extremely lethal toxin suggested to be the environmental trigger of multiple sclerosis in humans. To evaluate the presence of different C. perfringens toxinotypes in various food samples, we developed an easy method to selectively culture these bacteria without the use of an anaerobic container system only involving three culturing steps. Food is purchased from local grocery stores and transported to the laboratory under ambient conditions. Samples are minced and inoculated into modified rapid perfringens media (RPM) and incubated overnight at 37 &#176;C in a sealed, airtight conical tube. Overnight cultures are inoculated onto a bottom layer of solid Tryptose Sulfite Cycloserine (TSC) agar, and then overlaid with a top layer of molten TSC agar, creating a &#34;sandwiched&#34;, anaerobic environment. Agar plates are incubated overnight at 37 &#176;C and then evaluated for appearance of black, sulfite-reducing colonies. C. perfringens-suspected colonies are removed from the TSC agar using sterile eye droppers, and inoculated into RPM and sub-cultured overnight at 37 &#176;C in an airtight conical tube. DNA is extracted from the RPM subculture, and then analyzed for the presence of C. perfringens toxin genes via polymerase chain reaction (PCR). Depending on the type of food sampled, typically 15&#8211;20% of samples test positive for C. perfringens.

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

The objective of this protocol is to detect different Clostridium perfringens toxinotypes in locally purchased foods, particularly epsilon toxin producing strain types B and D, without the use of anaerobic chambers.

Enriquecimiento y detección de toxinatipos de Clostridium perfringens en muestras de alimentos al por menor

Clostridium perfringens (C. perfringens) is a prolific toxin producer and causes a wide range of diseases in various hosts. C. perfringens is categorized ...

Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices

The aims of this study were to develop a technique for the extraction of cortisol from sturgeon fins using two washing solvents (water and isopropanol) and quantify any differences in fin cortisol levels among three main sturgeon species. Fins were harvested from 19 sacrificed sturgeons including seven beluga (Huso huso), seven Siberian (Acipenser baerii), and five sevruga (A. stellatus). The sturgeons were raised in Iranian farms for 2 years (2017-2018), and cortisol extraction analysis was conducted in South Korea (January-February 2019). Jawbones from five H. huso were also used for cortisol extraction. Data were analyzed using the general linear model (GLM) procedure in the SAS environment. The intra- and inter-assay coefficients of variation were 14.15 and 7.70, respectively. Briefly, the cortisol extraction technique involved washing the samples (300 &#177; 10 mg) with 3 mL of solvent (ultrapure water and isopropanol) twice, rotation at 80&#160;rpm for 2.5 min, air-drying the washed samples at room temperature (22-28 &#176;C) for 7 days, further drying the samples using a bead beater at 50 Hz for 32 min and grinding them into powder, applying 1.5 mL methanol to the dried powder (75 &#177; 5 mg), and slow rotation (40 rpm) for 18 h at room temperature with continuous mixing. Following extraction, samples were centrifuged (9,500 x g for 10 min), and 1 mL supernatant was transferred into a new microcentrifuge tube (1.5 mL), incubated at 38 &#176;C to evaporate the methanol, and analyzed via enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). No differences were observed in fin cortisol levels among species or in fin and jawbone cortisol levels between washing solvents. The results of this study demonstrate that the sturgeon jawbone matrix is a promising alternative stress indicator to solid matrices.

In this study, we present a protocol for cortisol extraction from the fin and jawbone of sturgeon species. Fin and jawbone cortisol levels were further examined by comparing two washing solvents followed by ELISA assays. This study piloted the feasibility of jawbone cortisol as a novel stress indicator.

Extracción de cortisol de las matrices de aleta de esturión y mandíbula

The aims of this study were to develop a technique for the extraction of cortisol from sturgeon fins using two washing solvents (water and isopropanol) ...

Investigation of Xenobiotics Metabolism In Salix alba Leaves via Mass Spectrometry Imaging

The method presented uses mass spectrometry imaging (MSI) to establish the metabolic profile of S. alba leaves when exposed to xenobiotics. Using a non-targeted approach, plant metabolites and xenobiotics of interest are identified and localized in plant tissues to uncover&#160;specific distribution patterns. Then, in silico prediction of potential metabolites (i.e., catabolites and conjugates) from the identified xenobiotics is performed. When a xenobiotic metabolite is located in the tissue, the type of enzyme involved in its alteration by the plant is recorded. These results were used to describe different types of biological reactions occurring in S. alba leaves in response to xenobiotic accumulation in the leaves. The metabolites were predicted in two generations, allowing the documentation of successive biological reactions to transform xenobiotics in the leaf tissues.

Investigation of Xenobiotics Metabolism In Salix alba Leaves via Mass Spectrometry Imaging

This method uses mass spectrometry imaging (MSI) to understand metabolic processes in S. alba leaves when exposed to xenobiotics. The method allows the spatial localization of compounds of interest and their predicted metabolites within specific, intact tissues.

Investigación Del Metabolismo De Xenobióticos En Hojas De Salix alba A Través De Imágenes Espectrometría De Masas

The method presented uses mass spectrometry imaging (MSI) to establish the metabolic profile of S. alba leaves when exposed to xenobiotics. Using a ...

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of Plant&ndash;Environment Interactions

Food security for the growing global population is a major concern. The data provided by genomic tools far exceeds the supply of phenotypic data, creating a knowledge gap. To meet the challenge of improving crops to feed the growing global population, this gap must be bridged.
Physiological traits are considered key functional traits in the context of responsiveness or sensitivity to environmental conditions. Many recently introduced high-throughput (HTP) phenotyping techniques are based on remote sensing or imaging and are capable of directly measuring morphological traits, but measure physiological parameters mainly indirectly.
This paper describes a method for direct physiological phenotyping that has several advantages for the functional phenotyping of plant&#8211;environment interactions. It helps users overcome the many challenges encountered in the use of load-cell gravimetric systems and pot experiments. The suggested techniques will enable users to distinguish between soil weight, plant weight and soil water content, providing a method for the continuous and simultaneous measurement of dynamic soil, plant and atmosphere conditions, alongside the measurement of key physiological traits. This method allows researchers to closely mimic field stress scenarios while taking into consideration the environment&#8217;s effects on the plants&#8217; physiology. This method also minimizes pot effects, which are one of the major problems in pre-field phenotyping. It includes a feed-back fertigation system that enables a truly randomized experimental design at a field-like plant density. This system detects the soil-water-content limiting threshold (&#952;) and allows for the translation of data into knowledge through the use of a real-time analytic tool and an online statistical resource. This method for the rapid and direct measurement of the physiological responses of multiple plants to a dynamic environment has great potential for use in screening for beneficial traits associated with responses to abiotic stress, in the context of pre-field breeding and crop improvement.

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of Plant&amp;#8211;Environment Interactions

This high-throughput, telemetric, whole-plant water relations gravimetric phenotyping method enables direct and simultaneous real-time measurements, as well as the analysis of multiple yield-related physiological traits involved in dynamic plant&#8211;environment interactions.

Una plataforma telemétrica y gravimétrica para el fenotipado fisiológico en tiempo real de las interacciones entre plantas y entornos

Food security for the growing global population is a major concern. The data provided by genomic tools far exceeds the supply of phenotypic data, creating ...