Nos gustaría extender nuestro agradecimiento al personal de la Agencia Sueca de defensa (FOI) y el centro de Linköping para desastres medicina y traumatologia (KMC) por su apoyo.

El estudio descrito aquí siguieron las pautas de ética local y fue aprobado por la Junta de revisión ética regional en Linköping (permiso número 2015/99-31).
1. el consentimiento informado y proyección
<ol><li>Obtener el consentimiento informado del sujeto.</li>
	<li>Pantalla de criterios de inclusión y exclusión. Nota: Criterios de inclusión fueron: (i) sano adulto > 18 años de edad, (ii) capaz de entender información oral y escrita y (iii) proporciona el consentimiento oral y escrito. Criterios de exclusión fueron: (i) no se puede o no quiere proporcionar el consentimiento informado, afecciones de la piel (ii) curso, enfermedad (iii) Cardiovascular, (iv) los medicamentos que pueden interferir con la función vascular. Se permiten los anticonceptivos orales. Si el tema utiliza anticonceptivos orales debe ser no observado en el archivo de protocolo del sujeto, (v) cicatriz libre y no herido la piel de la frente, (vi) ninguna ingesta de cafeína o tabaco 2 h antes del inicio de la prueba y (vii) ninguna actividad física vigorosa al menos 2 h pr IOR al inicio de la prueba.</li>
</ol>2. aclimatación y configuración de equipos
<ol><li>Que el tema de prueba aclimatarse durante al menos 20 minutos en una posición supina antes del inicio de la prueba. Nota: Corregir posición del sujeto y equipos se muestran en la figura complementaria 1.</li>
	<li>
Configurar la grabación de la cámara de las pruebas de llenado capilar usando el software diseñado y cámara digital (véase tabla de materiales).
	<ol>
<li>Conecte el cable USB a la cámara y el ordenador y ajustar la configuración de la cámara en modo video.</li>
		<li>Encender la cámara y asegúrese de que conecta a la computadora.</li>
		<li>Inicie el software de control remoto de la cámara (véase Tabla de materiales).</li>
		<li>Apague la luz ambiente y gire a la pantalla de la computadora lejos de la zona de medición.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. adquisición de datos
<ol><li>Haga clic en la "visión de la vida" (Sic) botón y pulse "Start".</li>
	<li>Cambiar entre el modo de 'video' y 'TiVi' haciendo clic en los botones de radio (esto no afectará la grabación, sólo la pantalla presentación). Asegúrese de que una corriente video viva de frente al sujeto es visible en la pantalla de la cámara y en la pantalla del ordenador.</li>
	<li>Ajustar la cámara a una altura de aproximadamente 15 cm directamente sobre la frente del sujeto.</li>
	<li>Asegúrese de que el foco de la cámara está ajustado a "AF" (enfoque automático).</li>
	<li>Pedir el tema para mantener erguida la cabeza todavía la duración de la prueba y abstenerse de hablar. Informar al sujeto que está bien mantener sus ojos cerrados durante la prueba diciendo: "por favor, coloque su cabeza en esta almohada y la cabeza todavía para la duración de la prueba. Por favor, no hable durante los 20 segundos que dura la prueba. Puede mantener los ojos cerrados durante todo el tiempo, si encuentras la luz demasiado brillante ".</li>
	<li>No mueva la cámara durante la grabación.</li>
	<li>En la ventana "vista de la vida" busque y haga clic en "Grabar HD" para iniciar una grabación continua de 20 s. Observe que la duración de la grabación (segundos), puede verse en la pantalla de la cámara; los primeros 5 s de la grabación es adquirir la concentración normal de la sangre capilar de la frente.</li>
	<li>Al final de los 5 s de nivel básico de grabación, aplique una firma blanqueo presión a la zona de medición para uso s. 5 el dedo índice con una cucharilla de plástico entre los dedos y la frente para aislamiento de temperatura y compensación de presión.</li>
	<li>Libere la presión y rápidamente retirar el dedo del examinador y cucharadita plástica de la zona de medición.</li>
	<li>Continuar grabando para otros 10 s para capturar la respuesta hiperémica posterior.</li>
	<li>Detener la grabación haciendo clic en "Stop" en la ventana "vista de la vida".</li>
	<li>Una vez que la grabación se ha detenido, se abrirá una ventana para guardar y el archivo (en formato .mov); Elija una carpeta y un nombre para el video. Desconecte la cámara del ordenador, mientras que el video se descarga a la carpeta en el equipo.</li>
</ol>4. Análisis de datos
<ol><li>Proceder a realizar la construcción de la curva y análisis de la imagen con un software dedicado análisis (véase Tabla de materiales).</li>
	<li>Inicie el software de análisis haciendo doble clic en el icono del escritorio.</li>
	<li>Una vez iniciado el software, en la pantalla principal, seleccione "Página de la película".</li>
	<li>En la ventana "Página de la película", haga clic en "Load movie". Espere a que el software cargar y analizar la película. Esto puede tomar hasta un par de minutos dependiendo del tamaño del archivo de vídeo.</li>
	<li>Una vez terminada la carga y análisis de la película, haga clic en "Guardar como imágenes" y esperar a que el software analizar el video. Nota: Esto creará automáticamente una nueva carpeta en el equipo que contiene la secuencia de vídeo dividida en imágenes jpeg individuales.</li>
	<li>Una vez terminada la división del vídeo en imágenes jpeg individuales, busque y seleccione "Página de imágenes de cultivos" en la ventana de la pantalla principal.</li>
	<li>En la "página de imágenes de cultivos", haga clic en "Primera foto" y desplácese hasta la carpeta que contiene las fotos jpeg del vídeo y seleccionar la primera foto a analizar; el software seleccionará automáticamente las siguientes fotos de ese lote.</li>
	<li>Haga clic en el menú "Edición" y elegir entre los marcadores circulares o rectangulares para la región de interés.</li>
	<li>En la ventana de "Seleccionar fotos", encontrar la caja de "Foto real" y escriba el nombre de la primera foto en el lote donde dedo del investigador está totalmente retraída de la zona de medición. Para encontrar esta foto, mire a través de la carpeta que contiene las fotos individuales en el video.</li>
	<li>Seleccione una región de interés haciendo clic y manteniendo pulsado el botón izquierdo del ratón y dibuje un círculo o un rectángulo en la ventana de la foto que está dentro de las fronteras de la zona blanqueada. La región seleccionada de interés se aplica automáticamente a todas las fotos del lote.</li>
	<li>Haga clic en el menú "Archivo" y elija "Save ROI" para salvar la situación de la región seleccionada de interés para futuras consultas.</li>
	<li>Haga clic en el botón de "Seguimiento de la curva" y esperar a que el software analizar la región de interés.</li>
	<li>Una vez que se abre la ventana de seguimiento de la curva, el cambio en la concentración de glóbulos rojos para la región seleccionada de interés para la duración de la prueba se muestra como una curva. La pantalla presentación se puede cambiar haciendo clic en los botones de radio diferentes. Esto no afectará los datos en bruto.</li>
	<li>Haga clic en "Exportar datos" y guardar la transcripción de datos en bruto para su posterior análisis.</li>
	<li>En la transcripción de datos, desplácese hasta la columna llamada "Significa intensidad TiVi valores." Generar tres nuevas columnas al lado de esta columna de "número de la imagen," "tiempo total" y "tiempo de llenado capilar" a partir de 1 s, 0 s y 0 s y con un aumento de 1 s, 0.02 s y 0.02 s, respectivamente. Nota: "Tiempo de llenado capilar" se corresponde con el momento de la reacción posterior a la liberación de la presión de escaldado y comienza en el valor medio que representa la primera foto donde el dedo del investigador está totalmente retraída de la zona de medición.</li>
	<li>Eliminar los valores entre basal y el tiempo de relleno capilar, ya que éstos sólo contiene ruido generado por el dedo índice y cucharadita plástica del investigador durante la maniobra de escaldado.</li>
	<li>Calcular un valor medio para la medición de línea de base (primeros 5 s de la grabación).</li>
	<li>Encontrar el primer valor que iguala o supera el valor de referencia promedio calculado y nota el tiempo en la columna de "Tiempo del repuesio capilar". Este momento representa el "tiempo para volver a la línea de base 1".</li>
	<li>Encontrar el más alto significa el valor de la intensidad de los valores generados después de liberar la presión y observe el punto del tiempo en la columna "Tiempo de llenado capilar". Este momento representa "El tiempo al pico".</li>
	<li>Encontrar el segundo valor que es menor o igual que el valor medio calculado para la medición de línea de base y nota el momento en la columna "Tiempo de llenado capilar". Este momento representa el "tiempo para volver a base 2".</li>
</ol>

<ol>
	<li>Strehlow, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+identification+of+shock+in+critically+ill+patients.">Early identification of shock in critically ill patients.</a> Emerg Med Clin North Am. 28 (1), 57-66 (2010).</li><li>Advanced Life Support, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Acute Medical Emergencies. , 67-84 (2010).</li><li>Brasel, K. J., Guse, C., Gentilello, L. M., Nirula, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+rate:+is+it+truly+a+vital+sign?.">Heart rate: is it truly a vital sign?.</a> J Trauma. 62 (4), 812-817 (2007).</li><li>De Backer, D., Ortiz, J. 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T., Menon, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multidisciplinary+survey+on+capillary+refill+time:+Inconsistent+performance+and+interpretation+of+a+common+clinical+test.">A multidisciplinary survey on capillary refill time: Inconsistent performance and interpretation of a common clinical test.</a> Pediatr Crit Care Med. 9 (4), 386-391 (2008).</li><li>Otieno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+bedside+features+of+shock+reproducible+between+different+observers?.">Are bedside features of shock reproducible between different observers?.</a> Arch Dis Child. 89 (10), 977-979 (2004).</li><li>Raju, N. V., Maisels, M. J., Kring, E., Schwarz-Warner, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+refill+time+in+the+hands+and+feet+of+normal+newborn+infants.">Capillary refill time in the hands and feet of normal newborn infants.</a> Clin Pediatr (Phila). 38 (3), 139-144 (1999).</li><li>Klupp, N. L., Keenan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evaluation+of+the+reliability+and+validity+of+capillary+refill+time+test.">An evaluation of the reliability and validity of capillary refill time test.</a> The Foot. 17, 15-20 (2007).</li><li>Gorelick, M. H., Shaw, K. N., Baker, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ambient+temperature+on+capillary+refill+in+healthy+children.">Effect of ambient temperature on capillary refill in healthy children.</a> Pediatrics. 92 (5), 699-702 (1993).</li><li>Schriger, D. L., Baraff, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+normal+capillary+refill:+variation+with+age,+sex,+and+temperature.">Defining normal capillary refill: variation with age, sex, and temperature.</a> Ann Emerg Med. 17 (9), 932-935 (1988).</li><li>Pandey, A., John, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+refill+time.+Is+it+time+to+fill+the+gaps?.">Capillary refill time. Is it time to fill the gaps?.</a> Med J Armed Forces India. 69 (1), 97-98 (2013).</li><li>Strozik, K. S., Pieper, C. H., Roller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+refilling+time+in+newborn+babies:+normal+values.">Capillary refilling time in newborn babies: normal values.</a> Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 76 (3), F193-F196 (1997).</li><li>Doherty, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sub-epidermal+imaging+using+polarized+light+spectroscopy+for+assessment+of+skin+microcirculation.">Sub-epidermal imaging using polarized light spectroscopy for assessment of skin microcirculation.</a> Skin Res Technol. 13 (4), 472-484 (2007).</li><li>Noguchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+caffeine+contained+in+a+cup+of+coffee+on+microvascular+function+in+healthy+subjects.">Effect of caffeine contained in a cup of coffee on microvascular function in healthy subjects.</a> J Pharmacol Sci. 127 (2), 217-222 (2015).</li><li>Reus, W. F., Robson, M. C., Zachary, L., Heggers, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+effects+of+tobacco+smoking+on+blood+flow+in+the+cutaneous+micro-circulation.">Acute effects of tobacco smoking on blood flow in the cutaneous micro-circulation.</a> Br J Plast Surg. 37 (2), 213-215 (1984).</li><li>Lenasi, H., Strucl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+regular+physical+training+on+cutaneous+microvascular+reactivity.">Effect of regular physical training on cutaneous microvascular reactivity.</a> Med Sci Sports Exerc. 36 (4), 606-612 (2004).</li><li>Anderson, B., Kelly, A. M., Kerr, D., Clooney, M., Jolley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+patient+and+environmental+factors+on+capillary+refill+time+in+adults.">Impact of patient and environmental factors on capillary refill time in adults.</a> Am J Emerg Med. 26 (1), 62-65 (2008).</li><li>John, R. T., Henricson, J., Nilsson, G. E., Wilhelms, D., Anderson, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reflectance+spectroscopy:+to+shed+new+light+on+the+capillary+refill+test.">Reflectance spectroscopy: to shed new light on the capillary refill test.</a> J Biophotonics. , (2017).</li><li>Blaxter, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+quasi-continuous+capillary+refill+timing+device.">An automated quasi-continuous capillary refill timing device.</a> Physiological measurement. 37, 83-99 (2016).</li><li>Bordoley, A., Irwin, R., Kalyani, V., MacDonald, C., Standish, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> D1GIT: Automated, temperature-calibrated measurement of capillary refill time. , (2012).</li><li>Kviesis-Kipge, E., Curkste, E., Spigulis, J., Eihvalde, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+analysis+of+skin+capillary-refill+processes+using+blue+LED.">Real-time analysis of skin capillary-refill processes using blue LED.</a> Proc. of SPIE. 771523, (2010).</li><li>Shavit, I., Brant, R., Nijssen-Jordan, C., Galbraith, R., Johnson, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+imaging+technique+to+measure+capillary-refill+time:+improving+diagnostic+accuracy+for+dehydration+in+young+children+with+gastroenteritis.">A novel imaging technique to measure capillary-refill time: improving diagnostic accuracy for dehydration in young children with gastroenteritis.</a> Pediatrics. 118 (6), 2402-2408 (2006).</li><li>Cohen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitor+to+Measure+Dermal+Blood+Flow+in+Critically+Ill+Patients:+Study.">Monitor to Measure Dermal Blood Flow in Critically Ill Patients: Study.</a> International Scholarly Research Notices. 578316, e578316 (2013).</li></ol>

Apoyo financiero de WheelsBridge AB no participó en la realización del estudio. Es empleado por el Consejo de Condado de Östergötland, el autor JH pero tiene un acuerdo de regalías con WheelsBridge AB. El autor principal CDA tiene una posición académica a tiempo completo sino también implicación limitada en WheelsBridge AB.

Para obtener los mejores resultados con el sistema, debe controlarse la variabilidad causada por factores ambientales. Toda la luz ambiente debe desactivarse. La cámara se colocará en la alineación vertical de la zona de medición. Para garantizar una zona de constante medición, temas no deben mover o hablar durante la medición. Por la misma razón, la cámara es preferiblemente montada sobre un soporte para evitar el movimiento y mantener una distancia constante a la zona de medición. Los temas de prueba deben evi...

Evaluación y clasificación de los centros de pacientes críticamente enfermos en el clásico signos vitales presión arterial (PA), frecuencia cardiaca (FC), frecuencia respiratoria (RR), la saturación de oxígeno y temperatura corporal1. Los cambios en estos parámetros aparecen relativamente tarde en el curso de deterioro circulatorio. Por ejemplo, en la hemorragia, una disminución de la PA no se producirá hasta que se convierte en la pérdida de sangre moderada a severa2y aumento de recursos humanos también puede ser un marcador insensible y3.
La prueba de llenado capilar (prueba de CR) puede ofrecer una indicación anterior de incipiente colapso circulatorio, como el tiempo de recarga se cree que cambiar antes de los signos vitales así como el aspecto clínico de piel fría, húmeda y moteado1,4 , 5. la prueba de llenado capilar se realiza típicamente por el uso y soltar de una palidez firme presión sobre la piel con el tiempo (en segundos) de la vuelta de la sangre a la zona de blanqueado. Según las pautas, recarga debe ocurrir dentro de 2 segundos después del lanzamiento de 5 segundos de presión firme (p. ej., por el dedo del médico) en el paciente supina sano normal6. El fundamento para la prueba es que un tiempo de recarga más lento indicaría la perfusión deficiente de la piel, posible causada por uno de una serie de eventos críticos tales como sepsis, hemorragia, insuficiencia cardiaca aguda o hipotermia.
Actualmente, no hay ningún consenso en un método de vanguardia para la realización de la prueba de CR de7,6,8,9,10. Temas polémicos incluyen la falta de estandarización de la maniobra real de escaldado y la dependencia subjetiva (es decir, a simple vista) evaluación de la recarga extremo7,9,11. Además, hay indicios de que el género influye CR tiempo12,13. La temperatura, tanto ambiental y de la piel, se sabe que afectan el tiempo de relleno capilar, pero hasta qué punto no está clara. Por último, el uso de sitios de medición diferente, periféricos o centrales, es probablemente una causa adicional de variabilidad en los resultados de algunos estudios en esta zona14,15.
En el presente trabajo, hemos utilizado un sistema óptico de la bioingeniería para registrar el curso de retorno de la sangre y la posterior respuesta hiperémica visto durante la prueba de CR. El sistema utiliza espectroscopia de polarización difuso para cuantificar y describir con mayor detalle que sea posible con el ojo desnudo, el tiempo y el curso de la recarga capilar. El sistema consta de una cámara digital estándar, con un anillo de luz externo con 92 LEDs blancos y software especialmente desarrollado. El objetivo y los filtros de dos polarización, conectados ortogonalmente delante de los LEDs, bloquean la luz que se ha visto directamente reflejada desde la superficie de la piel permitiendo la única luz que ha ser despolarizada en el tejido para llegar a la cámara. Esto genera una imagen "sub epidérmico" del tejido a una profundidad de aproximadamente 0,5 mm. La imagen es dividida en sus planos de color y se calcula el contenido de rojo y verde para cada píxel, generando un valor que corresponde a la concentración de tejido de células de sangre rojas16. En modo vídeo, la resolución temporal del sistema es 0.02 s.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>TiVi701 Camera</td>
			<td>WheelsBridge AB</td>
			<td>TiVi701 Camera, version 1.5.1</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TiVi700</td>
			<td>WheelsBridge AB</td>
			<td>TiVi700 Analysis, version 1.2.9</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Canon EOS 700D</td>
			<td>Canon U.S.A., inc.</td>
			<td>Canon EOS 700D</td>
			<td>Digital SLR Camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera stand</td>
			<td>Manfrotto</td>
			<td>681B</td>
			<td>Modified camera stand to hold the digital camera in position</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera stand</td>
			<td>Disa Denmark</td>
			<td>9020B</td>
			<td>Modified camera stand to hold the digital camera in position</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

diffuse reflectance spectroscopy: getting the capillary refill test under one's thumb

La prueba de llenado capilar se introdujo en 1947 para ayudar a estimar el Estado circulatorio en pacientes críticamente enfermos. Directrices del estado comúnmente ese relleno debe ocurrir dentro de 2 s después de lanzar 5 s de presión firme (p. ej., por el dedo del médico) en el paciente supina sano normal. Un tiempo de recarga más lento indica perfusión deficiente de la piel, que puede ser causada por afecciones como la sepsis, la pérdida de sangre, hipoperfusión e hipotermia. Desde su introducción, se ha debatido la utilidad clínica de la prueba. Los defensores señalan su factibilidad y sencillez y afirman que pueden indicar cambios en el estado vascular antes que los cambios en los signos vitales como frecuencia cardiaca. Críticos, por el contrario, subrayan que la falta de estandarización en cómo se realiza la prueba y la naturaleza altamente subjetiva de la evaluación del ojo, así como la susceptibilidad de la prueba a factores ambientales, reduce notablemente el valor clínico. El objetivo del presente trabajo es describir en detalle el curso del evento de recarga y sugerir potencialmente más objetivos y valores del extremo exacto para el capilar llenar prueba usando la espectroscopia de polarización difusa.

Película del curso de la recarga capilar genera grandes cantidades de datos no es posibles obtener el gravamen del ojo desnudo. Aquí sugerimos nuevas terminales para mejorar aún más la utilidad de la prueba de CR como un indicador temprano de deterioro del Estado circulatorio. Llamamos a estos extremos: "Línea de base," "Sangre cero" (o "BZ"), "hora de volver a la línea de base 1" (o "tRtB1"), "Tiempo a pico" o "Tpk." El valor de "Referencia" deriva calculando un valor medio de tod...

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Diffuse Reflectance Spectroscopy: Getting the Capillary Refill Test Under One's Thumb

Este protocolo describe cómo el uso de la espectroscopia de polarización difusa puede mejorar la utilidad clínica de la prueba de llenado capilar. Sugerimos un análisis más detallado del curso de la recarga capilar en voluntarios sanos utilizando espectroscopia de reflectancia difusa videos y nuevas terminales informáticos.

Espectroscopia de reflectancia difusa: Conseguir la prueba de llenado capilar bajo la

The capillary refill test was introduced in 1947 to help estimate circulatory status in critically ill patients. Guidelines commonly state that refill ...

diffuse-reflectance-spectroscopy-getting-capillary-refill-test-under

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An Overview of the Cardiovascular System: Anatomy, Physiology, Assessment, and Abnormalities

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9.0K vistas.  Region Östergötland. Este protocolo describe cómo el uso de la espectroscopia de polarización difusa puede mejorar la utilidad clínica de la prueba de llenado capilar. Sugerimos un análisis más detallado del curso de la recarga capilar en voluntarios sanos utilizando espectroscopia de reflectancia difusa videos y nuevas terminales informáticos.

Video: Diffuse Reflectance Spectroscopy: Getting the Capillary Refill Test Under One's Thumb

Imaging Odor-Evoked Activities in the Mouse Olfactory Bulb using Optical Reflectance and Autofluorescence Signals

In the brain, sensory stimulation activates distributed populations of neurons among functional modules which participate to the coding of the stimulus. Functional optical imaging techniques are advantageous to visualize the activation of these modules in sensory cortices with high spatial resolution. In this context, endogenous optical signals that arise from molecular mechanisms linked to neuroenergetics are valuable sources of contrast to record spatial maps of sensory stimuli over wide fields in the rodent brain.
Here, we present two techniques based on changes of endogenous optical properties of the brain tissue during activation. First the intrinsic optical signals (IOS) are produced by a local alteration in red light reflectance due to: (i) absorption by changes in blood oxygenation level and blood volume (ii) photon scattering. The use of in vivo IOS to record spatial maps started in the mid 1980's with the observation of optical maps of whisker barrels in the rat and the orientation columns in the cat visual cortex1. IOS imaging of the surface of the rodent main olfactory bulb (OB) in response to odorants was later demonstrated by Larry Katz's group2. The second approach relies on flavoprotein autofluorescence signals (FAS) due to changes in the redox state of these mitochondrial metabolic intermediates. More precisely, the technique is based on the green fluorescence due to oxidized state of flavoproteins when the tissue is excited with blue light. Although such signals were probably among the first fluorescent molecules recorded for the study of brain activity by the pioneer studies of Britton Chances and colleagues3, it was not until recently that they have been used for mapping of brain activation in vivo. FAS imaging was first applied to the somatosensory cortex in rodents in response to hindpaw stimulation by Katsuei Shibuki's group4.
The olfactory system is of central importance for the survival of the vast majority of living species because it allows efficient detection and identification of chemical substances in the environment (food, predators). The OB is the first relay of olfactory information processing in the brain. It receives afferent projections from the olfactory primary sensory neurons that detect volatile odorant molecules. Each sensory neuron expresses only one type of odorant receptor and neurons carrying the same type of receptor send their nerve processes to the same well-defined microregions of &tilde;100&mu;m3 constituted of discrete neuropil, the olfactory glomerulus (Fig. 1). In the last decade, IOS imaging has fostered the functional exploration of the OB5, 6, 7 which has become one of the most studied sensory structures. The mapping of OB activity with FAS imaging has not been performed yet.
Here, we show the successive steps of an efficient protocol for IOS and FAS imaging to map odor-evoked activities in the mouse OB.

This article presents the protocols of intrinsic optical signals and flavoproteins autofluorescence signals imaging to map odor-evoked activities at the surface of the olfactory bulb in mice.

Actividades de imagen de olores provocados en el bulbo olfatorio de ratón utilizando reflexión óptica y señales de autofluorescencia

In the brain, sensory stimulation activates distributed populations of neurons among functional modules which participate to the coding of the stimulus. ...

Investigación

Neurociencias

The Mouse Forced Swim Test

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental manipulations that are aimed at rendering or preventing depressive-like states. Mice are placed in an inescapable transparent tank that is filled with water and their escape related mobility behavior is measured. The forced swim test is straightforward to conduct reliably and it requires minimal specialized equipment. Successful implementation of the forced swim test requires adherence to certain procedural details and minimization of unwarranted stress to the mice. In the protocol description and the accompanying video, we explain how to conduct the mouse version of this test with emphasis on potential pitfalls that may be detrimental to interpretation of results and how to avoid them. Additionally, we explain how the behaviors manifested in the test are assessed.

The forced swim test is validated as an experimental approach to assess potential antidepressant efficacy in rodents. Experimental animals are placed in a tank of water and escape-related mobility behavior is quantified. The common procedures for the mouse version of this test are described.

El ratón de prueba de natación forzada

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental ...

The Tail Suspension Test

The tail-suspension test is a mouse behavioral test useful in the screening of potential antidepressant drugs, and assessing of other manipulations that are expected to affect depression related behaviors. Mice are suspended by their tails with tape, in such a position that it cannot escape or hold on to nearby surfaces. During this test, typically six minutes in duration, the resulting escape oriented behaviors are quantified. The tail-suspension test is a valuable tool in drug discovery for high-throughput screening of prospective antidepressant compounds. Here, we describe the details required for implementation of this test with additional emphasis on potential problems that may occur and how to avoid them. We also offer a solution to the tail climbing behavior, a common problem that renders this test useless in some mouse strains, such as the widely used C57BL/6. Specifically, we prevent tail climbing behaviors by passing mouse tails through a small plastic cylinder prior to suspension. Finally, we detail how to manually score the behaviors that are manifested in this test.

The tail-suspension test is validated as an experimental procedure to assess antidepressant efficacy of drug treatments in mice. Mice are suspended by their tails for six minutes and escape-related behaviors are assessed. We describe procedures used in conducting the tail suspension test.

La prueba de la suspensión trasera

The tail-suspension test is a mouse behavioral test useful in the screening of potential antidepressant drugs, and assessing of other manipulations that ...

Laser Nanosurgery of Cerebellar Axons In Vivo

Only a few neuronal populations in the central nervous system (CNS) of adult mammals show local regrowth upon dissection of their axon. In order to understand the mechanism that promotes neuronal regeneration, an in-depth analysis of the neuronal types that can remodel after injury is needed. Several studies showed that damaged climbing fibers are capable of regrowing also in adult animals1,2. The investigation of the time-lapse dynamics of degeneration and regeneration of these axons within their complex environment can be performed by time-lapse two-photon fluorescence (TPF) imaging in vivo3,4. This technique is here combined with laser surgery, which proved to be a highly selective tool to disrupt fluorescent structures in the intact mouse cortex5-9.
This protocol describes how to perform TPF time-lapse imaging and laser nanosurgery of single axonal branches in the cerebellum in vivo. Olivocerebellar neurons are labeled by anterograde tracing with a dextran-conjugated dye and then monitored by TPF imaging through a cranial window. The terminal portion of their axons are then dissected by irradiation with a Ti:Sapphire laser at high power. The degeneration and potential regrowth of the damaged neuron are monitored by TPF in vivo imaging during the days following the injury.

Laser Nanosurgery of Cerebellar Axons In Vivo

Two-photon imaging, coupled to laser nanodissection, are useful tools to study degenerative and regenerative processes in the central nervous system with subcellular resolution. This protocol shows how to label, image, and dissect single climbing fibers in the cerebellar cortex in vivo.

Laser Nanocirugía del cerebelo Los axones<em&gt; En Vivo</em

Only a few neuronal populations in the central nervous system (CNS) of adult mammals show local regrowth upon dissection of their axon. In order to ...

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of the right type and quantity of food therefore has a major influence on quality of life. Research on feeding behavior focuses on the underlying processes that ensure actual feeding and unravels the role of factors regulating internal energy homeostasis and the neuronal bases of decision-making. The model organism Drosophila melanogaster, with its great variety of genetically traceable tools for labeling and manipulating single neurons, allows mapping of neuronal networks and identification of molecular signaling cascades involved in the regulation of food intake. This report demonstrates the CApillary FEeder assay (CAFE) and shows how to measure food intake in a group of flies for time spans ranging from hours to days. This easy-to-use assay consists of glass capillaries filled with liquid food that flies can freely access and feed on. Food consumption in the assay is accurately determined using simple measurement tools. Herein we describe step-by-step the method from setup to successful execution of the CAFE assay, and provide practical examples to analyze the food intake of a group of flies under controlled conditions. The reader is guided through possible limitations of the assay, and advantages and disadvantages of the method compared to other feeding assays in D. melanogaster are evaluated.

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

The CApillary FEeder (CAFE) assay is a simple, budget-friendly, highly reliable method for investigating mechanisms underlying food intake. Used with the highly versatile genetic model organism Drosophila melanogaster, it provides a powerful means of gaining new insights into regulatory mechanisms of food intake.

El alimentador de ensayo capilar para analizar el consumo de alimentos en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of ...

Simultaneous Evaluation of Cerebral Hemodynamics and Light Scattering Properties of the In Vivo Rat Brain Using Multispectral Diffuse Reflectance Imaging

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional multispectral diffuse reflectance imaging system. This system is constructed from a broadband white light source, a motorized filter wheel with a set of narrowband interference filters, a light guide, a collecting lens, a video zoom lens, and a monochromatic charged-coupled device (CCD) camera. An ellipsoidal cranial window is made in the skull bone of a rat under isoflurane anesthesia to capture in vivo multispectral diffuse reflectance images of the cortical surface. Regulation of the fraction of inspired oxygen using a gas mixture device enables the induction of different respiratory states such as normoxia, hyperoxia, and anoxia. A Monte Carlo simulation-based multiple regression analysis for the measured multispectral diffuse reflectance images at nine wavelengths (500, 520, 540, 560, 570, 580, 600, 730, and 760 nm) is then performed to visualize the two-dimensional maps of hemodynamics and the light scattering properties of the in vivo rat brain.

Simultaneous Evaluation of Cerebral Hemodynamics and Light Scattering Properties of the In Vivo Rat Brain Using Multispectral Diffuse Reflectance Imaging

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional multispectral diffuse reflectance imaging system.

La evaluación simultánea de Hemodinámica cerebral y propiedades de dispersión de luz de la<em&gt; En Vivo</em&gt; Cerebro de rata utilizando multiespectral de imágenes de reflectancia difusa

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional ...

Functional Magnetic Resonance Spectroscopy at 7 T in the Rat Barrel Cortex During Whisker Activation

Nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy offers the opportunity to measure cerebral metabolite contents in vivo and noninvasively. Thanks to technological developments over the last decade and the increase in magnetic field strength, it is now possible to obtain good resolution spectra in vivo in the rat brain. Neuroenergetics (i.e., the study of brain metabolism) and, especially, metabolic interactions between the different cell types have attracted more and more interest in recent years. Among these metabolic interactions, the existence of a lactate shuttle between neurons and astrocytes is still debated. It is, thus, of great interest to perform functional proton magnetic resonance spectroscopy (1H-MRS) in a rat model of brain activation and monitor lactate. However, the methyl lactate peak overlaps lipid resonance peaks and is difficult to quantify. The protocol described below allows metabolic and lactate fluctuations to be monitored in an activated brain area. Cerebral activation is obtained by whisker stimulation and 1H-MRS is performed in the corresponding activated barrel cortex, whose area is detected using blood-oxygen-level-dependent functional magnetic resonance imaging (BOLD fMRI). All steps are fully described: the choice of anesthetics, coils, and sequences, achieving efficient whisker stimulation directly in the magnet, and data processing.

After checking by blood-oxygen-level-dependent functional magnetic resonance imaging (BOLD fMRI) that the corresponding somatosensory barrel field cortex area (called S1BF) is correctly activated, the main goal of this study is to quantify lactate content fluctuations in the activated rat brains by localized proton magnetic resonance spectroscopy (1H-MRS) at 7 T.

Espectroscopia de resonancia magnética funcional en 7 T en la corteza del cañón de rata durante la activación de la barba

Nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy offers the opportunity to measure cerebral metabolite contents in vivo and noninvasively. Thanks to ...

Ex Vivo Pressurized Hippocampal Capillary-Parenchymal Arteriole Preparation for Functional Study

From subtle behavioral alterations to late-stage dementia, vascular cognitive impairment typically develops following cerebral ischemia. Stroke and cardiac arrest are remarkably sexually dimorphic diseases, and both induce cerebral ischemia. However, progress in understanding the vascular cognitive impairment, and then developing sex-specific treatments, has been partly limited by challenges in investigating the brain microcirculation from mouse models in functional studies. Here, we present an approach to examine the capillary-to-arteriole signaling in an ex vivo hippocampal capillary-parenchymal arteriole (HiCaPA) preparation from mouse brain. We describe how to isolate, cannulate, and pressurize the microcirculation to measure arteriolar diameter in response to capillary stimulation. We show which appropriate functional controls can be used to validate the HiCaPA preparation integrity and display typical results, including testing potassium as a neurovascular coupling agent and the effect of the recently characterized inhibitor of the Kir2 inward rectifying potassium channel family, ML133. Further, we compare the responses in preparations obtained from male and female mice. While these data reflect functional investigations, our approach can also be used in molecular biology, immunochemistry, and electrophysiology studies.

The present manuscript details how to isolate hippocampal arterioles and capillaries from the mouse brain and how to pressurize them for pressure myography, immunofluorescence, biochemistry, and molecular studies.

Ex Vivo Presurizado Hippocampal Capillary-Parenchymal Arteriole Preparación para Estudio Funcional

From subtle behavioral alterations to late-stage dementia, vascular cognitive impairment typically develops following cerebral ischemia. Stroke and ...

Induction of Diffuse Axonal Brain Injury in Rats Based on Rotational Acceleration

Traumatic brain injury (TBI) is a major cause of death and disability. Diffuse axonal injury (DAI) is the predominant mechanism of injury in a large percentage of TBI patients requiring hospitalization. DAI involves widespread axonal damage from shaking, rotation or blast injury, leading to rapid axonal stretch injury and secondary axonal changes that are associated with a long-lasting impact on functional recovery. Historically, experimental models of DAI without focal injury have been difficult to design. Here we validate a simple, reproducible and reliable rodent model of DAI that causes widespread white matter damage without skull fractures or contusions.

This protocol validates a reliable, easy-to-perform and reproducible rodent model of brain diffuse axonal injury (DAI) that induces widespread white matter damage without skull fractures or contusions.

Inducción de lesión cerebral axonal difusa en ratas basada en aceleración rotacional

Traumatic brain injury (TBI) is a major cause of death and disability. Diffuse axonal injury (DAI) is the predominant mechanism of injury in a large ...

Culture of Brain Capillary Pericytes for Cytosolic Calcium Measurements and Calcium Imaging Studies

Pericytes are associated with endothelial cells and astrocytic endfeet in a structure known as the neurovascular unit (NVU). Brain capillary pericyte function is not fully known. Pericytes have been suggested to be involved in capillary development, regulation of endothelial barrier tightness and trancytosis activity, regulation of capillary tone and to play crucial roles in certain brain pathologies.
Pericytes are challenging to investigate in the intact brain due to the difficulties in visualizing processes in the brain parenchyma, as well as the close proximity to the other cells of the NVU. The present protocol describes a method for isolation and culture of primary bovine brain capillary pericytes and their following usage in calcium imaging studies, where effects of agonists involved in brain signaling and pathologies can be investigated. Cortical capillary fragments are allowed to attach to the bottom of culture flasks and, after 6 days, endothelial cells and pericytes have grown out from the capillary fragments. The endothelial cells are removed by gentle trypsinization and pericytes are cultured for 5 additional days before passaging.
Isolated pericytes are seeded in 96-well culture plates and loaded with the calcium indicator dye (Fura-2 acetoxymethyl (AM)) to allow for measurements of intracellular calcium levels in a plate reader setup. Alternatively, pericytes are seeded on coverslips and mounted in cell chambers. Following loading with the calcium indicator (Cal-520 AM), calcium live-imaging can be performed using confocal microscopy at an excitation wavelength of 488 nm and emission wavelength of 510-520 nm.
The method described here has been used to obtain the first intracellular calcium measurements from primary brain capillary pericytes, demonstrating that pericytes are stimulated via ATP and are able to contract in vitro.

Brain capillary pericytes are essential players in the regulation of blood-brain barrier properties and blood flow. This protocol describes how brain capillary pericytes can be isolated, cultured, characterized with respect to cell type and applied for investigations of intracellular calcium signaling with fluorescent probes.

Cultivo de pericitos capilares cerebrales para mediciones de calcio citosólico y estudios de imágenes de calcio

Pericytes are associated with endothelial cells and astrocytic endfeet in a structure known as the neurovascular unit (NVU). Brain capillary pericyte ...