Generalitat Valenciana, PROMETEOII / 2014/063; Ministerio de sanidad, servicios sociales e igualdad. Delegación del gobierno para el Plan Nacional sobre drogas, proyectos de investigación en Toxicomanías, 2014I007; Ministerio de economía y competitividad (MINECO), Instituto de Salud Carlos III, red de adictivos (RTA) los trastornos RD12 / 0028/0005 y RD16 / 17/07/00 y la Unión Europea, FEDER fondos "una manera de hacer Europa" y PSI2014-51847-R.

Todos los procedimientos que implica su cuidado y ratones el cumplimiento de las leyes nacionales, regionales y locales y regulaciones, que están de acuerdo con la Directiva 2010/63/UE del Parlamento Europeo y del Consejo de 22 de septiembre de 2010 sobre la protección de los animales utilizados para fines científicos. El uso de animales y el Comité de atención de la Universidad de Valencia aprobaron el presente Protocolo.
1. materiales y configuración de preferencia de lugar condicionada:
<ol><li>Manejar ratones 3 días antes de la prueba de 1-2 minutos cada uno. La base de la cola debe ser comprendida. El cuerpo debe estar apoyado si es posible. Esto se hace para minimizar el dolor y el malestar al manipular un animal y para evitar que las variables que interfieren, tales como estrés. Nota: De ratones machos 1 60 días de edad (adultos jóvenes) con 35-40 g de peso se emplearon en los presentes experimentos. Puede realizar reintegro droga-inducida en ratones de ambos sexos. Sin embargo, sobre reintegro de inducida por el estrés, el paradigma social derrota está diseñado sólo para roedores machos, como hembras no inducen una respuesta agresiva en los ratones residente.</li>
	<li>Para el acondicionamiento del lugar, utilice cajas idénticas hechas con dos compartimientos idénticos (30,7 cm largo 31,5 cm ancho × alto 34,5 cm) separados por un área gris central más pequeño (13,8 largo 31,5 cm ancho × 34,5 alto). Nota: Los compartimientos tienen piso diferentes texturas y colores de la pared (un piso liso en el compartimiento negro y un suelo áspero en el blanco). Cada compartimiento de la caja CPP contiene cuatro haces de luz infrarrojas y seis en el compartimento central. Esto permite la grabación de los cruces entre compartimentos y la posición del animal.</li>
	<li>Situado encima de las luces de la habitación (apagadas o bajadas) cada día. Usar luces rojas (recomendadas), como los animales no lo perciben y se atenúa por el experimentador (aproximadamente 40 lux medido a 1 m sobre el nivel del piso).</li>
	<li>Configurar el programa para registrar a 15 min de acondicionamiento pre y post prueba (véase la Tabla de materiales para software) (figura 2)</li>
	<li>Preparar la solución de cocaína necesaria para el experimento entero. Disolver el clorhidrato de cocaína en 0.9% NaCl (solución salina) en un volumen de 0,1 mL/10 g de peso corporal. Mezcla de vórtice y conservar a 4 ° C al final del día. Nota: Las concentraciones de cocaína pueden variar dependiendo del propósito del estudio. Si el objetivo es evaluar las dosis subliminal de la cocaína, podría usarse una concentración de 1 mg/kg, que es ineficaz en los animales de control, como se ha visto en anteriores estudios24,35. Si una dosis efectiva es el propósito, una concentración de 6 mg/kg puede ser elegido, que es efectiva pero no induce reintegro24, o una concentración de 25 mg/kg, que es eficaz e induce la reinstalación de preferencia19.</li>
	<li>Los animales de prueba durante la fase oscura y utilice la misma caja para cada animal en días.</li>
	<li>Traer animales todos los días a la sala de pruebas en sus jaulas hogar y dejarlos inalterados durante 15 min como un periodo de habituación a todos los sonidos relacionados con la prueba.</li>
</ol>2. prueba
<ol><li>Adquisición Nota: El procedimiento del lugar acondicionado, imparcial en cuanto a la preferencia espontánea inicial, consta de tres etapas: acondicionamiento previo, acondicionamiento y condicionamiento posterior (figura 1).<ol>
<li>
Acondicionamiento previo (Pre-C) (3 días) (figura 2, figura 3, figura 4) Nota: Aquí se evalúa el valor neutro de los compartimientos en el cuadro de CPP. Medir el tiempo empleado en cada compartimiento y después compararlo con el pasó en el mismo compartimiento en la prueba post acondicionado.<ol>
<li>Llevar los animales a la sala de ensayo y dejar habituado durante 15 minutos.</li>
			<li>Compruebe que las guillotinas se quitan de la jaula.</li>
			<li>Configurar la computadora y el programa. Introduzca animales ID y pulse el "Juicio" y "Start" comando (figura 2).</li>
			<li>Coloque el ratón suavemente en la cámara intermedia (compartimiento gris) y dejar el cuarto de prueba con mínimo ruido.</li>
			<li>Poner todos los animales en sus jaulas hogar y guardar los datos cuando se termine el juicio.</li>
			<li>Permiten ratones a ambos compartimientos del aparato durante 15 minutos (900 s) por día durante 3 días consecutivos.</li>
			<li>El día 3, anote el tiempo empleado en cada compartimento durante un período de s 900 y guárdelo para la asignación de compartimientos en la siguiente fase (figura 3).</li>
			<li>Asignar la mitad de los animales en cada grupo para recibir el medicamento o el vehículo en un compartimiento (por ejemplo, negro) y la otra mitad en el otro compartimiento (por ejemplo, blanco) (figura 4). Nota: La distribución final de los animales debe asegurarse de que la mitad de los animales se asignan en el compartimiento inicialmente preferido y la otra mitad del compartimiento no-preferidas. Además, la mitad de los animales recibió la droga en un compartimiento (por ejemplo, el uno negro) y la otra mitad en el otro (en este caso, el uno blanco).</li>
			<li>Cuentas de balance en el grupo en ambos compartimientos, así como a través de grupos (prueba de diferencias de grupos con un análisis de varianza (ANOVA)). Como guía aproximada, los valores deben ser alrededor de 360-370 s en la prueba Pre-C (figura 4). Nota: no debe detectarse ninguna diferencia significativa entre el tiempo empleado en los compartimientos emparejado de droga y vehículo junto durante la prueba Pre-C.</li>
			<li>Excluir a los animales que presentan una fuerte aversión o preferencia de cualquier compartimiento. Considerar aversión como pasar menos tiempo que el 33% en el compartimiento y considerar la preferencia cuando el animal pasó más de un 67% del tiempo total en eso compartimiento.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Acondicionado (4 días) (figura 5)
		<ol>
<li>Pesan los animales y estos pesos para dosis de cocaína durante el acondicionado.</li>
			<li>Preparar las jeringuillas con cocaína o solución salina basada en peso corporal.</li>
			<li>Inyectar un ratón a la vez por vía intraperitoneal (ip) e inmediatamente colóquelo suavemente en el compartimiento asignado de negro o blanco de su caja.</li>
			<li>Después de un intervalo de 4 h, inyectar la dosis de la droga inmediatamente antes de que el ratón se limita al compartimiento asociado de drogas por 30 min (figura 5).</li>
			<li>Alterne este procedimiento cada día, comenzando con la cocaína en los días 1 y 3 y solución salinos los días 2 y 4.</li>
			<li>Asegúrese de confinamiento se lleva a cabo en ambos casos por el cierre de la puerta de guillotina que separa los dos compartimientos, haciendo inaccesible la zona central. Nota: En esta fase, no hay para configurar el programa de PC.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Acondicionado después (Post-C) (1 día)
		<ol>
<li>Llevar los animales a la sala de ensayo y dejar habituado durante 15 minutos.</li>
			<li>Retire la puerta de guillotina separa los dos compartimientos.</li>
			<li>Configurar la computadora y el programa. Introduzca animales ID y pulse el comando "start".</li>
			<li>Registrar el tiempo empleado por los ratones no tratados en cada compartimento durante un período de observación s 900.</li>
			<li>Cuando termine el juicio, recuperar todos los animales en sus jaulas hogar y guardar los datos.</li>
			<li>Consideran que la droga ha inducido a preferencia de lugar si el tiempo empleado en el compartimiento asociado de drogas durante el Post-C es significativamente mayor que en la prueba Pre-C. Si ocurre lo contrario, considere una aversión para el compartimiento asociado de drogas.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Extinción
	<ol>
<li>Realizar una sesión semanal de extinción en todos los grupos/animales que desarrollaron una preferencia por el compartimiento asociado de drogas.</li>
		<li>Coloque el animal en el aparato (sin guillotinas) durante 15 minutos (igual que las pruebas previas y Post-C) (figura 1). Nota: Si la dosis empleada en el CPP es alta (25 mg/kg), realizar 1 sesión de extinción por semana. Si una dosis subliminal es usado (1 mg/kg), luego realizar 2 sesiones de extinción por semana (por ejemplo el lunes y el jueves).</li>
		<li>Considerar la preferencia extinguida cuando los datos de la prueba de extinción no muestran diferencias significativas con respecto a la prueba de Pre-C, pero muestran diferencias con respecto a la prueba de Post-C.</li>
		<li>Repita la prueba de 24 h más tarde para confirmar la extinción.</li>
	</ol></li>
	<li>Reintegro de CPP
	<ol>
<li>
Reintegro de cebado-inducida
		<ol>
<li>Evaluar los efectos de una dosis de cebado de cocaína 24 h después de extinción ha sido confirmada. Nota: Dosis de cebado son mitad de la dosis anterior que ha recibido el animal durante el acondicionado. El mismo protocolo como en C Pre y Post-C pruebas somete a la prueba de reintegro, salvo que los animales reciban la dosis de cocaína en un no-contingente lugar 15 min antes del examen. Puede mejorarse la eficacia de cebado de drogas en la inducción de reintegro después de extinción/reintegro repetida experiencias de23, aunque el orden de las dosis no parece jugar un papel en los resultados obtenidos36.</li>
			<li>Llevar los animales a otra habitación de la sala de ensayo (lugar no contingentes) (figura 6).</li>
			<li>Inyectar con la mitad de la dosis anterior de la cocaína (por ejemplo, si los animales se acondicionaron con 25 mg/kg de cocaína, una dosis de cebado sería 12.5 mg/kg).</li>
			<li>Traer de vuelta a su vivero durante 15 minutos.</li>
			<li>Tenerlas en el cuarto de prueba y colocar los animales en el aparato inmediatamente (sin las puertas de guillotina separa los compartimientos) durante 15 minutos (igual que el pre- y Post-C pruebas).</li>
			<li>Considerar la diferencia en segundos entre el tiempo empleado en el compartimiento asociado de drogas durante la última sesión de extinción y la prueba de restablecimiento como una medida del grado de restablecimiento de la preferencia inducida por la droga.</li>
			<li>Repita el procedimiento de reintegro de extinción cada vez con la disminución de dosis hasta que se confirma para ser ineficaz. Nota: Un control de la inyección de solución salina puede utilizarse para controlar la capacidad de cebado de la cocaína (y no de la inyección de sí mismo) para inducir el reintegro.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Reintegro inducida por estrés
		<ol>
<li>Evaluar los efectos de un reintegro de estrés 24 h después de extinción ha sido confirmada Nota: Pruebas de reposición son las mismas que las llevadas a cabo en el Post-C (deambulación libre durante 15 minutos), salvo que los animales son probados 15 min después de la derrota social en un agónico encuentro (figura 6)</li>
			<li>Llevar los animales a otra habitación de la sala de CPP.</li>
			<li>Coloque el ratón experimental con un agresivo sexo oponente comparable de igual edad y peso corporal en la jaula de plástico (figura 6). Nota: El agónico encuentro consiste en una prueba de 10 minutos en una jaula plástica transparente neutro (23x13.5x13cm) con un resultado de derrota para el ratón experimental. Para preparar al oponente agresivo, primero aislar diversos animales que coinciden en edad y peso corporal como los ratones experimentales durante 3 semanas. Entrenarlos para adquirir la experiencia de lucha y prueba de ellos para tener altos niveles de comportamiento agresivo territorial. Para obtener sus congéneres agresivos, ratones deben ser aislados por al menos 3 semanas y entonces entrenados en agresivo y atacar a comportamientos. Entrenan a los animales en un medio neutro, frente a ellos en pares. Dejamos que muerden los tiempos oponente 2 o 3 y sacarlos de la jaula, siempre terminando el entrenamiento antes de que uno de los dos ratones demuestra sumisión, para que la experiencia del encuentro refuerza el comportamiento agresivo. Después de sufrir la agresión (amenaza y ataque de coespecíficos agresivos), ratones experimentales presente evitar/huir y comportamiento defensivo/sumiso. El criterio es adoptar una postura concreta de la derrota, caracterizada por una posición sumisa, cojera patas delanteras, cabeza inclinada hacia arriba y orejas (figura 6) retractó. Según Burke et al., 2016, consideramos que el encuentro social se termina antes si el intruso muestra una sumisa postura supina para > 8 s o si ocurrieron 13 mordeduras de ataque. Otra opción a los animales de la pantalla sin riesgo de lesión significativa podría ser el animal en una caja de acoplamiento con un agujero, no lo suficientemente grande como para cualquier animal pasar el ritmo.  Agresión podría detectarse sin someter animales para dirigir el comportamiento agresivo.  Si un animal sostiene una lesión con una herida de 1cm de diámetro o exposición directa del músculo, se excluyeron del estudio y deben ser sacrificado.</li>
			<li>Después de 10 minutos de encuentro agonístico, tomar los ratones en el cuarto de prueba y colocar los animales en el aparato CPP inmediato (sin las puertas de guillotina separa los compartimientos) durante 15 minutos (igual que el pre- y Post-C pruebas).</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>3. estadístico análisis
Nota: Tamaño de la muestra Ideal debe tener un mínimo de 15 animales por grupo.
<ol><li>Analizar el tiempo medio pasado en el compartimiento asociado de drogas del grupo por medio de un ANOVA mixto con uno entre la variable tratamiento, con dos niveles (grupo Control, Grupo Experimental, ejemplo de dos grupos es en la figura 7 c) y en un plazo variable, días, con 2 niveles (C Pre y Post-C). Nota: En el grupo control, animales reciben la droga pero no tienen manipulaciones ambientales. Por otra parte, en el grupo experimental los animales están expuestos a diferentes condiciones ambientales. Comparar el tiempo pasado en el compartimiento asociado de drogas en el día Post-C con respecto al Pre-C prueba a ver si hay diferencias significativas en la sensibilidad a la droga.</li>
	<li>Además, realizar análisis post-hoc de Bonferroni para comprobar cualquiera de los puntos importantes.</li>
	<li>Analizar los datos relacionados con la extinción y restablecimiento de valores en los grupos que preferencia desarrollado mediante pruebas de t de Student´s para continuar con el procedimiento de reintegro de extinción durante el curso del experimento, pero en el momento final, analizarlas con un ANOVA con un plazo variable (días) con el número de niveles dependiendo de cada grupo. Nota: Cuando se incrementa el número de comparaciones, el número de los que será importante por casualidad también aumentó. Como tal, para evitar falsos positivos (errores de tipo 1) que 'corregir' el valor de p para la prueba más conservador con la corrección de Bonferroni de varias pruebas de t. Sin embargo, para el examen de reincorporación, la comparación debe hacerse entre el reintegro y la última prueba de extinción. Por lo tanto, no es necesario para la corrección.</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

El punto clave de la investigación de la adicción a la droga es el desarrollo de tratamientos que disminuyen el deseo y, en consecuencia, reducir la vulnerabilidad a la recaída. Gracias al modelo de reposición del paradigma CPP, es posible estudiar la influencia de diversos factores ambientales y de procedimientos que modulan la recaída, que es una prioridad de investigación futura. Hay algunos puntos importantes a considerar, como el paradigma de la CPP es una prueba que es altamente sensible a factores ambientale...

El paradigma de la preferencia de lugar condicionada (CPP) ofrece una forma simple de evaluar la recompensa condicionada inducida por diversos estímulos1,2y se ha utilizado ampliamente para el estudio de los efectos gratificantes condicionados de drogas adictivas3 . Se basa en acondicionamiento pavloviano, evaluar el valor motivacional de señales ambientales asociada a drogas para mantener el comportamiento adictivo4. En este modelo, señales ambientales adquieren propiedades secundarias apetitivo (efectos gratificantes acondicionados) cuando se combina con un reforzador primario3. Por ejemplo, un lugar inicialmente neutro (como el color de un compartimiento en la jaula CPP) se empareja con los efectos específicos de una droga de abuso durante algunos acondicionado sesiones5, mientras que el otro compartimiento se asocia con la inyección de un vehículo. Después acondicionado, si el animal pasa más tiempo en el compartimiento previamente asociado con la droga, se supone que el CPP ha desarrollado3. El establecimiento de la preferencia se logra cuando el animal da un valor positivo a las señales ambientales vinculadas a la droga, que es el reforzador primario. Por lo tanto, animales realizará respuestas conductuales que buscan droga en respuesta a las claves contextuales6. El modelo CPP permite la evaluación de las propiedades gratificantes de dosis subliminal de la droga, mostrando animales en una condición específica (por ejemplo, haber sufrido previamente de derrota social) sean más vulnerables y sensibles a las dosis que son no eficaz en ingenuos animales7.
El modelo CPP también ha sido utilizado para evaluar extinción/reintegro como modelo animal para el estudio de recidiva3, que es el objetivo del presente Protocolo. Hay tres diferentes fases: adquisición, extinción y restitución (figura 1). En el modelo de reintegración de CPP, animales primero adquieran el CPP para un compartimiento asociado de drogas, y luego realizan varias sesiones de extinción. Definimos la extinción como el momento en que el animal reduce sus respuestas conductuales de la aproximación a un estímulo condicionado de gratificante que ha sido eliminado (por ejemplo, la droga)8. Durante las sesiones de extinción, animales exploran los compartimientos en la ausencia de la droga, por lo que la preferencia adquirida es gradualmente atenuado9. Un tema importante a considerar es que el cambio de comportamiento que exhibe el animal en extinción (la disminución progresiva en el tiempo pasado en el compartimiento asociado de drogas) puede ser debido a nuevos procesos de aprendizaje que compiten con la anterior respuesta aprendida, o debido a una disminución en el estado motivacional interno del tema3. Por último, el restablecimiento de la preferencia de lugar a través de las claves de contexto o de la droga sería nuestro modelo de reintegro1.
Administrar una inyección de cebado de la droga asociada puede restablecer la preferencia, que se considera un reestablecimiento de la aproximación a las claves contextuales. Reintegro de cebado de drogas ocurre debido a la persistente memoria de los efectos placenteros de la droga, que inducido por antojo y motiva a los animales a buscar las señales ambientales relacionadas con la recompensa.
Algunas ventajas del modelo de reincorporación de CPP son que el procedimiento es no invasivo (en contraste con administración propia, que requiera cirugía), barato y simple. Además, este modelo tiene una validez de buen criterio, que imita bien a lo que ocurre en los seres humanos10,11, inducción de reintegro con los estímulos que inducen a la recaída, como exposición a las drogas12,13 o estrés14.
Hay otras técnicas como la extinción – modelo de reincorporación de autoadministración intravenosa. Aquí, animales presionar una palanca de autoadministrarse la droga, que permite la evaluación de la respuesta operante el animal, la compulsión y la motivación14,15,16. La principal ventaja de la CPP sobre procedimientos de autoadministración es que reintegro de CPP se considera que refleja la reactivación del valor del incentivo motivacional de los estímulos del contexto junto con la droga, consistente en la reaparición del enfoque comportamiento al contexto17. Por otra parte, estímulos no farmacológicos, como el estrés, también pueden inducir la reincorporación de18,19. Por ejemplo, un estudio de la administración propia había descrito ningún efecto sobre el reintegro de la ingesta de heroína en ratas después de un choque de pie o retención estrés20. Autores discuten que era fracasado porque los estresores fueron probados fuera de la cámara de administración propia en un contexto diferente. En cambio, cuando se utiliza el modelo CPP de reintegro, hubo un claro establecimiento de CPP inducida por morfina después de usar los mismos estresores y aplicado en un contexto diferente a la del CPP y en diferentes momentos (0 y 15 min después de la exposición de estrés)18 .
Varios estudios en la literatura han mostrado formas diferentes de fármacos y reintegro inducida por estrés. Por un lado, se ha divulgado reintegro droga-inducida en ratas y ratones utilizando morfina5,21,22,23, cocaína24,25, anfetamina26, 27, etanol28,29y30de 3, 4-metilenedioximetanfetamina (MDMA). Por otro lado, la exposición al estrés puede ser un factor determinante en la vulnerabilidad al abuso de drogas. El estrés es conocido por aumentar los efectos gratificantes de drogas7,31,32 y su papel en recaída es bien establecido33,34. Por ejemplo, derrota en las interacciones sociales con un coespecíficos reinstala la morfina y la cocaína CPP18,19. Además, animales expuestos a repetir derrota social son más vulnerables a los efectos gratificantes condicionados de subliminal dosis de cocaína y restablecer la preferencia con dosis muy bajas de cocaína7.
Aplicación del modelo de reincorporación de CPP es una manera útil y sensible para evaluar la vulnerabilidad a la recaída en los animales y permite la evaluación de diferentes manipulaciones ambientales sutiles, que son los principales disparadores que amenazan recaída humana, tales como reinstalación de Medicamentoso o estrés.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>MONPRE 2Z software</td>
			<td>CIBERTEC S.A., Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Identical Plexiglas boxes with two equal sized compartments separated by a grey central area.</td>
			<td>CIBERTEC S.A., Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td>The compartments have different colored walls (black vs white) and distinct floor textures (fine grid in the black compartment and wide grid in the white one). All boxes are equipped with four infrared light beams in each compartment of the box and six in the central area which allow the recording of the position of the animal and its crossings from one compartment to the other.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cocaine hydrochloride</td>
			<td>Laboratorios Alcaliber S.A., Madrid, Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animals: mice of the OF1 outbred strain</td>
			<td>Charles River, Barcelona Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Male mice who arrive to the laboratory on PND 42 and on PND 60 perform the CPP test. These animals are specially indicated for social defeat and aggression models.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Diet- Teklad Global Diet 2014</td>
			<td>Supplied by Harlan Laboratories Models, S. L. (Barcelona, Spain)</td>
			<td></td>
			<td>13 kcal % fat, 67 kcal % carbohydrates and 20% kcal protein; 2.9 kcal/g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High fat diet TD.06415</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>45 kcal % fat, 36 kcal % carbohydrates and 19% kcal protein; 4.6 kcal/g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

reinstatement of drug-seeking in mice using the conditioned place preference paradigm

El presente Protocolo describe la preferencia de lugar condicionada (CPP) como un modelo de recaída en la adicción a las drogas. En este modelo, animales primero se entrenan para adquirir una preferencia de lugar condicionada en un compartimiento junto a drogas, y después de la prueba post acondicionado, realizan varias sesiones para extinguir la preferencia establecida. El CPP permite la evaluación de los efectos gratificantes condicionadas de señales ambientales relacionados con las drogas. Entonces, el CPP extinguido puede ser reintegrado enérgicamente por la administración no contingente de una dosis de cebado de la droga y por la exposición a estímulos estresantes. Ambos métodos se explicará aquí. Cuando el animal reinicie la respuesta conductual, un reintegro de la recompensa condicionada se considera que han tenido lugar.
Las principales ventajas de este protocolo están que es no invasivo, barato y sencillo con criterios de buena validez. Además, permite el estudio de diferentes manipulaciones ambientales, como el estrés o la dieta, que puede modular la recaída en drogas que buscan comportamientos. Sin embargo, una limitación es que si el investigador pretende explorar la motivación y efectos de refuerzo primarios de la droga, debe ser complementado con procedimientos de autoadministración, que implican respuestas operante de los animales.

En primer lugar, resultados representativos de la reincorporación de inducida por el estrés y el cebado se muestran en la figura 7 con adultos ratones machos OF1.
Los datos en la figura 7a-b que representa el tiempo pasaron en el compartment(s) vinculado a drogas en el pre y Post-C prueba se analizaron con una medidas repetidas ANOVA con día variable...

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Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

Este protocolo describe la preferencia de lugar condicionada (CPP) como un modelo de recaída. Este procedimiento permite la medición de la recaída en animales de laboratorio, considerando el impacto de señales ambientales asociada a drogas como ansias y recaída en absteniéndose de adictos es actualmente el foco de los programas de tratamiento de abuso de drogas.

Reintegro de la búsqueda de drogas en ratones utilizando el paradigma de preferencia condicionada del lugar

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to ...

reinstatement-drug-seeking-mice-using-conditioned-place-preference

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Behavior

Unit 1

Pharmacotherapy of Depression and Anxiety Disorders

SCIENTISTS IN ACTION

11.4K vistas.  Universitat de València. Este protocolo describe la preferencia de lugar condicionada (CPP) como un modelo de recaída. Este procedimiento permite la medición de la recaída en animales de laboratorio, considerando el impacto de señales ambientales asociada a drogas como ansias y recaída en absteniéndose de adictos es actualmente el foco de los programas de tratamiento de abuso de drogas.

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The Crossmodal Congruency Task as a Means to Obtain an Objective Behavioral Measure in the Rubber Hand Illusion Paradigm

The rubber hand illusion (RHI) is a popular experimental paradigm. Participants view touch on an artificial rubber hand while the participants' own hidden hand is touched. If the viewed and felt touches are given at the same time then this is sufficient to induce the compelling experience that the rubber hand is one's own hand. The RHI can be used to investigate exactly how the brain constructs distinct body representations for one's own body. Such representations are crucial for successful interactions with the external world. To obtain a subjective measure of the RHI, researchers typically ask participants to rate statements such as "I felt as if the rubber hand were my hand". Here we demonstrate how the crossmodal congruency task can be used to obtain an objective behavioral measure within this paradigm.
The variant of the crossmodal congruency task we employ involves the presentation of tactile targets and visual distractors. Targets and distractors are spatially congruent (i.e. same finger) on some trials and incongruent (i.e. different finger) on others. The difference in performance between incongruent and congruent trials - the crossmodal congruency effect (CCE) - indexes multisensory interactions. Importantly, the CCE is modulated both by viewing a hand as well as the synchrony of viewed and felt touch which are both crucial factors for the RHI.
The use of the crossmodal congruency task within the RHI paradigm has several advantages. It is a simple behavioral measure which can be repeated many times and which can be obtained during the illusion while participants view the artificial hand. Furthermore, this measure is not susceptible to observer and experimenter biases. The combination of the RHI paradigm with the crossmodal congruency task allows in particular for the investigation of multisensory processes which are critical for modulations of body representations as in the RHI.

We demonstrate how an objective measure can be employed in the widely employed rubber hand illusion paradigm. This measure is obtained by modifying the well-established crossmodal congruency task. This task allows the investigation of multisensory processes which are critical for modulations of body representations as in the rubber hand illusion.

El Grupo de Congruencia crossmodal como medio para obtener una medida del comportamiento objetivo de la Guía Caucho mano Illusion Paradigm

The rubber hand illusion (RHI) is a popular experimental paradigm. Participants view touch on an artificial rubber hand while the participants' own hidden ...

Investigación

Comportamiento

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes of interest allows for enhanced temporally- and regionally-specific control of gene deletion, compared to existing methods. While conditional deletion can also be achieved by mating mice that express Cre recombinase under the control of specific gene promoters with mice carrying a floxed gene, stereotaxic microinjection allows for targeting of discrete brain areas at experimenter-determined time points of interest. In the context of cocaine conditioned place preference, and other cocaine behavioral paradigms such as self-administration or psychomotor sensitization that can involve withdrawal, extinction and/or reinstatement phases, this technique is particularly useful in exploring the unique contribution of target genes to these distinct phases of behavioral models of cocaine-induced plasticity. Specifically, this technique allows for selective ablation of target genes during discrete phases of a behavior to test their contribution to the behavior across time. Ultimately, this understanding allows for more targeted therapeutics that are best able to address the most potent risk factors that present themselves during each phase of addictive behavior.

This article describes how to microinject viral vectors into mouse brain and then test in a conditioned place preference paradigm that includes an acquisition, extinction and reinstatement phase.

La microinyección estereotáxica de vectores virales que expresan Cre recombinasa para estudiar el papel de los genes diana de cocaína acondicionado Place Preferencia

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate drug-seeking behavior and prompt relapse in abstinent drug users. We have developed a procedure to study the behavioral and neural processes that mediate the impact of context on alcohol-seeking behavior in rats. Following acclimation to the taste and pharmacological effects of 15% ethanol in the home cage, male Long-Evans rats receive Pavlovian discrimination training (PDT) in conditioning chambers. In each daily (Mon-Fri) PDT session, 16 trials each of two different 10 sec auditory conditioned stimuli occur. During one stimulus, the CS+, 0.2 ml of 15% ethanol is delivered into a fluid port for oral consumption. The second stimulus, the CS-, is not paired with ethanol. Across sessions, entries into the fluid port during the CS+ increase, whereas entries during the CS- stabilize at a lower level, indicating that a predictive association between the CS+ and ethanol is acquired. During PDT each chamber is equipped with a specific configuration of visual, olfactory and tactile contextual stimuli. Following PDT, extinction training is conducted in the same chamber that is now equipped with a different configuration of contextual stimuli. The CS+ and CS- are presented as before, but ethanol is withheld, which causes a gradual decline in port entries during the CS+. At test, rats are placed back into the PDT context and presented with the CS+ and CS- as before, but without ethanol. This manipulation triggers a robust and selective increase in the number of port entries made during the alcohol predictive CS+, with no change in responding during the CS-. This effect, referred to as context-induced renewal, illustrates the powerful capacity of contexts associated with alcohol consumption to stimulate alcohol-seeking behavior in response to Pavlovian alcohol cues.

A procedure to study the capacity of an alcohol associated environmental context to trigger the renewal of alcohol-seeking behavior in rats is described.

Un procedimiento para observar inducida Contexto-Renovación-pavloviano acondicionado Alcohol comportamiento de búsqueda en ratas

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to drugs of abuse make lasting alterations in the brain function of vulnerable individuals, and these persistent alterations likely serve to maintain the maladaptive drug seeking and taking behaviors characteristic of addiction/dependence2. In rodents, reward experience and contextual associations are frequently measured using the conditioned place preference assay, or CPP, wherein preference for a previously drug-paired context is measured. Behavioral sensitization, on the other hand, is an increase in a drug-induced behavior that develops progressively over repeated exposures. Since sensitized behaviors can often be measured after several months of drug abstinence, depending on the dose and length of initial exposure, they are considered observable correlates of lasting drug-induced plasticity. Researchers have found these assays useful in determining the neurobiological substrates mediating aspects of addiction as well as assessing the potential of different interventions in disrupting these behaviors. This manuscript describes basic, effective protocols for mouse CPP and locomotor behavioral sensitization to cocaine.

This protocol is intended to enable researchers to conduct experiments designed to test these aspects of addiction using the conditioned place preference and locomotor behavioral sensitization assays.

Evaluación del comportamiento de sensibilización inducida por la cocaína y la preferencia de lugar condicionado en ratones

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to ...

Place and Response Learning in the Open-field Tower Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for examining how rats learn to use a place- or response-learning to successfully navigate in an open-field arena. Additionally, this protocol describes how the OFTM differs from other behavioral maze paradigms that are commonly used to study spatial learning in rodents. The OFTM described in this article was adapted from the one previously described by Cole, Clipperton, and Walt (2007). Specifically, the OFTM was created to test spatial learning in rodents without the experimenter having to consider how &#8220;stress&#8221; might play a role as a confounding variable. Experiments have shown that stress-alone can significantly affect cognitive function1. The representative results section contains data from an experiment that used the OFTM to examine the effects of estradiol treatment on place- and response-learning in adult female Sprague Dawley rats2. Future studies will be designed to examine the role of the hippocampus and striatum in place- and response-learning in the OFTM.

The Open-field Tower Maze (OFTM) is a maze created to study the behavioral and neural mechanisms of spatial learning (e.g., place- or response-learning) in rats. This maze is especially useful for experimenters who want to use a non-stressful maze paradigm to investigate spatial learning in their research.

Coloque y Aprendizaje de respuesta en el Abierto de campo Torre Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for ...

Examining Recall Memory in Infancy and Early Childhood Using the Elicited Imitation Paradigm

The ability to recall the past allows us to report on details of previous experiences, from the everyday to the significant. Because recall memory is commonly assessed using verbal report paradigms in adults, studying the development of this ability in preverbal infants and children proved challenging. Over the past 30 years, researchers have developed a non-verbal means of assessing recall memory known as the elicited or deferred imitation paradigm. In one variant of the procedure, participants are presented with novel three-dimensional stimuli for a brief baseline period before a researcher demonstrates a series of actions that culminate in an end- or goal-state. The participant is allowed to imitate the demonstrated actions immediately, after a delay, or both. Recall performance is then compared to baseline or to performance on novel control sequences presented at the same session; memory can be assessed for the individual target actions and the order in which they were completed. This procedure is an accepted analogue to the verbal report techniques used with adults, and it has served to establish a solid foundation of the nature of recall memory in infancy and early childhood. In addition, the elicited or deferred imitation procedure has been modified and adapted to answer questions relevant to other aspects of cognitive functioning. The broad utility and application of imitation paradigms is discussed, along with limitations of the approach and directions for future research.

The elicited imitation procedure was established to examine the development of recall memory in infancy and early childhood. This procedure has been widely used to establish a solid foundation of the nature of recall memory in infancy and early childhood.

El examen de recuperación de memoria en la infancia y la niñez Uso de la imitación provocada Paradigma

The ability to recall the past allows us to report on details of previous experiences, from the everyday to the significant. Because recall memory is ...

Using Eye Movements Recorded in the Visual World Paradigm to Explore the Online Processing of Spoken Language

In a typical eye tracking study using the visual world paradigm, participants' eye movements to objects or pictures in the visual workspace are recorded via an eye tracker as the participant produces or comprehends a spoken language describing the concurrent visual world. This paradigm has high versatility, as it can be used in a wide range of populations, including those who cannot read and/or who cannot overtly give their behavioral responses, such as preliterate children, elderly adults, and patients. More importantly, the paradigm is extremely sensitive to fine grained manipulations of the speech signal, and it can be used to study the online processing of most topics in language comprehension at multiple levels, such as the fine grained acoustic phonetic features, the properties of words, and the linguistic structures. The protocol described in this article illustrates how a typical visual world eye tracking study is conducted, with an example showing how the online processing of some semantically complex statements can be explored with the visual world paradigm.

The visual world paradigm monitors participants' eye movements in the visual workspace as they are listening to or speaking a spoken language. This paradigm can be used to investigate the online processing of a wide range of psycholinguistic questions, including semantically complex statements, such as disjunctive statements.

Utilizar movimientos oculares registrados en el paradigma de mundo Visual para explorar el procesamiento en línea del lenguaje hablado

In a typical eye tracking study using the visual world paradigm, participants' eye movements to objects or pictures in the visual workspace are recorded ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed incubation of drug craving. Here, we describe a morphine conditioned place preference (CPP) protocol for measuring the incubation of craving in rats. In this protocol, a CPP paradigm mainly employing somatosensory cues is used to establish a long-term reward memory of morphine. A three-chamber CPP box that differs in the texture of the chamber floor is constructed. First, the animals are tested for their baseline preference to the two side chambers for three consecutive days. Then, they are injected intraperitoneally with morphine/saline and put into their non-preferred/preferred chamber for 45 min. After 6 days of conditioning, their preference to the side chambers is tested for 15 min at different time points after the last conditioning session. With this paradigm, the reward memory of morphine could last for at least 18 days. To test whether the above-mentioned protocol can model increased craving, the number of entrances into the two side chambers are counted during the abstinence period. The results show that the entrances increased, suggesting that the CPP paradigm could mimic the incubation of craving. Future studies can employ this model to study neural mechanisms underlying long-term memory and incubation of craving.

Here, a morphine conditioned place preference (CPP) protocol is described to measure incubation of craving in rats.

Un protocolo de preferencia de lugar condicionada para medir la incubación de antojo en ratas

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

Using the Visual World Paradigm to Study Sentence Comprehension in Mandarin-Speaking Children with Autism

Sentence comprehension relies on the ability to rapidly integrate different types of linguistic and non-linguistic information. However, there is currently a paucity of research exploring how preschool children with autism understand sentences using different types of cues. The mechanisms underlying sentence comprehension remains largely unclear. The present study presents a protocol to examine the sentence comprehension abilities of preschool children with autism. More specifically, a visual world paradigm of eye-tracking is used to explore the moment-to-moment sentence comprehension in the children. The paradigm has multiple advantages. First, it is sensitive to the time course of sentence comprehension and thus can provide rich information about how sentence comprehension unfolds over time. Second, it requires minimal task and communication demands, so it is ideal for testing children with autism. To further minimize the computational burden of children, the present study measures eye movements that arise as automatic responses to linguistic input rather than measuring eye movements that accompany conscious responses to spoken instructions.

We present a protocol to examine the use of morphological cues during real-time sentence comprehension by children with autism.

Utilizando el paradigma de mundo Visual para el estudio de comprensión de la frase en mandarín-los niños con autismo

Sentence comprehension relies on the ability to rapidly integrate different types of linguistic and non-linguistic information. However, there is ...

Exploring Infant Sensitivity to Visual Language using Eye Tracking and the Preferential Looking Paradigm

We discuss the use of the preferential looking paradigm in eye tracking studies in order to study how infants develop, understand, and attend to the world around them. Eye tracking is a safe and non-invasive way to collect gaze data from infants, and the preferential looking paradigm is simple to design and only requires the infant to be attending to the screen. By simultaneously showing two visual stimuli that differ in one dimension, we can assess whether infants show different looking behavior for either stimulus, thus demonstrating sensitivity to that difference. The challenges in such experimental approaches are that experiments must be kept brief (no more than 10 min) and be carefully controlled such that the two stimuli differ in only one way. The interpretation of null results must also be carefully considered. In this paper, we illustrate a successful example of an infant eye tracking study with a preferential looking paradigm to discover that 6-month-olds are sensitive to linguistic cues in a signed language despite having no prior exposure to signed language, suggesting that infants possess intrinsic or innate sensitivities to these cues.

Eye tracking studies using a preferential looking paradigm can be used to study infants&#39;&#160;emerging understanding of, and attention to, their external visual world.

Explorar la sensibilidad infantil al lenguaje visual mediante el seguimiento ocular y el paradigma de aspecto preferencial

We discuss the use of the preferential looking paradigm in eye tracking studies in order to study how infants develop, understand, and attend to the world ...